检索结果-内蒙古大学图书馆

Smac/DIABLO在过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞凋亡中的作用

生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 923-929页

作者：蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬唐道林肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征... 详细信息

为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带 ,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2 O2 是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放 ,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase 3和Caspase 9的活化 ,转染Smac/DIABLO基因 ,观察Smac/DIABLO过表达对H2 O2 所致的C2 C12 肌原细胞凋亡的影响 .结果表明 :H2 O2 处理 1h后 ,Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放入胞浆 ,2h更明显 ;H2 O2 处理 4h后 ,Caspase 3和Caspase 9活化 ,12h达高峰 ;H2 O2 处理 2 4h后 ,C2 C12 肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变 ,凋亡核百分率明显升高 ,DNA电泳出现明显“梯状”条带 .与单纯过氧化氢损伤组相比 ,Smac/DIABLO高表达的C2 C12 肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase 3和Caspase 9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显 .结果表明 ,H2 O2 可导致Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放 ,促进Caspase 9和Caspase

关键词： Smac/DIABLO 过氧化氢肌原细胞细胞凋亡心肌损伤

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核定位信号在热休克蛋白70抑制氧化应激所致细胞核仁分离中的作用

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生物化学与生物物理进展 2005年第5期32卷 456-462页

作者：王慷慨鄂顺梅蒋磊张华莉刘可张玲莉肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为探讨核定位信号在热休克蛋白70(HSP70)抑制H2O2所致核仁损伤中的作用,采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体,pcDNA3.1(-)-HSP70WT(HSP70野生型),pcDNA3.1(-)-HSP70ΔNLS(核定位信号缺失突变体),pEGFP-N1-HSP70WT,pEGFP-N1-HSP70ΔNLS.向传代培养的C2C12肌源细胞培养液中加入终浓度为1.0mmol/L的H2O2模拟体外氧化应激.甲苯胺蓝染色细胞核仁发现,正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3h,可见明显的核仁分离.热休克反应处理的细胞及转pcDNA3.1(-)-HSP70WT细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离.荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示,H2O2处理后1h,HSP70WT由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位,而HSP70ΔNLS在H2O2处理后仍定位于细胞浆,同时丧失了抑制核仁分离的作用.上述结果提示,野生型HSP70能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离,核定位信号通过介导HSP70向细胞核及核仁移位而决定HSP70对核仁损伤的保护作用.

关键词：热休克蛋白70 核定位信号氧化应激核仁核仁分离

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用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱的改变

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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 402-406页

作者：袁开宇赵震宇刘瑛邹江刘梅冬陈广文尢家騄肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

利用cDNA微阵列检测了小鼠内毒素休克 2h及 2 0h肺组织基因表达谱的改变 .发现内毒素休克 2h有12 8个基因表达上调 ,3个基因下调 ;内毒素休克 2 0h有 5 1个基因表达上调 ,2 1个下调 .并用RT PCR进一步验证了结果的可靠性 .初步分析了基... 详细信息

利用cDNA微阵列检测了小鼠内毒素休克 2h及 2 0h肺组织基因表达谱的改变 .发现内毒素休克 2h有12 8个基因表达上调 ,3个基因下调 ;内毒素休克 2 0h有 5 1个基因表达上调 ,2 1个下调 .并用RT PCR进一步验证了结果的可靠性 .初步分析了基因表达谱改变的意义 .

