检索结果-内蒙古大学图书馆

医学研究生学报 2022年第5期35卷 471-477页

作者：蔡欣周婷婷朱进孙学伟刘晓光杨展汪茂荣东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室/安徽医科大学八一临床学院南京210002 东部战区疾病预防控制中心南京210001 滨州医学院基础医学院烟台264003 南方医科大学南京临床医学院(东部战区总医院)呼吸与危重症医学科南京210002

目的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)传播迅速,对经济造成威胁。研究快速检测方法,为其检测建立新的方法储备。方法根据严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)基因、刺突蛋白(S)基因及开放阅读区(ORF1ab)基因保守区序列结... 详细信息

目的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)传播迅速,对经济造成威胁。研究快速检测方法,为其检测建立新的方法储备。方法根据严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)基因、刺突蛋白(S)基因及开放阅读区(ORF1ab)基因保守区序列结合逆转录重组酶介导的等温扩增(RT-RAA)和荧光定量、胶体金侧向流免疫层析试纸条(LFD)建立逆转录重组酶介导的等温扩增荧光法(荧光RT-RAA法)和试纸条法(RT-RAA-LFD法)并进行优化,分别以构建的N、S、ORF1ab基因质粒为模板评估这两种方法的灵敏性和重复性;对其他冠状病毒质粒[如HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、SARS]模板进行检测,验证这两种方法的特异性。结果两种检测方法均可在39℃恒温条件下12 min内完成检测。荧光RT-RAA法中,ORF1ab基因可检测至10^(0)拷贝数,N、S基因可检测至10^(1)拷贝数。RT-RAA-LFD法中,3种基因均可检测至10^(3)拷贝数。两种方法与其他类型的冠状病毒无交叉反应,具有良好的特异性。结论RT-RAA法和LFD法检测时间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性,可用于SARS-CoV-2的快速筛查、诊断和监测。

关键词：新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒重组酶介导的等温扩增快速检测

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抗鼠疫抗原F1的嵌合抗体制备及特性分析

引用

南京医科大学学报（自然科学版） 2021年第12期41卷 1753-1758页

作者：匡衡蔡欣杨展周东明周婷婷汪茂荣朱进东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室安徽医科大学八一临床学院江苏南京210001 东部战区疾病预防控制中心江苏南京210002

目的:建立抗鼠疫F1嵌合抗体的稳定表达细胞系,表达并纯化嵌合抗鼠疫F1抗体并鉴定其活性。方法:提取鼠源杂交瘤细胞株4C6总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),逆转录为互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,c DNA),通过聚合酶链式反应(polym... 详细信息

目的:建立抗鼠疫F1嵌合抗体的稳定表达细胞系,表达并纯化嵌合抗鼠疫F1抗体并鉴定其活性。方法:提取鼠源杂交瘤细胞株4C6总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),逆转录为互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,c DNA),通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得抗F1抗体轻链、重链可变区基因,全基因合成嵌合抗体的重链和轻链基因,并克隆于真核表达载体p MH3质粒中,共转染入中国仓鼠卵巢上皮细胞-S(Chinese hamster ovary cell-S,CHO-S)中,经遗传霉素(geneticin,G418)筛选得到稳定表达F1嵌合抗体的细胞株,悬浮培养后收集上清并亲和纯化。采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测其与F1抗原的特异性结合能力;通过竞争性ELISA比较嵌合抗体和鼠源亲本抗体与抗原的结合能力,同时测定抗体亲和力和质谱分析抗体特性。结果:成功获得稳定分泌抗鼠疫抗原F1嵌合抗体的稳定表达细胞系,该抗体能够特异性结合F1抗原,抗体的亲和力为2.303×10-9mol/L。结论:成功制备了抗体鼠疫F1的嵌合抗体,为后续动物体内实验及临床药物研发奠定了基础。

关键词：鼠疫耶尔森菌嵌合抗体 F1抗原亲和力质谱分析

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重组酶介导的肠出血性大肠杆菌O157:H7等温扩增方法的建立

引用

南京医科大学学报（自然科学版） 2022年第9期42卷 1235-1239,1252页

作者：蔡欣王源林赵杰匡衡孙学伟刘宗财崔茜杨展汪茂荣安徽医科大学八一临床学院东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室安徽合肥230000 东部战区疾病预防控制中心江苏南京210002 中国人民解放军空军93801部队医院医疗所陕西咸阳712201 南京医科大学第一临床医学院感染病科江苏南京210029 滨州医学院基础医学院山东烟台264003 空军军医大学军事预防医学系陕西西安710032 东部战区空军医院呼吸内科江苏南京210001

目的:建立新的快速检测常见食源性致病微生物肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic ***,EHEC)O157:H7的方法。方法:根据EHECO157:H7保守区序列,结合重组酶介导的恒温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)和荧光定量或胶体金侧向流... 详细信息

目的:建立新的快速检测常见食源性致病微生物肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic ***,EHEC)O157:H7的方法。方法:根据EHECO157:H7保守区序列,结合重组酶介导的恒温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)和荧光定量或胶体金侧向流免疫层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD),建立两种EHEC O157:H7检测方法(RAA荧光法和RAA-LFD法)并进行优化,评估这两种方法的灵敏性及特异性。结果:两种检测方法均可在39℃恒温条件下16 min内完成检测,两种方法的检测限均可达1×10~4拷贝数,具有较高的灵敏性。两种方法与其他常见的肠道致病菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、弯曲菌、耶尔森菌、志贺杆菌)质粒模板无交叉反应,具有良好的特异性。结论:本研究建立的两种检测EHEC O157:H7的方法,检测时间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性,可用于EHEC O157:H7的快速检测。

关键词： EHEC O157:H7 RAA 快速检测

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