检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2007年第5期34卷 525-532页

作者：孙小娟田晶谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室长沙410078

β地中海贫血是一种因β珠蛋白基因缺陷导致的遗传性贫血性疾病,基因治疗是唯一有望治愈该病的方法.2型腺相关病毒(adeno-associated virustype2,AAV2)是一种非致病性病毒,作为一种基因治疗载体,其应用潜力日益受到关注.目前还未见AAV2... 详细信息

β地中海贫血是一种因β珠蛋白基因缺陷导致的遗传性贫血性疾病,基因治疗是唯一有望治愈该病的方法.2型腺相关病毒(adeno-associated virustype2,AAV2)是一种非致病性病毒,作为一种基因治疗载体,其应用潜力日益受到关注.目前还未见AAV2转导人早期胎肝造血细胞及其介导β珠蛋白基因在动物体内表达的实验报道.有研究表明,AAV2转导人造血干细胞的效率,因各实验室包装和纯化rAAV2的方法不同而存在差异,其中辅助病毒的污染被认为是一重要原因.制备了无辅助病毒污染的rAAV2,经体外检测其滴度,纯度及功能后,再转导人早期胎肝造血细胞,将被转导的胎肝造血细胞移植入受亚致死量剂量照射的8只BALB/C裸鼠体内,检测rAAV2介导的β珠蛋白基因在裸鼠体内的表达.结果显示:制备的无辅助病毒污染的rAAV2具有较高的滴度、纯度,并能够在体外介导β基因的表达;在8只受试BALB/C裸鼠中,RT-PCR在2只BALB/C裸鼠骨髓中检测到β珠蛋白基因的表达.提示,rAAV2能够转导人早期胎肝细胞并介导β珠蛋白基因的表达,但同时也存在表达量较低的缺点,应用于β地中海贫血的基因治疗还需要对AAV2生物学特性做深入的研究.

关键词： 2型腺相关病毒 β珠蛋白基因胎肝造血细胞表达

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粒-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的促进作用

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中国实验血液学杂志 2007年第3期15卷 622-625页

作者：王峰王先酉王绮如周小莹谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室

本研究以内皮细胞培养液(Endo-M)培养小鼠骨髓内皮细胞,探讨粒-巨噬系集落刺激因子(rmGM-CSF)对骨髓内皮细胞增殖的影响。用Endo-M培养小鼠骨髓内皮细胞,通过Wright-Giemsa染色计数内皮细胞集落、应用免疫荧光法观察内皮细胞表型;加入... 详细信息

本研究以内皮细胞培养液(Endo-M)培养小鼠骨髓内皮细胞,探讨粒-巨噬系集落刺激因子(rmGM-CSF)对骨髓内皮细胞增殖的影响。用Endo-M培养小鼠骨髓内皮细胞,通过Wright-Giemsa染色计数内皮细胞集落、应用免疫荧光法观察内皮细胞表型;加入不同浓度的GM-CSF,通过集落形成率、MTT法和流式细胞术检测内皮细胞生长周期,观察GM-CSF对内皮细胞体外扩增的影响。结果表明:Endo-M诱导的骨髓细胞可以生成内皮细胞集落,vWF检测呈阳性;集落形成率检测及MTT法测定均证实GM-CSF对内皮细胞的增殖具有明显的促进作用;生长周期检测结果显示,GM-CSF处理组的细胞进入S期的比率为9.3%,而对照组为2.1%,说明GM-CSF可以通过促使内皮细胞进入S期而加快细胞的分裂,促进细胞增殖;比较第1代和第4次传代后细胞的生长曲线,两者无明显差别,说明多次传代后的细胞仍保持传代早期的增殖潜能。结论:GM-CSF对内皮细胞的增殖具有促进作用,经多次扩增传代后内皮细胞的增殖潜能无明显改变。

关键词：骨髓内皮细胞 GM-CSF 细胞增殖

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骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖的促进作用

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生理学报 2005年第2期57卷 199-204页

作者：周小莹王绮如黄艳红程腊梅谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室中南大学生殖与干细胞工程研究所长沙410078

本文通过制备小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液(serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium, mBMEC-CM),经超滤分为分子量>10 kDa组分和10 kDa组分能刺激骨髓内皮细胞集落增殖,且能明显增加骨髓内皮细胞[3... 详细信息

