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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第2期19卷 172-175页

作者：林海孟继鸿东南大学医学院病原生物学和免疫学系南京210009

目的　建立一种新的基于PCR的乙型肝炎病毒(HBV)体外中和试验,将其用于HBV中和抗体的检测,为新型HBV疫苗的评估提供一种体外模型。方法　待检免疫血清与已知HBV作用后接种HepG2 细胞,吸附、洗涤、培养后提取细胞核酸,PCR检测HBVDNA以判... 详细信息

目的　建立一种新的基于PCR的乙型肝炎病毒(HBV)体外中和试验,将其用于HBV中和抗体的检测,为新型HBV疫苗的评估提供一种体外模型。方法　待检免疫血清与已知HBV作用后接种HepG2 细胞,吸附、洗涤、培养后提取细胞核酸,PCR检测HBVDNA以判断中和试验结果。结果　免疫血清与10倍最小PCR感染剂量的HBV作用后接种细胞,培养2 4h后检测表明,其中和滴度高,结果稳定。市售疫苗免疫小鼠血清、多数抗HBsELISA阳性人血清和2份含HBVS区的新型候选疫苗的免疫血清中和试验阳性,而正常小鼠血清、戊型肝炎病毒重组蛋白免疫血清和抗 HBs阴性人血清中和试验阴性。结论　基于PCR的HBV体外中和试验简单、快速、经济,具有良好的特异性和敏感性,可以用于新型HBV疫苗免疫效果的评估。

关键词：体外中和试验乙型肝炎病毒(HBV) 血清中和试验抗-HBs 免疫血清戊型肝炎病毒疫苗免疫效果小鼠血清 HBV疫苗 PCR检测 ELISA 中和抗体体外模型 G2细胞细胞核酸试验结果接种细胞感染剂量候选疫苗重组蛋白 Hep DNA

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不同基因型戊型肝炎病毒的抗原表位分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第10期23卷 817-821页

作者：梁久红孟继鸿赵宇戴星丁福张兰芳东南大学医学院病原生物学和免疫学系南京210009

目的　研究不同基因型戊型肝炎病毒 (HEV)的抗原表位特点。方法　以HEV基因工程重组蛋白p16 6Bur、p16 6Mex为免疫原 ,制备单克隆抗体 (McAbs)。采用间接ELISA法及免疫印迹法(Westernblot) ,检测所制备的McAbs与 7种不同基因型和亚型p16... 详细信息

目的　研究不同基因型戊型肝炎病毒 (HEV)的抗原表位特点。方法　以HEV基因工程重组蛋白p16 6Bur、p16 6Mex为免疫原 ,制备单克隆抗体 (McAbs)。采用间接ELISA法及免疫印迹法(Westernblot) ,检测所制备的McAbs与 7种不同基因型和亚型p16 6 (p16 6Bur、p16 6Pak、p16 6Mor、p16 6Mex、p16 6Us、p16 6Nz和p16 6Chn)的交叉反应性。结果　获得 4株稳定分泌基因型相关McAb的杂交瘤细胞株 ,即 1B5、1D1 0 、1G1 0 和D4 A3。经检测 ,1B5、1D1 0 、1G1 0 分泌的McAbs只与p16 6Bur及p16 6Mor特异结合 ,D4 A3分泌的McAb只与p16 6Mex特异结合。结论　不同基因型HEV存在不同的抗原表位。

关键词：不同基因型戊型肝炎病毒抗原表位单克隆抗体免疫印迹法 ELISA法

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人、猪、禽戊型肝炎病毒血清学关系的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第7期27卷 581-586页

作者：梁久红孟继鸿东南大学基础医学院病原生物学和免疫学系南京210009

目的研究人、猪、禽戊型肝炎病毒(HEV)的血清学关系。方法应用ELISA分别以人、猪、禽HEV ORF2重组蛋白p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清及其他标本中抗- HEV IgG,用SAS软件进行统计学分析,同时进行序列同源性比较。结... 详细信息

目的研究人、猪、禽戊型肝炎病毒(HEV)的血清学关系。方法应用ELISA分别以人、猪、禽HEV ORF2重组蛋白p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清及其他标本中抗- HEV IgG,用SAS软件进行统计学分析,同时进行序列同源性比较。结果p166human和p166swine对HEV实验感染动物血清、HEV ORF2重组蛋白免疫血清和单克隆抗体均呈阳性反应,而p268avian均呈阴性反应。以p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清抗-HEV IgG,戊型肝炎患者血清检出率分别为98.5%、97.7%和1.5%,正常人血清为10.0%、10.0%和4.0%,猪血清为26.9%、25.6%和1.3%,鸡血清为4.3%、2.2%和33.3%。p268avian与p166human或p166swine的检出率差异有统计学意义(P<0.001)。相关性分析表明,p166human和p166swine对不同样本的检测均呈直线正相关,而p268avian与p166human或p166swine无直线相关性。人和猪HEV pORF2的序列同源性在88.2%～99.2%,而禽HEV与人、猪HEV pORF2的同源性仅为45.5%～46.1%,其中含有多个插入和缺失突变。结论人和猪HEV血清学关系密切,而禽HEV与人、猪HEV抗原性差异有统计学意义,无血清学相关性。因此禽HEW与人、猪HEV的关系应予进一步考证。

