检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2004年第3期31卷 231-236页

作者：袁灿张华莉刘瑛王秋鹏肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理教研室长沙410078

采用生物信息学方法和 5′cDNA末端快速扩增法 (RACE)技术相结合 ,克隆了一个大鼠心肌缺血再灌诱导表达上调的新基因Mip1,并经RT PCR测序及多组织膜RNA印迹证实 .生物信息学分析显示 ,MIP 1定位于大鼠染色体 1q12区 ,含 5个外显子和 ... 详细信息

采用生物信息学方法和 5′cDNA末端快速扩增法 (RACE)技术相结合 ,克隆了一个大鼠心肌缺血再灌诱导表达上调的新基因Mip1,并经RT PCR测序及多组织膜RNA印迹证实 .生物信息学分析显示 ,MIP 1定位于大鼠染色体 1q12区 ,含 5个外显子和 4个内含子 ,开放阅读框 (ORF)为 182 7bp ,编码 6 0 8个氨基酸 ,其编码蛋白N端含KRAB结构域 ,C端含 14个连续的C2H2型锌指蛋白结构域 ,氨基酸第 2 77位至 2 93位为双向的核定位信号 ,多组织膜RNA印迹显示该基因在脑组织表达最高 ,其次是心脏 ,在其他组织表达较低或无表达 .进一步深入研究该基因的功能具有重要生物学意义 .

关键词：大鼠心肌缺血-再灌基因生物信息学 cDNA末端快速扩增法克隆脑组织表达心肌细胞

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大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的筛选和鉴定

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生物化学与生物物理进展 2003年第3期30卷 390-394页

作者：袁灿吕青兰陈广文刘瑛王尧玲刘海军邹江肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理教研室长沙410078

采用反复短时间结扎及松解左冠状动脉前降支构建大鼠心肌缺血预适应动物模型 ,运用抑制消减杂交技术建立大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的消减cDNA文库 ,通过反向RNA点杂交对部分文库基因进行差异表达初筛 ,选取表达差异最明显的 8... 详细信息

采用反复短时间结扎及松解左冠状动脉前降支构建大鼠心肌缺血预适应动物模型 ,运用抑制消减杂交技术建立大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的消减cDNA文库 ,通过反向RNA点杂交对部分文库基因进行差异表达初筛 ,选取表达差异最明显的 85个基因进行测序 ,获得了 3 1个核编码基因和 18个新基因 (EST) ,核编码基因中有相当一部分与细胞保护或信号转导有关 ,新基因已被GenBank收录 .从已测序基因中任选 5个进行RT PCR检测 ,并任选 2个进行RNA印迹检测 ,均证实在缺血预适应时表达增高 .

关键词：大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因筛选鉴定抑制消减杂交

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Smac/DIABLO在过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞凋亡中的作用

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 923-929页

作者：蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬唐道林肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征... 详细信息

为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带 ,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2 O2 是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放 ,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase 3和Caspase 9的活化 ,转染Smac/DIABLO基因 ,观察Smac/DIABLO过表达对H2 O2 所致的C2 C12 肌原细胞凋亡的影响 .结果表明 :H2 O2 处理 1h后 ,Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放入胞浆 ,2h更明显 ;H2 O2 处理 4h后 ,Caspase 3和Caspase 9活化 ,12h达高峰 ;H2 O2 处理 2 4h后 ,C2 C12 肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变 ,凋亡核百分率明显升高 ,DNA电泳出现明显“梯状”条带 .与单纯过氧化氢损伤组相比 ,Smac/DIABLO高表达的C2 C12 肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase 3和Caspase 9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显 .结果表明 ,H2 O2 可导致Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放 ,促进Caspase 9和Caspase

关键词： Smac/DIABLO 过氧化氢肌原细胞细胞凋亡心肌损伤

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核定位信号在热休克蛋白70抑制氧化应激所致细胞核仁分离中的作用

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生物化学与生物物理进展 2005年第5期32卷 456-462页

作者：王慷慨鄂顺梅蒋磊张华莉刘可张玲莉肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为探讨核定位信号在热休克蛋白70(HSP70)抑制H2O2所致核仁损伤中的作用,采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体,pcDNA3.1(-)-HSP70WT(HSP70野生型),pcDNA3.1(-)-HSP70ΔNLS(核定位信号缺失突变体),pEGFP-N1-HSP70WT,pEGFP-N1-HSP70ΔNLS.向传代培养的C2C12肌源细胞培养液中加入终浓度为1.0mmol/L的H2O2模拟体外氧化应激.甲苯胺蓝染色细胞核仁发现,正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3h,可见明显的核仁分离.热休克反应处理的细胞及转pcDNA3.1(-)-HSP70WT细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离.荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示,H2O2处理后1h,HSP70WT由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位,而HSP70ΔNLS在H2O2处理后仍定位于细胞浆,同时丧失了抑制核仁分离的作用.上述结果提示,野生型HSP70能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离,核定位信号通过介导HSP70向细胞核及核仁移位而决定HSP70对核仁损伤的保护作用.