本文通过制备小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液(serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium, mBMEC-CM),经超滤分为分子量>10 kDa组分和<10 kDa组分,分别观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞集落生成的影响。用Wright’S Giemsa染色计数内皮细胞集落及检测骨髓内皮细胞的vWF,通过[3H]- TdR掺入量,观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的影响,并用分子杂交方法检测内皮细胞表达的细胞因子,从几个方面来研究mBMEC-CM对骨髓内皮细胞增殖的作用。结果显示,骨髓内皮细胞vWF 检测阳性。mBMEC-CM原液及其分子量>10 kDa组分能刺激骨髓内皮细胞集落增殖,且能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR 掺入量;分子量<10 kDa组分对骨髓内皮细胞集落增殖无明显刺激作用,也不能增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。外源加入IL-6、IL-11、SCF、GM-CSF、VEGF、bFGF 6种细胞因子能明显刺激骨髓内皮细胞集落增殖,SCF、VEGF、bFGF能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。Atlas array膜杂交实验显示骨髓内皮细胞内源性表达GM-CSF、SCF、MSP-1、endothelin-2、thymosin β10、connective tissue GF、PDGF-A chain、MIP-2α、PlGF、neutrophil activating protein ENA-78、INF-γ、IL-1、IL-6、IL-13、IL-11、inhibin-α等细胞因子的mRNA。上述结果提示,骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖具有促进作用。

关键词：骨髓内皮细胞无血清条件培养液增殖

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骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用

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中南大学学报（医学版） 2004年第6期29卷 658-661页

作者：周小莹黄艳红王绮如卢光琇谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室中南大学生殖与干细胞工程研究所长沙410078

目的 :探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法 :制备骨髓成纤维细胞条件培养液 (bonemarrowfibroblastsconditionedmedium ,BMF CM) ,分别观察BMF CM或BMF CM联合IL 11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的... 详细信息

目的 :探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法 :制备骨髓成纤维细胞条件培养液 (bonemarrowfibroblastsconditionedmedium ,BMF CM) ,分别观察BMF CM或BMF CM联合IL 11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的影响及BMF CM对巨核系祖细胞生成的影响 ,并用RT PCR的方法检测Meg 0 1人巨核细胞系细胞NF E2mRNA的表达。结果 :BMF CM促进成熟巨核细胞生成。BMF CM联合IL 11促进成熟巨核细胞生成的效果更佳。BMF CM能促进巨核系祖细胞的生成。将 30 %BMF CM加入Meg 0 1人巨核细胞系培养体系培养 4h ,与对照组相比 ,NF E2表达增强。结论

关键词：巨核细胞骨髓成纤维细胞细胞生成体外条件培养液 IL—1 RNA RT—PcR 表达

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膜表面核仁素对脂多糖所致TNF-α和IL-1β表达的影响

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中南大学学报（医学版） 2008年第11期33卷 999-1004页

作者：方立王慷慨蒋磊蒋碧梅韦星宋岚邓恭华肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学系休克研究室长沙410078 中南大学湘雅医院心内科长沙410008

目的:观察人THP-1细胞膜表面核仁素对脂多糖(LPS)所致TNF-α和IL-1β表达的影响。方法:采用免疫荧光、免疫印迹等方法观察核仁素在THP-1细胞膜表面表达。利用抗体封闭策略使膜表面核仁素失活,以LPS刺激THP-1细胞的炎症细胞模型,采用逆转... 详细信息

目的:观察人THP-1细胞膜表面核仁素对脂多糖(LPS)所致TNF-α和IL-1β表达的影响。方法:采用免疫荧光、免疫印迹等方法观察核仁素在THP-1细胞膜表面表达。利用抗体封闭策略使膜表面核仁素失活,以LPS刺激THP-1细胞的炎症细胞模型,采用逆转录PCR和酶联免疫吸附实验观察炎症因子TNF-α和IL-1β的表达与分泌。结果:免疫荧光结果显示核仁素呈斑点状位于细胞膜表面;免疫印迹检测显示核仁素和Fas存在于THP-1细胞膜蛋白中。逆转录PCR结果显示LPS(1000μg/L)处理1,2,3,4h后,IL-1β和TNF-α mRNA均表达上调,而核仁素抗体封闭明显抑制二者的表达。酶联免疫吸附检测发现,LPS(1mg/L)刺激4,12,24h后,促进THP-1细胞分泌TNF-α和IL-1β,而核仁素抗体封闭显著抑制LPS所致的炎症因子释放(P<0.05)。结论:THP-1细胞膜表面核仁素参与介导LPS所致早期炎症介质IL-1β和TNF-α的表达与分泌。