关键词：人戊型肝炎病毒猪戊型肝炎病毒禽戊型肝炎病毒血清学关系

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小鼠白细胞介素21 cDNA的克隆及真核表达质粒的构建

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第1期20卷 49-52页

作者：陈国兵窦骏陈峻崧洪晓武东南大学医学院病原生物学和免疫学系江苏南京210009

目的 :克隆小鼠白细胞介素 2 1(IL 2 1)基因 ,构建真核表达质粒 ,用以进行肿瘤的基因治疗。方法 :用RT PCR法 ,从ConA活化的小鼠T细胞中扩增IL 2 1cDNA ,克隆入哺乳动物细胞高效表达质粒 pcDNA3.1中 ,构建重组mIL 2 1真核表达质粒。重... 详细信息

目的 :克隆小鼠白细胞介素 2 1(IL 2 1)基因 ,构建真核表达质粒 ,用以进行肿瘤的基因治疗。方法 :用RT PCR法 ,从ConA活化的小鼠T细胞中扩增IL 2 1cDNA ,克隆入哺乳动物细胞高效表达质粒 pcDNA3.1中 ,构建重组mIL 2 1真核表达质粒。重组体用载体上的通用引物和PCR下游引物为测序引物 ,鉴定克隆的正确性。将已鉴定的重组质粒用脂质体法转染Sp2 / 0细胞 ,用RT PCR法鉴定转染细胞中IL 2 1基因的表达 ,用MTT比色法检测表达的mIL 2 1诱导的NK细胞杀伤活性的增强。结果 :正确构建了重组真核表达质粒 pcD NA3.1/mIL 2 1,并在转染的细胞中检测出IL 2 1的表达 ,表达的mIL 2 1可在体外增强NK细胞的杀伤活性。结论 :成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1/mIL 2 1,为进一步在肿瘤动物模型中进行IL 2

关键词：白细胞介素21 RT-PCR 重组质粒

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联合输注Flt3-L和GM-CSF表达质粒体内诱导小鼠DC的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第6期26卷 515-517,521页

作者：苏舒薛萌曹萌王立新东南大学医学院病原生物学和免疫学系江苏南京210009

目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表... 详细信息

目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表面标志以鉴定DC的比例及亚型;将体内诱导DC与HBsAg共孵育,然后刺激HBsAg预免疫小鼠的脾细胞并检测其分泌IFN-的水平。结果:联合输注Flt3-L和GM-CSF质粒小鼠的脾细胞达到4×108个细胞/脾脏、其中CD11c+细胞占20%以上,CD11c+细胞中CD11b+、CD11b-、B220+、CD8+、NK1.1+细胞的比例分别达17%、10%、26%、16%、7%左右;体内诱导DC负载HB-sAg后刺激HBsAg特异性淋巴细胞分泌IFN-γ的水平明显高于HBsAg单独刺激组。结论:采用小鼠尾静脉注射技术输注Flt3-L及GM-CSF质粒能够诱导CD11c+ DC的产生并包含多种亚型,体内诱导DC具备有效的抗原提呈功能。

关键词： Flt3-L GM-CSF 真核表达质粒树突状细胞体内诱导小鼠

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戊型肝炎病毒摩洛哥株非编码区基因序列鉴定及基因型分型

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 828-833页

作者：陈国兵孟继鸿东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系南京210009

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)摩洛哥株非编码区 (UTR)序列 ,探讨HEV非编码区序列能否作为其基因型分型的依据。方法　使用基于RNA连接酶的cDNA末端快速扩增法 (RLM RACE)扩增HEV摩洛哥株 5′和 3′端片段并测序。所得序列使用LASERGENE... 详细信息

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)摩洛哥株非编码区 (UTR)序列 ,探讨HEV非编码区序列能否作为其基因型分型的依据。方法　使用基于RNA连接酶的cDNA末端快速扩增法 (RLM RACE)扩增HEV摩洛哥株 5′和 3′端片段并测序。所得序列使用LASERGENE和PHYLIP软件包与其他 2 9株HEV序列比较。结果　只有基于甲基化帽子结构的RLM RACE扩增出了 5′端片段。HEV摩洛哥株 5′端UTR有 2 6个核苷酸 ,3′端polyA之前有 6 5个核苷酸。基于 3′端UTR序列的进化树与基于全基因序列的进化树不全相同。HEV 3′端至少需要 10 0个左右核苷酸长的序列才可进行HEV基因型分型。结论　HEV摩洛哥株 5′端有甲基化帽子结构。HEV 3′端UTR序列不能完全代替全基因组序列进行基因型分型。部分序列替代全基因组进行基因型分型时需要考虑其部位和长度因素。

