检索结果-内蒙古大学图书馆

丙型肝炎病毒多细胞毒性T淋巴细胞表位DNA疫苗诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞反应

中华肝脏病杂志 2006年第5期14卷 385-386页

作者：史霖刘珊胜利孟照俊袁育康西安交通大学医学院免疫及病原微生物学系 710061 海南医学院微生物学及免疫学教研室

本研究通过构建含有两个丙型肝炎病毒（HCV）细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位（Core133-142和El315-322）的多HCVCTL表位DNA疫苗，用其免疫小鼠，研究其引起的特异性CTL应答，以明确由多个HCVCTL表位基因编码直接连接构成的多CTL表位DNA... 详细信息

本研究通过构建含有两个丙型肝炎病毒（HCV）细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位（Core133-142和El315-322）的多HCVCTL表位DNA疫苗，用其免疫小鼠，研究其引起的特异性CTL应答，以明确由多个HCVCTL表位基因编码直接连接构成的多CTL表位DNA疫苗，其各个HCVCTL表位是否能独立表达，引起各自相应的特异性CTL应答，且多个CTL的联合作用能否能增强总体的CTL杀伤效应，为构建有效安全的多CTL表位DNA疫苗提供理论基础。

关键词：肝炎病毒,丙型表位,T淋巴细胞 DNA疫苗

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金黄色葡萄球菌中PVL基因与噬菌体DNA的同源性

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微生物学通报 2004年第1期31卷 60-64页

作者：邹丹金子淳神尾好是东南大学基础医学院病原生物学与免疫学南京210009 东北大学农学部应用微生物学系日本仙台9818555

为了探讨金黄色葡萄球菌PVL基因与噬菌体的相关性 ,从 4株含有PVL基因的菌株中分离出DNA ,用HindⅢ或EcoRⅠ酶切后 ,分别与PVL和LukM lukF PV探针进行Southern印迹杂交 ,以及对含有PVL基因及其下游区域的片段克隆、测序和同源性分析。... 详细信息

为了探讨金黄色葡萄球菌PVL基因与噬菌体的相关性 ,从 4株含有PVL基因的菌株中分离出DNA ,用HindⅢ或EcoRⅠ酶切后 ,分别与PVL和LukM lukF PV探针进行Southern印迹杂交 ,以及对含有PVL基因及其下游区域的片段克隆、测序和同源性分析。结果表明3株菌的PVL基因及其下游区域的序列与V8菌株噬菌体PVL的PVL基因及其下游噬菌体attsite的序列一致。另一菌株的LukM lukF PV基因与PVL的PVL基因有 78%的同源性 ,并且在LukM lukF PV基因的下游区域发现与金黄色葡萄球菌噬菌体1 1整合位点有 98%同源性的序列 ,根据PVL基因存在于噬菌体的基因组上 ,推测可通过噬菌体转导在金黄色葡萄球菌中传播。

关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体 PVL基因 LukM-lukF-PV基因 att site

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携带脑组织特异性microRNA靶序列的重组日本脑炎病毒的构建与鉴定

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解放军医学杂志 2014年第6期39卷 429-432页

作者：曹文媛叶青李晓峰王洪江朱舜亚秦鄂德江振友秦成峰暨南大学医学院微生物学与免疫学系广州510632 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RN... 详细信息

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RNA转染BHK-21细胞,37℃、5%CO2孵箱培养3d后取上清盲传1代观察细胞病变,并通过RT-PCR、细胞蚀斑形成实验和病毒生长曲线等方法对恢复病毒的生物学特性进行鉴定。结果成功在BHK-21细胞中拯救获得了携带miRNA靶序列的重组病毒,与野生型病毒株具有相似的蚀斑形态和生长特性。结论通过反向遗传学技术获得了携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒,为miRNA介导的组织特异性减毒机制研究奠定了基础。

关键词：微RNAs 脑炎病毒,日本感染性克隆疫苗

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江苏籍大学新生健康素养现况及影响因素分析

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中华疾病控制杂志 2017年第7期21卷 710-713页

作者：杜国平颜文娟李小杉嵇昱葛尤张跃进卫平民高蓉东南大学医院内科江苏南京210018 东南大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系江苏南京210009 东南大学医学院病原微生物学与免疫学系江苏南京210009