关键词：核仁素 THP-1单核细胞脂多糖炎症因子基因表达

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哌唑嗪对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

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中南大学学报（医学版） 2005年第5期30卷 562-565页

作者：贺骏何群长沙市妇幼保健院医学遗传研究室长沙410007 中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室长沙410078

目的:研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋... 详细信息

目的:研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋亡。结果:哌唑嗪能抑制K562细胞的增殖,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。在5×10-6mol/L哌唑嗪作用下,K562细胞在形态学上可以看见凋亡细胞;流式细胞术也可检测到凋亡峰。结论:哌唑嗪能抑制K562白血病细胞的增殖,并能诱导其凋亡。

关键词：哌唑嗪 K562细胞增殖凋亡

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血管活性肠肽和表皮生长因子对支气管上皮细胞与嗜酸性粒细胞黏附功能的影响

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中南大学学报（医学版） 2006年第5期31卷 772-775,781页

作者：李翔邢秀梅张坚松谭宇蓉湖南师范大学医学院应用生理研究室长沙410006 中南大学湘雅医学院生理学系长沙410078

目的:观察肺内调节肽对嗜酸性粒细胞(EOS)与支气管上皮细胞(BEC)黏附功能的影响。方法:选择血管活性肠肽(VIP)和表皮生长因子(EGF)两种调节肽作为研究对象,观察它们对BEC白细胞介素(ILs)分泌及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。结果... 详细信息

目的:观察肺内调节肽对嗜酸性粒细胞(EOS)与支气管上皮细胞(BEC)黏附功能的影响。方法:选择血管活性肠肽(VIP)和表皮生长因子(EGF)两种调节肽作为研究对象,观察它们对BEC白细胞介素(ILs)分泌及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。结果:VIP、EGF可使O3应激的BEC分泌ILs能力下降,并下调气道上皮ICAM-1的表达。结论:VIP、EGF抑制BEC与EOS的黏附,对气道炎症起负性调节作用,有利于减轻局部的损伤。

关键词：肺内调节肽血管活性肠肽表皮生长因子支气管上皮细胞嗜酸性粒细胞

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核仁应激损伤与热休克蛋白研究

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生理科学进展 2003年第2期34卷 175-177页

作者：王慷慨邓恭华肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室休克研究室长沙410078

核仁作为细胞核糖体生物合成的场所 ,在细胞的增殖、分化 ,以及衰老等生命活动中发挥重要作用。多种应激原可导致核仁结构及功能损伤。应激状态下 ,多种热休克蛋白向核仁移位以保护核仁损伤。深入探讨应激状态下核仁损伤及热休克蛋白保... 详细信息

核仁作为细胞核糖体生物合成的场所 ,在细胞的增殖、分化 ,以及衰老等生命活动中发挥重要作用。多种应激原可导致核仁结构及功能损伤。应激状态下 ,多种热休克蛋白向核仁移位以保护核仁损伤。深入探讨应激状态下核仁损伤及热休克蛋白保护核仁损伤的分子机制。

关键词：核仁应激损伤热休克蛋白核仁结构细脆生物学

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急性淋巴细胞性白血病患儿血清高迁移率族蛋白1检测及其诱导白血病细胞分泌肿瘤坏死因子α的实验研究

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中华儿科杂志 2007年第5期45卷 329-333页

作者：康睿唐道林曹励之俞燕张国元肖献忠中南大学湘雅医院儿科长沙410008 中南大学湘雅医学院病理生理学教研室和休克研究室

目的探讨血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平与儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)发病的关系;研究 HMGB1对白血病细胞分泌肿瘤坏死因子 d(TNF-α)的影响及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法采用 Western blot 方法检测正常、A... 详细信息