关键词： HEV 分型戊型肝炎病毒基因型非编码区基因序列核苷酸 RACE cDNA末端快速扩增进化树

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一种新型戊型肝炎病毒样颗粒的表达、纯化及其免疫原性

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 339-342页

作者：董晨孟继鸿东南大学医学院病原生物学与免疫学系江苏南京210009

目的：以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒（HEV）中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析.方法：将HEV开放阅读框架2（ORF2）编码452～617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a（＋）,转化大肠杆菌,获取表达克隆.以Ni-NTA... 详细信息

目的：以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒（HEV）中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析.方法：将HEV开放阅读框架2（ORF2）编码452～617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a（＋）,转化大肠杆菌,获取表达克隆.以Ni-NTA层析柱纯化表达的蛋白,并用SDS-PAGE、Western blot和直接电镜负染等方法分析鉴定,最后免疫小鼠检测特异性抗体的产生水平.结果：表达的重组蛋白天然可溶,相对分子质量（Mr）约为22 000,并可形成直径为20 nm左右的病毒样颗粒,能与戊型肝炎患者血清发生Westem blot阳性反应,免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性抗体.体外中和试验显示产生的抗体具有中和HEV的活性.结论：原核表达的、含HEV中和抗原表位的、长度仅166个氨基酸的HEV ORF2近3＇端编码蛋白能够形成病毒样颗粒,而且该新型病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性.

关键词：戊型肝炎病毒重组蛋白中和抗原表位病毒样颗粒

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GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第4期24卷 321-323,327页

作者：梁久红梁立敏董敏韩振格董晨孟继鸿东南大学医学院病原生物学与免疫学系江苏南京210009

目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中... 详细信息

目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELISA检测,鉴定mAb所识别的抗原表位。结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应。其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面天然存在的抗原表位,而是GST与HEV ORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。

关键词： GST融合表达戊型肝炎病毒单克隆抗体抗原表位

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肿瘤细胞及肿瘤干细胞3D培养应用研究进展

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中国免疫学杂志 2010年第10期26卷 953-956页

作者：陈峻崧窦骏东南大学医学院病原生物学与免疫学系南京210009

人体组织为三维(Three-dimensional,3D)结构,但是在人体组织结构、功能、病理研究时却往往依赖体外的二维(Two-dimensional,2D)培养和动物模型. 利用普通2D细胞培养来研究肿瘤发生发展机制与真实体内的环境有很大的不同,如细胞与细胞、... 详细信息

人体组织为三维(Three-dimensional,3D)结构,但是在人体组织结构、功能、病理研究时却往往依赖体外的二维(Two-dimensional,2D)培养和动物模型. 利用普通2D细胞培养来研究肿瘤发生发展机制与真实体内的环境有很大的不同,如细胞与细胞、细胞与基质间相互作用、细胞分化等[1]. 动物模型由于与人体存在种属差异,也不能很好的重复人体特征,如人类肿瘤生长转移、药物治疗反应、免疫反应和肿瘤干细胞(TSCs)分化等. 3D细胞培养技术简单易操作,能够模拟体内环境特征等优势,本文就3D细胞培养技术在肿瘤和TSCs应用研究,作一综述

关键词：肿瘤干细胞细胞培养肿瘤细胞人体组织结构应用肿瘤发生发展动物模型相互作用

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医学免疫学课程特点及学习要点

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中国免疫学杂志 2012年第8期28卷 755-756页

作者：窦骏东南大学医学院病原生物学与免疫学系南京210009

医学免疫学是生物学、基础医学、临床医学、预防医学和兽医学等学科中重要的核心课程[1],亦是参加执业医师考试必考的基础课程,其理论及技术在医学和生命科学相关领域已广泛应用[2]。可见,要想成为一名合格的医生,必须学好医学免疫学。... 详细信息

医学免疫学是生物学、基础医学、临床医学、预防医学和兽医学等学科中重要的核心课程[1],亦是参加执业医师考试必考的基础课程,其理论及技术在医学和生命科学相关领域已广泛应用[2]。可见,要想成为一名合格的医生,必须学好医学免疫学。笔者执教医学免疫学近30年,常受邀解答学生提出的各种疑问,现结合教学体会,谈几点看法供参考。

关键词：医学免疫学核心课程学习要点执业医师考试基础医学临床医学预防医学基础课程

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