目的了解江苏籍大一新生健康素养现况,分析其影响因素,为针对性开展学生健康教育提供依据。方法多阶段分层整群抽取江苏省9所本科院校和5所高职院校的7 560名江苏籍一年级学生,通过自填问卷调查健康素养现状。采用X^2检验和多因素Logis... 详细信息

目的了解江苏籍大一新生健康素养现况,分析其影响因素,为针对性开展学生健康教育提供依据。方法多阶段分层整群抽取江苏省9所本科院校和5所高职院校的7 560名江苏籍一年级学生,通过自填问卷调查健康素养现状。采用X^2检验和多因素Logistic回归模型分析健康素养的影响因素。结果 7 560名江苏籍大学新生健康素养具备率为40.4%,健康素养基本知识、健康生活方式和行为、健康素养基本技能3个维度具备率分别为56.9%、34.2%和76.1%。本科院校和高职院校学生健康素养具备率分别为44.2%和32.2%,差异有统计学意义(X^2=98.302,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示女生(OR=1.7)、独生子女(OR=1.5)、汉族学生(OR=1.8)、文科生(OR=1.5)、理科生(OR=1.5)和父亲文化程度为大专及以上的学生(OR=1.3)健康素养具备率更高。结论江苏籍大一新生健康素养具备率高于全国水平,但不同人口特征的大学生健康素养发展不均衡,应在青少年学生中有针对性地开展健康教育与健康促进活动,进一步提升健康素养水平。

关键词：健康促进知识学生回归分析

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反义RNA阻断Hep G2细胞FasL的表达及功能研究

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上海免疫学杂志 2003年第1期23卷 16-19,57页

作者：张天祥郭礼和蔡仙德苏宁王立新东南大学医学院微生物学与免疫学系南京210009 中科院上海生化细胞研究所上海200031

应用分子克隆技术将人FasLcDNA片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN ,构建重组质粒pL (hFasL AS )SN ,转染包装细胞PA317后获得FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体假病毒上清 ,经NIH3T3细胞检测其感染滴度后转染肝癌细胞株HepG2细胞并筛选... 详细信息

应用分子克隆技术将人FasLcDNA片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN ,构建重组质粒pL (hFasL AS )SN ,转染包装细胞PA317后获得FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体假病毒上清 ,经NIH3T3细胞检测其感染滴度后转染肝癌细胞株HepG2细胞并筛选建系 ,命名为HepG2 hFasL AS。半定量RT PCR检测显示HepG2 FasL AS细胞FasL的mRNA明显少于正常HepG2细胞 ;FACS检测显示HepG2 FasL AS细胞FasL的表达与HepG2细胞相比显著下降 ;同时 ,HepG2 FasL AS细胞导致HL 6 0细胞凋亡能力有所下降。

关键词：反义RNA技术 HepG2细胞 FasL 细胞凋亡

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lncRNA在结核病患者外周血的差异性表达

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中国病原生物学杂志 2017年第4期12卷 328-334,340页

作者：赵继利刘微曹帅丽屈艳琳崔庆华袁俐石河子大学医学院病原微生物学与免疫学教研室新疆石河子832000 北京大学医学部基础医学院医学信息学系北京100191

目的比较活动性肺结核患者、潜伏感染者与健康对照者外周血结核分枝杆菌特异性抗原刺激前后lncRNA1和lncRNA2的差异性表达,探讨其作为诊断结核分枝杆菌感染生物标志物的可能性。方法收集活动性肺结核患者、潜伏感染者和健康对照者全血,... 详细信息