关键词： cDNA微阵列内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱改变

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采用蛋白质工程技术将αB-晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 283-287页

作者：蒋磊刘双袁灿肖卫民王慷慨尢家騄肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为将αB 晶状体蛋白 (αB crystallin ,αB C)导入心肌细胞 ,采用蛋白质工程技术将人αB 晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列 (membrane translocatingsequence,MTS)的碱基顺序的下游 ,在大肠杆菌中表达谷胱甘... 详细信息

为将αB 晶状体蛋白 (αB crystallin ,αB C)导入心肌细胞 ,采用蛋白质工程技术将人αB 晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列 (membrane translocatingsequence,MTS)的碱基顺序的下游 ,在大肠杆菌中表达谷胱甘肽 5 转移酶 (GST) MTS αB C融合蛋白 .用谷胱甘肽 Sepharose4B亲和层析分离表达产物 ,用Xa因子将其中GST切除 ,并通过阴离子交换层析纯化MTS αB C .纯化的MTS αB C在SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)上呈单一条带 ,分子质量 2 3ku ;免疫印迹显示GST MTS αB C与MTS αB C均能为人αB C抗体识别而在相应位置出现清晰条带 .GST MTS αB C与MTS αB C均有分子伴侣活性 .用异硫氰荧光素 (FITC)标记的MTS αB C与心肌细胞共培养后 ,在荧光显微镜下观察到其进入了心肌细胞 .

关键词： αB-晶状体蛋白蛋白质工程膜移位序列心肌细胞心肌损伤分子机制

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HSF1调控的炎症相关基因的筛选及SOCS3基因的实验验证

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中南大学学报（医学版） 2006年第2期31卷 167-173页

作者：于凤秀张华莉陈广文王秋鹏石永忠刘瑛梁秋娟肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:筛选热休克因子1(HSF1)调控的炎症相关基因,初步探讨HSF1对下游基因的调控作用。方法:采用HSF1基因敲除小鼠,制备内毒素腹腔注射以及热休克反应后再给予内毒素腹腔注射的内毒素血症模型,分别抽提HSF1缺失突变纯合子和HSF1野生型小... 详细信息

目的:筛选热休克因子1(HSF1)调控的炎症相关基因,初步探讨HSF1对下游基因的调控作用。方法:采用HSF1基因敲除小鼠,制备内毒素腹腔注射以及热休克反应后再给予内毒素腹腔注射的内毒素血症模型,分别抽提HSF1缺失突变纯合子和HSF1野生型小鼠肺组织总RNA,用微阵列进行筛选;用转录元件搜索软件分析差异表达基因的启动子区;选取启动子区含有热休克元件的基因:细胞因子信号转导抑制子3(SOCS3),采用热休克反应(HSR)和HSF1过表达的RAW 2 6 4.7巨噬细胞给予内毒素刺激,抽提总RNA进行RT-PCR,Northern印迹实验,观察HSR和HSF1过表达对内毒素诱导的SOCS3基因表达的影响。结果:用微阵列的方法筛选到HSF1可能抑制表达的炎症介质基因1 5个,其中9个基因的启动子区含有热休克元件;HSF1可能促进表达的炎症介质基因1 1个,其中8个基因的启动子区含有热休克元件;HSR和HSF1过表达可明显抑制小鼠RAW 2 6 4.7巨噬细胞内毒素诱导的SOCS3mRNA的表达。结论:HSF1可抑制炎症介质SOCS3mRNA的表达。

关键词：热休克反应热休克因子1 细胞因子信号转导抑制子3

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HSP70抑制H_2O_2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

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中南大学学报（医学版） 2005年第1期30卷 32-37页

作者：蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst33258染色观察H2O2(0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋... 详细信息

目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst33258染色观察H2O2(0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用 caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase 9和caspase 3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2 所致Smac从线粒体释放的影响。结果:HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低,DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase 9和caspase 3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论:HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来

关键词： HSP70 Smac 细胞凋亡 H2O2 C2C12肌原细胞

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大鼠心肌缺血/再灌注相关基因Mip5的表达及特性分析

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中南大学学报（医学版） 2005年第5期30卷 515-520页

作者：王建设袁灿王慷慨张华莉鄂顺梅刘梅冬刘可陈广文肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:研究新基因Mip5(GenBank登录号AY553870)的特性及其在生理或病理状态下的表达变化。方法:运用BLAST,spidey,psort,ClustalW等生物信息学方法对Mip5的相应特性进行分析,并运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)研究基因Mip5的表达。结果... 详细信息