关键词：热休克蛋白70 核定位信号氧化应激核仁核仁分离

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用cDNA微阵列研究内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱的改变

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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 402-406页

作者：袁开宇赵震宇刘瑛邹江刘梅冬陈广文尢家騄肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

利用cDNA微阵列检测了小鼠内毒素休克 2h及 2 0h肺组织基因表达谱的改变 .发现内毒素休克 2h有12 8个基因表达上调 ,3个基因下调 ;内毒素休克 2 0h有 5 1个基因表达上调 ,2 1个下调 .并用RT PCR进一步验证了结果的可靠性 .初步分析了基... 详细信息

利用cDNA微阵列检测了小鼠内毒素休克 2h及 2 0h肺组织基因表达谱的改变 .发现内毒素休克 2h有12 8个基因表达上调 ,3个基因下调 ;内毒素休克 2 0h有 5 1个基因表达上调 ,2 1个下调 .并用RT PCR进一步验证了结果的可靠性 .初步分析了基因表达谱改变的意义 .

关键词： cDNA微阵列内毒素休克小鼠肺组织基因表达谱改变

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采用蛋白质工程技术将αB-晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 283-287页

作者：蒋磊刘双袁灿肖卫民王慷慨尢家騄肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为将αB 晶状体蛋白 (αB crystallin ,αB C)导入心肌细胞 ,采用蛋白质工程技术将人αB 晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列 (membrane translocatingsequence,MTS)的碱基顺序的下游 ,在大肠杆菌中表达谷胱甘... 详细信息

为将αB 晶状体蛋白 (αB crystallin ,αB C)导入心肌细胞 ,采用蛋白质工程技术将人αB 晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列 (membrane translocatingsequence,MTS)的碱基顺序的下游 ,在大肠杆菌中表达谷胱甘肽 5 转移酶 (GST) MTS αB C融合蛋白 .用谷胱甘肽 Sepharose4B亲和层析分离表达产物 ,用Xa因子将其中GST切除 ,并通过阴离子交换层析纯化MTS αB C .纯化的MTS αB C在SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)上呈单一条带 ,分子质量 2 3ku ;免疫印迹显示GST MTS αB C与MTS αB C均能为人αB C抗体识别而在相应位置出现清晰条带 .GST MTS αB C与MTS αB C均有分子伴侣活性 .用异硫氰荧光素 (FITC)标记的MTS αB C与心肌细胞共培养后 ,在荧光显微镜下观察到其进入了心肌细胞 .

关键词： αB-晶状体蛋白蛋白质工程膜移位序列心肌细胞心肌损伤分子机制

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HSF1抑制热应激所致RAW264.7巨噬细胞凋亡

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中南大学学报（医学版） 2006年第2期31卷 162-166页

作者：鄂顺梅肖卫民王慷慨王秋鹏刘梅冬刘可肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理教研室长沙410078

目的:探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对热应激所致Raw2 6 4.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:采用热应激(4 2.5℃±0.5℃)处理稳定表达小鼠HSF1基因的Raw2 6 4.7巨噬细胞1h,3 7℃分别恢复6,9,1 2,2 4 h,采用流式细胞术,hoech... 详细信息

目的:探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对热应激所致Raw2 6 4.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:采用热应激(4 2.5℃±0.5℃)处理稳定表达小鼠HSF1基因的Raw2 6 4.7巨噬细胞1h,3 7℃分别恢复6,9,1 2,2 4 h,采用流式细胞术,hoechst3 3 2 5 8染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:流式细胞术结果显示,热应激后对照组(转空载体)细胞凋亡核百分率较热应激前明显升高,9 h达峰值(约为6 0%),此时荧光染色可见3 0%的细胞出现核固缩,凋亡小体等典型的凋亡形态学改变;并于热应激后6,9,1 2 h均能检测到清晰的DNA梯状条带。与转空载体对照组相比,HSF1过表达能显著降低热应激所致凋亡及明显抑制DNA的断裂。结论:HSF1可以抑制热应激所致的Raw2 6 4.7巨噬细胞凋亡。