目的比较活动性肺结核患者、潜伏感染者与健康对照者外周血结核分枝杆菌特异性抗原刺激前后lncRNA1和lncRNA2的差异性表达,探讨其作为诊断结核分枝杆菌感染生物标志物的可能性。方法收集活动性肺结核患者、潜伏感染者和健康对照者全血,分别在特异性抗原刺激前后提取RNA,利用实时荧光定量PCR方法检测lncRNA1和lncRNA2的mRNA表达水平。应用ELISA检测血浆中IFN-γ和IL-2含量。结果结核分枝杆菌特异性抗原刺激前,结核病组、潜伏感染组全血lncRNA1相对表达量较健康对照组分别下降32%和64%;lncRNA2结核病组相对表达量是健康对照组的6.10倍;抗原刺激后,结核病组、潜伏感染组lncRNA1相对表达量较健康对照组分别下降33%和77%,lncRNA2潜伏感染组相对表达量较健康对照组下降84%。与刺激前相比,抗原刺激后健康对照组、结核病组lncRNA1相对表达量分别提高1.80倍和2.80倍,lncRNA2健康对照组、潜伏感染组分别提高3.50倍和1.86倍(P<0.05)。健康组与潜伏感染组、结核病组与潜伏感染组、健康组与结核病组lncRNA1ROC曲线下面积(AUC)分别为0.700、0.752和0.400,lncRNA2的AUC分别为0.702、0.465和0.762。在结核特异性蛋白刺激前,结核病组IFN-γ、IL-2含量均高于健康组(P<0.05),刺激后,结核病组及潜伏感染组与健康组相比较、潜伏感染组与结核病组相比较IFN-γ均增高(P<0.05)。与刺激前相比,刺激后3组IFN-γ、IL-2诱导表达量均显著增高(P<0.05)。结论活动性结核病、潜伏感染和健康对照者全血结核特异性抗原刺激前后lncRNA1和lncRNA2均出现差异性表达,结核病及潜伏感染者血浆IFN-γ含量增高。lncRNA1和lncRNA2可能是诊断肺结核感染的潜在生物标志物。

关键词：肺结核结核分枝杆菌潜伏感染长链非编码RNA 荧光定量PCR

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间接法和捕捉法检测特异性IgM的敏感性与特异性的比较

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西安交通大学学报（医学版） 2008年第5期29卷 539-542页

作者：马列婷王亚文杨朵袁育康西安交通大学医学院第一附属医院检验科陕西西安710061 西安交通大学医学院免疫学与病原微生物学系陕西西安710061

目的比较捕捉法和间接法检测IgM时的特异性和敏感度差异,并探讨其产生差异的原因。方法分别用间接ELISA法和捕捉ELISA法检测活动性乙型肝炎和肾综合征出血热(HFRS)患者标本的IgM水平,并比较两者之间检出率、检测阈值、特异性的差异。结... 详细信息

目的比较捕捉法和间接法检测IgM时的特异性和敏感度差异,并探讨其产生差异的原因。方法分别用间接ELISA法和捕捉ELISA法检测活动性乙型肝炎和肾综合征出血热(HFRS)患者标本的IgM水平,并比较两者之间检出率、检测阈值、特异性的差异。结果检测稀释在PBS中的鼠抗IgM特异性抗体,两种方法的特异性和敏感度类似;检测活动性乙型肝炎和HFRS患者标本,间接法检测IgM的敏感度明显低于捕捉法;检测经二巯基乙醇处理后乙肝组和HFRS组标本,两种检测均为阴性,表明两种方法都具有针对IgM抗体的型特异性;交叉实验结果证明两种检测IgM的试剂均具有针对抗原的特异性。结论急性感染疾病的早期诊断、病毒的潜伏期感染和慢性感染的再次激活应使用捕捉法检测IgM,间接法检测IgM用于急性感染性疾病的诊断有待进一步探讨。

关键词：乙型病毒性肝炎肾综合征出血热间接ELISA 捕捉ELISA IgM

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sRNA_EsR240调控迟缓爱德华菌胞内生存及其毒力

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东南大学学报（医学版） 2019年第4期38卷 563-571页

作者：张圆圆夏养敏贾莹婷朱运霈王燕房正邹高大庆陆承平东南大学医学院病原微生物学和免疫学系江苏南京210009 南京农业大学动物医学院微生物学和免疫学系江苏南京210095

目的:探讨非编码小RNA(sRNA_EsR240)调控迟缓爱德华菌( Edwardsiella tarda , Et )胞内生存和毒力的作用。方法:根据转录组测序,结合生物信息学方法分析ET13菌sRNA。采用RT - PCR检测在不同应激(低酸、营养缺乏、氧化和高盐)条件下sRNA... 详细信息