目的:研究新基因Mip5(GenBank登录号AY553870)的特性及其在生理或病理状态下的表达变化。方法:运用BLAST,spidey,psort,ClustalW等生物信息学方法对Mip5的相应特性进行分析,并运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)研究基因Mip5的表达。结果:生物信息学分析显示Mip5位于第13号染色体,其开放读码框为909bp,编码302个氨基酸,含有8个外显子和7个内含子。Mip5蛋白含有6个Kelch结构。RT-PCR检测发现正常时,Mip5在心,脑,肾等组织中表达丰度较高,而在骨骼肌和肝脏组织未能检测到其表达;缺血/再灌注损伤后不同时间心肌组织中Mip5的表达较假手术组明显升高,在再灌注后3h达高峰,12h恢复至基线水平。结论:上述结果表明Mip5为缺血/再灌注相关基因,可能在心肌缺血病理过程中发挥作用。

关键词： Mip5 缺血/再灌注生物信息学心肌缺血

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氧化应激对热休克蛋白70核仁分布的影响

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中南大学学报（医学版） 2005年第4期30卷 384-389页

作者：涂自智王慷慨邹江刘可邓恭华肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:探讨氧化应激对热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)核仁分布的影响。方法:采用热休克反应(42℃1h,37℃恢复12h)诱导C2C12细胞中HSP70的高表达;构建HSP70与增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒。将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞... 详细信息

目的:探讨氧化应激对热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)核仁分布的影响。方法:采用热休克反应(42℃1h,37℃恢复12h)诱导C2C12细胞中HSP70的高表达;构建HSP70与增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒。将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞后,用免疫印迹技术分别检测热休克反应及基因转染诱导的HSP70表达;在分离纯化核仁和胞质蛋白组分后,分别采用免疫细胞化学、荧光技术及免疫印迹检测氧化应激(0.5mmol/LH2O2)诱导的HSP70的分布改变。结果:免疫印迹显示,热休克反应和瞬时转染重组质粒,均能导致C2C12细胞中HSP70的高表达;荧光示踪显示,过氧化氢处理1h后,可见胞核有较强的荧光;免疫细胞化学及细胞组分蛋白质免疫印迹显示,热休克处理的细胞暴露于过氧化氢1h后,HSP70从细胞质向细胞核及核仁移位。结论:氧化应激能导致HSP70从胞质向核仁移位。

关键词：氧化应激热休克反应核仁 C2C12肌原细胞热休克蛋白70

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KLF4过表达对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响

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中南大学学报（医学版） 2007年第6期32卷 1002-1006页

作者：刘梅冬刘瑛刘俊文张华莉肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采... 详细信息

目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采用热应激(42℃)处理稳定表达小鼠KLF4基因的Raw264.7巨噬细胞1h,37℃恢复12h,采用流式细胞术、Hoechest33258染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:获得了KLF4过表达的Raw264.7细胞株,流式细胞术结果显示,转空载体组和KLF4过表达组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较KLF4过表达组升高更明显;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;KLF4过表达细胞琼脂糖凝胶电泳能检测到明显的DNA"梯状条带"。结论:KLF4可以促进热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡。

关键词： KLF4 基因转染 Raw264.7细胞细胞凋亡热应激

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心血管疾病的基因表达谱研究进展

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中南大学学报（医学版） 2004年第4期29卷 483-485页

作者：王尧玲肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

基因表达谱的研究反映了组织细胞在特定状态下整个基因组动态表达的信息 ,有助于阐明疾病发生发展的机制。近年来基因表达谱技术在心血管疾病研究领域被广泛应用 ,同时相应的生物信息学资源也被建立和发展起来。

关键词：基因表达谱心血管疾病动态表达生发研究进展疾病发生组织细胞生物信息学基因组

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