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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第2期43卷 93-101页

作者：贾如斯辰力李明洋杨佳吴芯蕾朱珊丽温州医科大学第一临床医学院(信息与工程学院) 温州325035 武汉大学医学部基础医学院武汉430062 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学第二临床医学院温州325035

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,... 详细信息

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,提取两组总RNA后反转录并构建cDNA文库。通过高通量测序分析两组基因表达谱差异,并选择代表性基因通过实时荧光定量PCR(qPCR)验证。结果共检测23997个基因,差异基因125个,其中上调基因119个,下调基因6个;GO分析显示差异基因富集于对病毒防御反应、Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路、对Ⅰ型IFN的细胞反应等条目;KEGG富集通路为甲型流感、单纯疱疹病毒感染、EB病毒感染、HPV感染、NOD样受体通路等相关通路。结论人正常宫颈上皮细胞感染Ct前后转录组存在差异,差异基因主要富集于IFN通路,与细胞抗病毒过程密切相关。qPCR验证了ISG15、IFIT2、OASL、UBE2L6等差异显著且与IFN通路密切相关的基因。

关键词：沙眼衣原体宫颈上皮细胞转录组差异表达基因

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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定

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中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2763-2769页

作者：范振军张文婷张丽张俊爱赵祖国徐军发(指导) 广东医科大学医学技术学院检验医学研究所东莞523808 广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室东莞523808

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测... 详细信息

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×10^(5)左右,亲和力为3.72×10^(-9)kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。

关键词： B7-H4 嵌合抗体抗体表位 T细胞增殖

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沙眼衣原体质粒蛋白3致病机制的研究进展

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国际生物制品学杂志 2024年第4期47卷 245-251页

作者：吴芯蕾朱润泽朱珊丽温州医科大学第二临床医学院温州325035 眼视光学院(生物医学工程学院) 温州325035 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生... 详细信息

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生殖道输卵管的病变,表明Pgp3在CT致病中起重要作用。Pgp3通过抑制宿主细胞凋亡、改善宿主细胞生存状态以及抑制人类抗菌肽等多种机制,维持CT生存并促进其感染上行。Pgp3还可通过促进CT转移并定植于胃肠道,建立CT的持续感染。此外,Pgp3通过诱导产生炎症因子等方式促进炎症的发生发展。因此,Pgp3是CT致病的重要毒力因子。此文就Pgp3对CT致病机制的研究进展作一综述。

关键词：沙眼衣原体质粒质粒蛋白3

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人巨细胞病毒感染对单核细胞功能的影响

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病毒学报 2019年第6期35卷 907-918页

作者：施昕妤郭刚强林康明李宝青薛向阳章慧娣温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学附属第二医院检验科温州325000 温州医科大学附属第一医院肾内科温州325000

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(... 详细信息

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库筛选HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的基因芯片,通过生物信息学方法对HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的功能影响进行详细的阐述及比较分析,并用定量反转录聚合酶连锁反应(quantificational reverse transcription polymerase chain reaction,qRTPCR)验证HCMV感染人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)4h、24h和48h后白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-a、IL-10的表达。结果表明HCMV感染单核细胞4h后参与信号转导、炎症反应、免疫反应、防御病毒反应和趋化反应等17个通路,且可能与病理学过程/疾病、病毒疾病、RNA病毒感染和免疫系统疾病等相关。HCMV感染单核细胞24h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)、结缔组织疾病和自身免疫性疾病等10种疾病相关。HCMV感染单核细胞48h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与结缔组织疾病、病理学过程和SLE等10个疾病相关。qRT-PCR结果显示HCMV感染THP-1细胞4h、24h和48h后IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10的表达增加。本研究表明HCMV感染主要引起炎症反应及趋化反应,并可能与自身免疫性疾病或SLE高度相关。

关键词：人巨细胞病毒(HCMV) 单核细胞炎症反应趋化反应

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人巨细胞病毒临床株UL133基因序列遗传变异分析

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中国病原生物学杂志 2016年第7期11卷 584-589,595页

作者：郭刚强叶思思杨敏叶璐璐林刻智李宝青张丽芳薛向阳温州医科大学微生物学和免疫学教研室浙江温州325035 温州医科大学第二临床医学院浙江温州325035 温州医科大学基础医学实验中心浙江温州325035 温州医科大学附属第二医院检验科浙江温州325000

目的研究人巨细胞病毒（HCMV）临床感染株的UL133基因序列特征。方法采集HCMV-DNA阳性者的临床标本,PCR扩增UL133基因全序列,阳性扩增产物克隆到pEASYTM载体后进行序列测定,结合来自于NCBI数据库的15条序列进行UL133基因多态性分析。结... 详细信息