目的探讨血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平与儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)发病的关系;研究 HMGB1对白血病细胞分泌肿瘤坏死因子 d(TNF-α)的影响及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法采用 Western blot 方法检测正常、ALL 患儿初治期、完全缓解期各15例血清 HMGB1水平;制备 HMGB1重组蛋白刺激人 K562白血病细胞损伤模型,采用ELISA 和 Western blot 方法检测 HMGB1对 TNF-α分泌及其 p38、c-Jun 氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)MAPK 信号通路活化的影响;采用 ELISA 方法检测 MAPK 抑制剂对 HMGB1所致TNF-α分泌的影响。结果初治 ALL 患者血清 HMGB1[(43.78±4.62)μg/L]显著高于正常对照组[(0.60±O.48)μg/L,P<0.01]和缓解组[(0.89±0.62)μg/L,P<0.01],正常对照组与缓解组比较差异无统计学意义(P>0.05);HMGB1以时效和量效依赖性方式诱导 K562细胞分泌 TNF-α并且促进了 p38、JNK、ERK 蛋白发生磷酸化;p38抑制剂(sB203580)、JNK 抑制剂(SP600125)和 MEK 抑制剂(PD98059)抑制了 HMGB1诱导 K562细胞 TNF-α的分泌。结论血清 HMGB1水平与儿童 ALL 发病、发展密切相关;HMGB1通过活化 MAPK 信号通路促进白血病细胞分泌 TNF-α参与肿瘤细胞免疫调节。

关键词： HMGB蛋白质类肿瘤坏死因子有丝分裂素激活蛋白激酶类白血病淋巴细胞急性 K562细胞儿童

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脑脊液热休克蛋白70水平对小儿中枢神经系统感染的鉴别诊断价值

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中国危重病急救医学 2007年第6期19卷 346-348页

作者：康睿曹励之唐道林张国元俞燕肖献忠中南大学湘雅医院儿科湖南长沙410008 中南大学湘雅医学院病理生理学教研室和休克研究室湖南长沙410008

目的探讨脑脊液（CSF）中热休克蛋白70（HSP70）的变化及其在小儿中枢神经系统感染中的诊断价值。方法采用蛋白质免疫印迹技术检测13例化脓性脑膜炎（化脑组）、38例病毒性脑膜炎（病脑组）、7例结核性脑膜炎（结脑组）及46例非中枢神... 详细信息

目的探讨脑脊液（CSF）中热休克蛋白70（HSP70）的变化及其在小儿中枢神经系统感染中的诊断价值。方法采用蛋白质免疫印迹技术检测13例化脓性脑膜炎（化脑组）、38例病毒性脑膜炎（病脑组）、7例结核性脑膜炎（结脑组）及46例非中枢神经系统感染患儿（对照组）CSF中HSP70水平。常规生化检测CSF的细胞总数、白细胞数、乳酸脱氢酶（LDH）、蛋白定量、腺苷脱氨酶、葡萄糖、压力及氯（Cl-）水平。结果化脑组（76.61±27.69）、病脑组（33.65±16.93）及结脑组（65.85±33.16）的HSP70水平均高于对照组（23.28±19.77）,差异有显著性（P〈0.05或P〈0.01）;化脑组及结脑组HSP70水平均高于病脑组（P均〈0.01）;化脑组与结脑组之间HSP70水平差异无显著性（P〉0.05）。相关性分析显示：HSP70水平增高程度与CSF的细胞总数（r=0.298,P=0.002）、白细胞数（r=0.274,P=0.005）、LDH（r=0.322,P=0.001）、蛋白定量（r=0.629,P〈0.001）、腺苷脱氨酶水平（r=0.363,P=0.001）均呈显著正相关,与CSF中葡萄糖水平呈显著负相关（r=-0.443,P〈0.001）,与CSF压力（r=0.001,P=0.993）及Cl-水平（r=0.148,P=0.133）无相关性。结论小儿中枢神经系统感染时,CSF中HSP70增高;检测CSF中HSP70水平有助于化脑、结脑与病脑的鉴别诊断。

关键词：脑膜炎中枢神经系统感染脑脊液热休克蛋白70

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