目的:探讨非编码小RNA(sRNA_EsR240)调控迟缓爱德华菌( Edwardsiella tarda , Et )胞内生存和毒力的作用。方法:根据转录组测序,结合生物信息学方法分析ET13菌sRNA。采用RT - PCR检测在不同应激(低酸、营养缺乏、氧化和高盐)条件下sRNA的转录水平,筛选高表达的sRNA;Northern blotting和RACE试验检测EsR240的长度及转录起始和终止位点。采用BLAST软件对EsR240的保守性进行分析;IntaRNA软件预测EsR240靶基因;qRT - PCR检测这些靶基因的表达水平。采用自杀质粒同源重组的方法构建ET13菌的EsR240缺失株和互补株。比较野生株ET13、EsR240缺失株和互补株在胞外不同应激条件下的存活率,及其在巨噬细胞胞内存活能力和对小鼠毒力的差异。结果:根据ET13菌RNA测序的结果,与蛋白库注释基因相比对;比对不上的候选sRNA与sRNA库比对;用软件发现13个具有启动子和ρ-非依赖型终止子新的sRNA,RT - PCR显示其中8个sRNA在各种应激条件下的转录水平不一,EsR128、EsR139和EsR240转录水平均较高。Northern blotting验证了EsR240在 Et 生长期和稳定期均转录,大小是596 bp。RACE试验确定了EsR240的转录起始和终止位点。BLAST软件分析显示,EsR240在 Et 中普遍存在,符合sRNA的特征。 IntaRNA软件预测EsR240靶基因及qRT - PCR结果显示,EsR240调控大部分预测靶基因的表达,这些靶基因注释可能为三磷酸腺苷结合盒(ATP binding cassette,ABC)- F转运体、FtsH蛋白酶的调控子YccA、Na +/H +反向转运体和糖苷水解酶等;在不同条件下,EsR240调控靶基因数目不同。EsR240的缺失明显影响 Et 在胞外不同应激条件下存活率和胞内生存能力,而且影响 Et 对小鼠的毒力。结论: EsR240通过调控靶基因影响 Et 的胞内生存,是一个正调控 Et 对小鼠毒力的sRNA。

关键词：迟缓爱德华菌 RNA测序胞内生存非编码小RNA 毒力

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肿瘤细胞来源自噬小体(TDA)调控巨噬细胞功能及其分子机制研究

肿瘤细胞来源自噬小体(TDA)调控巨噬细胞功能及其分子机制研究

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第九届全国免疫学学术大会

作者：文志发刘宏翔周猛王立新东南大学医学院微生物学与免疫学系

研究背景:自噬小体是直径在300-800nm之间的具有双层膜结构的微粒,前期研究我们发现用自噬诱导剂处理肿瘤细胞后,可以在上清及细胞表面提取到富含自噬小体的微粒（TDA）,同时在临床肿瘤病人腹水中也提取到了富含自噬小体的微粒。肿瘤相... 详细信息

研究背景:自噬小体是直径在300-800nm之间的具有双层膜结构的微粒,前期研究我们发现用自噬诱导剂处理肿瘤细胞后,可以在上清及细胞表面提取到富含自噬小体的微粒（TDA）,同时在临床肿瘤病人腹水中也提取到了富含自噬小体的微粒。肿瘤相关巨噬细胞（TAM）主要呈现M2型特征,在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。肿瘤的快速生长常伴随缺氧和缺营养,自噬也随之发生,那么,自噬小体能否释放到肿瘤微环境中,并对免疫细胞（巨噬细胞）的功能发挥调节作用呢?目的:本研究以小鼠淋巴瘤细胞EG7为肿瘤模型,以小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDM）为研究对象,探讨肿瘤细胞来源自噬小体对巨噬细胞功能的调控作用及其分子机制。方法:用自噬诱导剂处理细胞,差速离心法分离并提取EG7细胞释放的自噬小体,并与BMDM共孵育48h,收集细胞及培养上清,FACS检测巨噬细胞表面MHCⅡ类分子、共刺激分子CD86和CD206的表达,ELISA法检测上清中的IL-6、IL-12p70和IL-10,qRT-PCR法检测NOS2和Arg-1基因的mRNA表达水平;腹腔注射自噬小体,1周后取出腹腔巨噬细胞,再采用LPS体外刺激,FACS检测LPS刺激前后巨噬细胞表面MHCⅡ类分子、共刺激分子CD86和CD206的表达;将自噬小体分别与TLR4、TLR2、MyD88基因敲除小鼠及WT小鼠BMDM共孵育48h,收集细胞及培养上清,FACS检测巨噬细胞表面CD206的表达,ELISA法检测上清中的IL-6、IL-12p70和IL-10。结果:与未刺激组相比,自噬小体能显著上调BMDM表面分子CD206的表达,而不能上调MHCⅡ类分子和CD86的表达,上清中IL-10的表达量显著升高,并呈一定的剂量依赖关系,而IL-6和IL-12p70没有变化,另外,自噬小体对NOS2和Arg-1基因的mRNA表达无影响;与PBS组相比,腹腔注射自噬小体后,腹腔巨噬细胞表面分子CD206的表达显著上调,并呈一定的剂量依赖关系,而MHCⅡ类分子和CD86无显著变化,经LPS体外再刺激后,实验组能显著抑制MHCⅡ类分子和CD86的表达;与WT小鼠及TLR2小鼠相比,自噬小体不能上调TLR4、MyD88敲除小鼠BMDM表面分子CD206的表达,且上清中IL-10的含量显著下降。结论:肿瘤细胞来源的自噬小体（TDA）能诱导巨噬细胞极化为M2-like型巨噬细胞,并与TLR4-MyD88信号通路有关。而极化的具体分子机制还有待进一步研究。

