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菌物学报 2021年第3期40卷 592-602页

作者：郭源李河周国英刘君昂张盛培中南林业科技大学南方人工林病虫害防控国家林草局重点实验室森林有害生物防控湖南省重点实验室经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004

油茶炭疽病是由刺盘孢属Colletotrichum真菌引起的重要病害,在中国各油茶产区均有发生,严重威胁茶油的产量与品质。前期发现果生刺盘孢Colletotrichum fructicola是油茶炭疽病的优势致病菌,自噬相关蛋白Atg8在果生刺盘孢中的生物学功能... 详细信息

油茶炭疽病是由刺盘孢属Colletotrichum真菌引起的重要病害,在中国各油茶产区均有发生,严重威胁茶油的产量与品质。前期发现果生刺盘孢Colletotrichum fructicola是油茶炭疽病的优势致病菌,自噬相关蛋白Atg8在果生刺盘孢中的生物学功能尚不清楚。本研究根据同源重组的原理及PEG介导的原生质体转化方法,获得了CfATG8基因敲除突变体及其互补菌株。进一步通过生物学表型分析,发现突变体生长减慢、产孢量减少、附着胞形成率降低、对细胞壁完整性胁迫耐受性降低,并且丧失对油茶的致病性。上述结果表明,CfAtg8参与调控果生刺盘孢的营养生长、无性繁殖、附着胞形成、对外界胁迫应答及致病过程。

关键词：油茶果生刺盘孢细胞自噬自噬相关蛋白CfAtg8 致病性

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果生刺盘孢CfHAC1调控应答二硫苏糖醇胁迫的转录组分析

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菌物学报 2020年第10期39卷 1886-1896页

作者：李司政李河中南林业科技大学南方人工林病虫害防控国家林草局重点实验室森林有害生物防控湖南省重点实验室经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004

果生刺盘孢Colletotrichum fructicola是油茶炭疽病优势病原菌。前期研究发现bZIP转录因子CfHac1参与调控该菌的生长发育和致病性。为了揭示转录因子CfHac1调控果生刺盘孢响应内质网压力和致病机理,本研究测定了ΔCfhac1突变体对内质网... 详细信息

果生刺盘孢Colletotrichum fructicola是油茶炭疽病优势病原菌。前期研究发现bZIP转录因子CfHac1参与调控该菌的生长发育和致病性。为了揭示转录因子CfHac1调控果生刺盘孢响应内质网压力和致病机理,本研究测定了ΔCfhac1突变体对内质网压力胁迫剂的敏感性,发现突变体对二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)的耐受性下降,说明CfHAC1基因可能参与调控果生刺盘孢响应内质网压力胁迫过程。进一步利用高通量RNA-seq技术对该病菌野生型菌株和CfHAC1敲除突变体菌株在DTT胁迫下的转录组进行了比较分析,结果表明差异表达基因共有2680个,其中上调表达基因有1181个,下调表达基因有1499个。Gene Ontology功能分析结果显示,差异表达基因主要参与催化活性、结合、代谢过程、细胞过程、细胞成分合成、生物过程调控和应激反应等生物学过程。KEGG功能富集分析表明,上调表达基因主要被富集到核糖体、真核细胞的核糖体生物合成、RNA转运和氰基氨基酸代谢通路中;下调表达基因显著富集在内质网蛋白质加工、N-聚糖生物合成、类固醇合成和蛋白质分泌等通路中。分析发现转录因子CfHac1调控内质网胁迫应答和致病相关基因的表达。本研究提供了在全基因组水平上对CfHAC1基因与内质网压力胁迫应答之间关联的新认识,为阐明果生刺盘孢响应内质网压力胁迫和致病机制奠定了基础。

关键词：油茶炭疽病果生刺盘孢内质网胁迫应答差异表达基因

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降香黄檀叶枯病菌的鉴定及其生物学特性

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热带作物学报 2020年第5期41卷 1007-1012页

作者：陈瑶李航宇周德明中南林业科技大学/南方人工林病虫害防控国家林草局重点实验室/森林有害生物防控湖南省重点实验室/经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410000

近年来,降香黄檀叶枯病的危害越来越严重,为深入了解该病菌特征,本研究对该病原菌进行鉴定,以期为制定更有效的防治措施提供依据。本研究对降香黄檀叶枯病病株进行病原菌分离,并对病原菌进行了形态学观察及rDNA-ITS序列测定,确定该病原... 详细信息

