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SMAD2介导的Activin A信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第8期40卷 28-33页

作者：孙懿周静卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所湖南长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心湖南长沙410078 卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室湖南长沙410078

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检... 详细信息

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检测SMAD2与内中胚层共同前体标记Brachyury和内胚层标记Sox17的表达,进一步通过Western-blot分析Activin A诱导中SMAD2和磷酸化SMAD2(p-SMAD2)表达的变化。【结果】在Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中,干扰SMAD2后48h时才检测到Brachyury强表达,而单纯Activin A处理组24h就检测到强表达;Sox17的表达始终较单纯Activin A处理组明显降低,因此,干扰SMAD2直接抑制了Activin A的诱导作用。而过表达SMAD2,Brachyury和Sox17的表达水平较单纯Activin A处理组明显增加,促进了限定性内胚层的发生;并且在Activin A诱导过程中,p-SMAD2的表达水平明显提高,而SMAD2的表达没有明显改变。【结论】SMAD2作为关键因子,介导了Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层的分化,并转录调控Brachyury和Sox17的表达;SMAD2的磷酸化,激活并介导了Activin A诱导的信号转导通路。

关键词：胚胎干细胞限定性内胚层 Activin A SMAD2 人

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荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立

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中国细胞生物学学报 2012年第7期34卷 685-689页

作者：孙懿曾思聪胡亮卢光琇林戈中南大学生殖与干细胞工程研究所长沙410078 人类干细胞国家工程研究中心长沙410078 卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室长沙410078

建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品;收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本,结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中... 详细信息

建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品;收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本,结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体ND1和核β-globin基因分别进行定量,从而对人胚胎干细胞线粒体DNA的含量进行了精确定量。结果提示,人胚胎干细胞线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为1 321±228。研究表明,该技术可对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数进行准确的测定,为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的影响及优化体外培养条件奠定了基础。

关键词：人胚胎干细胞线粒体DNA DNA拷贝数

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年龄及移植优质胚胎数对体外受精-胚胎移植患者多胎妊娠率的影响

引用

中华妇产科杂志 2008年第8期43卷 567-570页

作者：张顺吉龚斐林戈陆长富肖红梅卢光琇中南大学生殖与干细胞工程研究所生殖工程实验室长沙410078 中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心

目的研究年龄及移植优质胚胎数对体外受精一胚胎移植（IVF-ET）患者多胎妊娠发生率的影响。方法回顾性分析2004年1月至2006年11月，在中南大学中信湘雅生殖与遗传专科医院行新鲜胚胎移植的不孕症患者共4395个周期，按患者年龄分为年龄... 详细信息

目的研究年龄及移植优质胚胎数对体外受精一胚胎移植（IVF-ET）患者多胎妊娠发生率的影响。方法回顾性分析2004年1月至2006年11月，在中南大学中信湘雅生殖与遗传专科医院行新鲜胚胎移植的不孕症患者共4395个周期，按患者年龄分为年龄〈35岁组（3442个周期）和年龄／〉35岁组（共953个周期）。每个周期常规移植2—3枚胚胎，仅有1枚可移植胚胎者移植1枚胚胎，年龄／〉35岁或第2次移植且只有2枚胚胎者移植2枚胚胎。统计各组所有周期的临床妊娠及多胎妊娠率。结果（1）年龄〈35岁组移植1枚胚胎者的临床妊娠率[29．64％（166／560）]低于移植2、3枚者[分别为51．63％（1315／2547）、52．84％（177／335）]，差异均有统计学意义（P〈0．01）；移植2枚与3枚者比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。3者的多胎妊娠率分别为21．08％（35／166）、31．41％（413／1315）和42．37％（75／177），两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）年龄≥35岁组移植1枚胚胎者的临床妊娠率[19．07％（41／215）]低于移植2、3枚者[分别为33．70％（92／273）、39．14％（182／465）]，差异均有统计学意义（P〈0．01）；移植2枚与3枚者比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。移植1枚和2枚胚胎者的多胎妊娠率[分别为19．51％（8／41）和20．65％（19／92）]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；2者均低于移植3枚胚胎者[40．66％（74／182）]，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）年龄〈35岁组的临床妊娠率[48．17％（1658／3442）]高于年龄／〉35岁组[33．05％（315／953）]，差异有统计学意义（P〈0．01）；年龄〈35岁组移植1、2和3枚胚胎者的临床妊娠率分别与年龄／〉35岁组移植相应胚胎数者比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。两组的多胎妊娠率[分别为31．54％（523／1658）和32．06％（101／315）]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IVF—ET患者移植2枚优质胚胎与移植3枚优质胚胎的临床妊娠率相近，但多胎妊娠率降低。年龄对多胎妊娠率无影响。

关键词：受精,体外胚胎移植妊娠,多胎妊娠率年龄因素优生学

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神经钙粘连素胞外结构域的分离和表达

引用

中国病理生理杂志 2006年第3期22卷 520-523页

作者：黄跃龙许静李侠刘俊霞卢光琇宋增璇中南大学生殖与干细胞工程研究所湖南长沙410078 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:分离和表达神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)胞外结构域cDNA并观察其表达蛋白质的免疫原性。方法:从胚胎肝脏和骨髓中分离出CD34+细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增N-cad胞外结构域cDNA,插入表达载体pOPE101-215,重组载体pOPE-N-cad,经异... 详细信息

目的:分离和表达神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)胞外结构域cDNA并观察其表达蛋白质的免疫原性。方法:从胚胎肝脏和骨髓中分离出CD34+细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增N-cad胞外结构域cDNA,插入表达载体pOPE101-215,重组载体pOPE-N-cad,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以所表达蛋白免疫小鼠。结果:分离片段符合预期大小,DNA测序正确。重组质粒转化宿主菌XL1-Blue后,经IPTG诱导表达出了约70kD目的蛋白。免疫5次后,小鼠血清中可检出抗N-cad抗体。结论:CD34+细胞表达N-cad基因,其胞外结构域cDNA表达产物具有较好的免疫原性。

关键词：钙粘着糖蛋白类细胞外结构域基因表达

来源：评论

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噬菌体展示抗体微型文库的构建

引用

生物医学工程学杂志 2006年第6期23卷 1320-1324页

作者：黄跃龙李侠许静刘俊霞宋增璇卢光琇中南大学生殖与干细胞工程研究所中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因c... 详细信息

用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础。

关键词：神经钙粘连素 CD34 AC133噬菌体展示单链抗体

来源：评论

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