关键词：热休克因子1 凋亡热应激 Raw264.7巨噬细胞

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丙型肝炎病毒NS3蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究

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生物化学与生物物理进展 2005年第10期32卷 991-997页

作者：李波冯德云程瑞雪孙树艳何琼琼胡忠良郑晖文继舫中南大学湘雅医学院病理教研室长沙410013

丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立了稳定表达HCVNS3蛋白的人源永生化肝细胞系QSG7701/NS3,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子AP-1、NF-κB和STAT3的活性变化.结果表明:HCVNS3蛋白可促进人源永生化肝细胞QSG7701的增殖,HCVNS3蛋白激活ERKs/AP-1可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子NF-κB和STAT3的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤.

关键词：丙型肝炎病毒NS3蛋白肝细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK) 增殖

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高等院校机能实验室建设标准的专家共识

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中国病理生理杂志 2025年第3期41卷 619-624页

作者：范小芳金宏波李英博胡浩于利王玉芳王慷慨余华荣宋德懋严钰锋黄武董为人龚永生中国病理生理学会机能实验教学工作委员会高等学校国家级实验教学示范中心基础医学组温州医科大学机能实验教学中心浙江温州325035 哈尔滨医科大学机能学实验教学中心黑龙江哈尔滨150081 重庆医科大学基础医学院机能实验室重庆400016 西安交通大学基础医学实验教学中心陕西西安710061 锦州医科大学基础医学院辽宁锦州121001 四川大学华西基础医学与法医学院机能实验室四川成都610041 中南大学湘雅医学院机能实验教学中心湖南长沙410000 北京大学医学部机能实验室北京100083 复旦大学基础医学实验教学中心上海200032 成都泰盟软件有限公司四川成都610101 南方医科大学医学基础国家级实验教学示范中心广东广州510515

新时代对医学人才提出了更高的要求,不仅需要具备扎实的理论基础,还需具备较强的实践能力和创新能力。机能实验室的建设水平对于培养高质量的医学人才起着关键作用。基于国内高等院校机能实验教学的发展现状及趋势,特别是不同地区和院... 详细信息

新时代对医学人才提出了更高的要求,不仅需要具备扎实的理论基础,还需具备较强的实践能力和创新能力。机能实验室的建设水平对于培养高质量的医学人才起着关键作用。基于国内高等院校机能实验教学的发展现状及趋势,特别是不同地区和院校间发展不平衡的问题,中国病理生理学会机能实验教学工作委员会在充分调查研究和论证的基础上,提出了机能实验室建设标准的专家共识,旨在为各院校提供参考,确保实验室能够高效运作,为学生提供优质的实验教学环境,推动基础医学教育的发展。

关键词：机能学实验实验室建设实验教学建设标准专家共识

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CoCl_2缺氧诱导SW480细胞化疗耐药及其机制

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中南大学学报（医学版） 2006年第3期31卷 345-349页

作者：谭泽明伍莹张华莉肖献忠中南大学湘雅医学院中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

目的:研究不同程度的CoCl2化学缺氧条件下SW480细胞的生长情况及对氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)的敏感性,以及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor1alpha,HIF-1α)和诱导型血红素氧化酶(heme oxygenase-1,HO-1)基因在缺氧条件下的表达,以探讨缺氧条件下导致肿瘤细胞耐药的机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定不同CoCl2浓度下SW480细胞的生长情况及化疗药物FU对SW480细胞的生长抑制作用;采用逆转录聚合酶链反应检测HIF-1α和HO-1mRNA在缺氧条件下的表达。结果:MTT结果显示,随着CoCl2浓度增加,SW480细胞的增殖速度减慢,FU对SW480的杀伤作用降低。RT-PCR结果显示,CoCl2化学缺氧处理使HIF-1α和HO-1mRNA表达上调,并呈较好的剂量和时间依赖性关系。结论:CoCl2诱导的体外缺氧可以减缓SW480细胞的生长速度,并降低SW480细胞对FU的敏感性,其机制可能与HIF-1α及HO-1的表达上调有关。

关键词：缺氧二氯化钴 SW480细胞缺氧诱导因子-1α 血红蛋白氧化酶-1 化疗耐药性

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