目的研究人巨细胞病毒（HCMV）临床感染株的UL133基因序列特征。方法采集HCMV-DNA阳性者的临床标本,PCR扩增UL133基因全序列,阳性扩增产物克隆到pEASYTM载体后进行序列测定,结合来自于NCBI数据库的15条序列进行UL133基因多态性分析。结果获得20例HCMV感染者的UL133全长序列。多态性分析显示HCMV临床株UL133基因核苷酸变异率为0～9.7%,氨基酸变异率为0～40.2%;不同感染者UL133序列5＇端的第32-45位发生了相对集中的非同义突变,其他部分序列较少出现氨基酸缺失及错义突变。其中1例临床感染者UL133序列在163-166位核苷酸出现移码突变。综合NCBI数据库的15株序列分析显示,UL133序列分为G1、G2、G3、G4、G5、G6等6个型,但未发现基因型与HCMV感染的临床表现具有显著关联性。编码蛋白翻译后修饰位点包括酪蛋白激酶磷酸化位点（CKP）,蛋白激酶C位点（PKC）以及NLS_BP核定位信号（NLS_BP）。与Toledo株相比,有1株发生移码突变,其他临床株UL133基因编码产物翻译后修饰位点相对保守。结论 HCMV UL133基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列高度保守,但仍具有一定的多态性。这种多态性与HCMV感染临床症状的关系尚待进一步研究。

关键词：人巨细胞病毒 UL133基因多态性

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小球藻兔防御素NP-1抗菌机制初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第10期33卷 756-760页

作者：田新利王新胡天驹白丽莉张浩陈宇红朱萌赵朕龙高萌徐超胡赞民彭宜红北京大学基础医学院病原生物学系 100191 邢台医学高等专科学校微生物学和免疫学教研室 054000 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子农业研究中心

目的：初步探讨小球藻表达的兔防御素NP-1的抗菌机制。方法通过液体培养抑制测定法、阳离子中和试验和扫描电镜技术，分别测定小球藻表达的兔防御素NP-1对临床分离的1株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）和1株多重耐药铜绿假单胞菌（ M... 详细信息

目的：初步探讨小球藻表达的兔防御素NP-1的抗菌机制。方法通过液体培养抑制测定法、阳离子中和试验和扫描电镜技术，分别测定小球藻表达的兔防御素NP-1对临床分离的1株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）和1株多重耐药铜绿假单胞菌（ MDR-PA）的抑菌动力学作用、明确正电荷在NP-1抗菌作用中的重要性，以及NP-1对细菌形态结构的影响。结果小球藻表达的兔防御素NP-1对MRSA和MDR-PA的抑菌率在3 h达到80％以上，其中对MRSA的抗菌作用具有浓度依赖性；带有正电荷的精氨酸（0．25％～0．50％）能有效抑制NP-1的抗菌作用；此外，扫描电镜观察到NP-1可分别导致菌体出现孔洞（ MRSA）或变形塌陷（ MDR-PA）。结论小球藻兔防御素NP-1对耐药的革兰阳性菌和革兰阴性菌均有良好的抗菌作用；一定浓度的精氨酸能够竞争性抑制NP-1的抗菌作用；NP-1对MRSA的抗菌机制可能属于“孔洞”学说。

关键词： NP-1 抗菌机制 MRSA MDR—PA

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熊果酸对大鼠实验性大肠癌的化学预防作用

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现代免疫学 2011年第6期31卷 478-481页

作者：胡晶董兴高胡义陈惠敏韩俊崔显念吕东蔚张秋萍武汉大学基础医学院免疫系武汉430071 湖北民族学院医学院免疫学和微生物学教研室恩施445000 湖北中医药大学生化教研室武汉430065

体外实验证实,熊果酸可抑制人类多种肿瘤细胞的增殖并可诱导肿瘤细胞的凋亡,而对活体动物的抗肿瘤作用鲜有报道。本研究利用二甲基肼诱导大鼠大肠癌模型,同时给予含不同剂量的熊果酸饲料喂养,观察并检测肿瘤的形成部位、数量、体积,并... 详细信息

体外实验证实,熊果酸可抑制人类多种肿瘤细胞的增殖并可诱导肿瘤细胞的凋亡,而对活体动物的抗肿瘤作用鲜有报道。本研究利用二甲基肼诱导大鼠大肠癌模型,同时给予含不同剂量的熊果酸饲料喂养,观察并检测肿瘤的形成部位、数量、体积,并用免疫组织化学方法检测大鼠大肠癌组织中COX-2、Bcl-2和Bax表达的变化,对这些指标进行定性及半定量分析。结果显示,熊果酸可抑制肿瘤的形成,呈剂量依赖性抑制癌组织COX-2的表达,但对Bcl-2、Bax的表达无显著影响。熊果酸对大肠癌有防治作用,其机制可能是通过降低COX-2的表达而实现的。