关键词：肿瘤细胞自噬小体巨噬细胞极化 TLR

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巨噬细胞促进肿瘤细胞来源自噬小体(DRibbles)活化B细胞及其机制研究

巨噬细胞促进肿瘤细胞来源自噬小体(DRibbles)活化B细胞及其机制...

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第八届全国免疫学学术大会

作者：李卫霞周猛任宏艳曹萌程莹王立新东南大学医学院微生物学与免疫学系

研究背景:以往研究我们发现,肿瘤细胞来源的、具有双层膜结构的自噬小体DRibbles(DRips in Blebs),含有阻断蛋白酶体降解途径而残留的废蛋白(defective ribosome products,DRips),是"交叉提呈"肿瘤抗原的有效载体,能诱导肿瘤... 详细信息

研究背景:以往研究我们发现,肿瘤细胞来源的、具有双层膜结构的自噬小体DRibbles(DRips in Blebs),含有阻断蛋白酶体降解途径而残留的废蛋白(defective ribosome products,DRips),是"交叉提呈"肿瘤抗原的有效载体,能诱导肿瘤抗原特异性T细胞应答。近期实验发现DRibbles能诱导B细胞活化并产生Ig M抗体,该活化作用主要依赖DRibbles中的蛋白质成分、并通过TLR-2/MYD88信号途径。但DRibbles活化B细胞是否需要其他细胞(如巨噬细胞)的辅助及其机制还不清楚。目的:本课题以肝癌细胞为肿瘤模型,以小鼠B细胞和巨噬细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞来源自噬小体(DRibbles)诱导B细胞活化过程中巨噬细胞的辅助作用及作用机制。方法:1分离提取Hep1-6细胞DRibbles,并与小鼠脾细胞、B细胞共孵育,收集细胞及培养上清,流式细胞仪检测B细胞增殖及表面共刺激分子的表达,ELISA法检测上清中Ig M;2分离纯化小鼠B细胞、T细胞和巨噬细胞,并将DRibbles与B细胞、T细胞或巨噬细胞与共孵育,流式细胞术检测B细胞表面共刺激分子,ELISA法检测培养上清Ig M和IL-10;3将B细胞与巨噬细胞用Transwell隔离,并加入DRibbles共培养,检测上述指标的变化。结果:1 DRibbles能诱导纯化B细胞的活化并分泌Ig M,其分泌Ig M的水平明显低于全脾细胞;2去除全脾细胞中的T细胞不影响脾细胞分泌Ig M;纯化B细胞加入T细胞共培养后也不能提高B细胞Ig M分泌水平;3与单独B细胞加DRibbles相比,纯化B细胞加入巨噬细胞共培养则显著提高B细胞Ig M和IL-10分泌水平、显著上调B细胞CD40/CD40L表达水平;4 Transwell实验显示,将B细胞与巨噬细胞隔离培养,巨噬细胞上调B细胞CD40/CD40L表达的作用消失,且Ig M和IL-10分泌水平与共同培养组相比也显著下降。结论:巨噬细胞(而否T细胞)能促进DRibbles诱导的B细胞活化,其主要机制是通过CD40/CD40L相关的直接接触方式。

关键词：肿瘤细胞巨噬细胞自噬小体 DRibbles 交叉提呈抗原

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