关键词：大肠癌熊果酸 COX-2 Bcl-2 Bax

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苦瓜蛋白MAP30在毕赤酵母中的表达及其诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡的研究

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现代预防医学 2009年第10期36卷 1932-1934页

作者：樊剑鸣朱沙罗俊张改平河南省动物免疫学重点实验室郑州大学公共卫生学院卫生毒理学研究室郑州大学基础医学院免疫和微生物学教研室

[目的]克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定MAP30诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡。[方法]利用RT-PCR技术扩增861bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30毕赤酵母表达质粒pPICZaA-... 详细信息

[目的]克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定MAP30诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡。[方法]利用RT-PCR技术扩增861bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30毕赤酵母表达质粒pPICZaA-MAP30并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115。SDS-PAGE和West-ern印迹检测MAP30的表达。采用镍离子亲合层析纯化MAP30并通过单细胞凝胶电泳和MTT实验检测其诱发胃腺癌细胞MCG803的凋亡。[结果]克隆片段与基因库所登录的序列相一致,分泌表达的MAP30-His融合蛋白分子量约为30kDa,MAP30体外能诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡,MAP30对MCG803半数抑制浓度(IC50)为72.0μg·ml-1,在一定浓度下,能使肿瘤细胞形成明显的凋亡细胞核;通过单细胞凝胶电泳,能看到明显的慧星尾,表明MAP30引起了肿瘤细胞基因组的降解。[结论]MAP30可作为一个抗肿瘤药而应用于临床研究。

关键词：苦瓜 MAP30 毕赤酵母

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苫瓜蛋白MAP30在毕赤酵母中的表达及其诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡的研究

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现代预防医学 2009年第10期36卷 1932-1934页

作者：樊剑鸣朱沙罗俊张改平河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 郑州大学公共卫生学院卫生毒理学研究室郑州大学基础医学院免疫和微生物学教研室

[目的]克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定MAP30诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡。[方法]利用RT-PCR技术扩增861bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列.克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30毕赤酵母表达质粒pPICZaA-... 详细信息

[目的]克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定MAP30诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡。[方法]利用RT-PCR技术扩增861bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列.克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30毕赤酵母表达质粒pPICZaA-MAP30并导入毕赤酵母Pichia pastoris ***-PAGE和Western印迹检测MAP30的表达。采用镍离子亲台层析纯化MAP30并通过单细胞凝胶电泳和MTT实验检测其诱发胃腺癌细胞MCG803的凋亡。[结果]克隆片段与基因库所登录的序列相一致,分泌表达的MAP30-His融合蛋白分子量约为30kDa,MAP30体外能诱发胃腺癌细胞MCG803凋亡,MAP30对MCG803半数抑制浓度(IC50)为72.0μg·ml^-1,在一定浓度下,能使肿瘤细胞形成明显的凋亡细胞核;通过单细胞凝胶电泳,能看到明显的慧星尾,表明MAP30引起了肿瘤细胞基因组的降解。[结论]MAP30可作为一个抗肿瘤药而应用于临床研究.

关键词：毕赤酵母基因苦瓜胃肿瘤细胞凋亡腺癌遗传学技术植物蛋白质类人类体外研究

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螺杆菌感染与NF—κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 234-239页

作者：张丽叶嗣颖 Ulrich Bohr 陈新山田拥军张小兵华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院法医病理学系武汉430030 华中科技大学同济医学院基础医学院附属同济医院分子生物学实验中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430030 暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室广州510632 德国马格德堡大学医学院胃肠病学肝病学和传染病学系

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再... 详细信息

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系，从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16SrRNA，随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌（***,Hp）的特异基因相对分子质量（Mr）26×10^3的种特异性抗原和相关功能基因（GagA，VacA）。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32．5％（13／40）的食管癌组织中发现有螺杆菌16SrRNA基因存在，正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较，食管癌组织中螺杆菌序列与***的16SrRNA序列有99％～100％同源性。阳性标本均扩增出脚特异基因M，26×10^3种特异性抗原，但仅2例扩增出G田弘基因，3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示，16SrRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100％（13／13），而16SrRNA阴性食管癌组织表达率仅占18．5％（5／27），二者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为脚。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加，可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。

关键词：食管癌螺杆菌 PCR NF-κB p65蛋白免疫组化染色

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