近年来,降香黄檀叶枯病的危害越来越严重,为深入了解该病菌特征,本研究对该病原菌进行鉴定,以期为制定更有效的防治措施提供依据。本研究对降香黄檀叶枯病病株进行病原菌分离,并对病原菌进行了形态学观察及rDNA-ITS序列测定,确定该病原菌为天门冬拟茎点霉菌[Phomopsis asparagi (Sacc.) Bubak]。通过观察该病原菌在不同培养基、温度、pH、光照等4种环境因素中的生长情况,发现该病原菌在马铃薯果糖琼脂培养基(PFA)中菌丝生长最快;菌丝在10~30℃均能生长,最适宜的生长温度为25~30℃;最适宜的pH为6;光照对该病原菌的生长没有显著影响。

关键词：降香黄檀叶枯病天门冬拟茎点霉鉴定生物学特性

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球孢白僵菌与苦参碱混用对双线卷裙夜蛾的协同增效作用

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中国生物防治学报 2022年第3期38卷 573-579页

作者：关朝阳周国英李聪刘君昂中南林业科技大学/南方人工林病虫害防控国家林业局重点实验室/森林有害生物防控湖南省重点实验室/经济林培育与保护教育部重点实验室长沙410004

本文研究了联合应用球孢白僵菌HB-P-04与低剂量苦参碱对双线卷裙夜蛾的杀虫效果,探讨球孢白僵菌与杀虫剂混用的不同使用顺序和时间间隔是否具有协同增效作用。结果表明,低剂量的苦参碱对菌株HB-P-04的孢子萌发、菌丝生长和产孢量的影响... 详细信息

本文研究了联合应用球孢白僵菌HB-P-04与低剂量苦参碱对双线卷裙夜蛾的杀虫效果,探讨球孢白僵菌与杀虫剂混用的不同使用顺序和时间间隔是否具有协同增效作用。结果表明,低剂量的苦参碱对菌株HB-P-04的孢子萌发、菌丝生长和产孢量的影响较小,相容性良好。当球孢白僵菌与苦参碱体积比为1:4时的共毒系数最高,达到223.48,具有最高的联合毒力效果,有显著的增效作用。先球孢白僵菌处理,间隔24 h后苦参碱处理的混用方案表现出显著的协同增效作用,9 d的校正死亡率达到92.86%。在室内毒力试验中,不论是球孢白僵菌与苦参碱以体积比1:4混用,还是先球孢白僵菌处理,间隔24 h后苦参碱处理的混用方案,均能有效地缩短杀虫时间,提高杀虫效率。

关键词：球孢白僵菌双线卷裙夜蛾杀虫剂协同作用无公害防治

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促白木香结香真菌的快速筛选

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菌物学报 2022年第10期41卷 1558-1571页

作者：刘闯周国英刘君昂中南林业科技大学生命科学与技术学院南方人工林病虫害防控国家林业局重点实验室森林有害生物防控湖南省重点实验室经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004

以海南省澄迈县海南科大林业公司所有的白木香人工林地为研究对象,采用前期已分离的菌株对白木香白木进行固体催化,利用GC-MS技术对具有催化效果(白木化学成分在催化前后变化显著)的菌株进行筛选,将筛选出的菌株接种至白木香树体中,6个... 详细信息

以海南省澄迈县海南科大林业公司所有的白木香人工林地为研究对象,采用前期已分离的菌株对白木香白木进行固体催化,利用GC-MS技术对具有催化效果(白木化学成分在催化前后变化显著)的菌株进行筛选,将筛选出的菌株接种至白木香树体中,6个月后对沉香物质挥发油以及化学成分进行测定。对白木固体催化产物的提取物分析,鉴定出其乙醚提取物共24种化学成分,其中共有成分5种、芳香族类化合物6种、其他类化合物18种。Trichoderma sp.、Neurospora sp.和Melanotus flavolivens这3种菌株使白木香白木的化学成分发生显著变化。对结香处理6个月后已结香木材的提取物分析,鉴定出其乙醚提取物共84种化学成分,其中共有成分30种,芳香族类化合物17种、倍半萜类化合物34种和其他类化合物33种。Trichoderma sp.、Neurospora sp.、Melanotus flavolivens和CK样品乙醚提取物得率分别为3.62%、4.04%、3.97%和1.94%。其中芳香族类成分相对含量之和分别为15.15%、17.29%、12.13%和7.95%。倍半萜类成分相对含量之和分别为10.61%、11.19%、11.4%和0%。在6个月内Trichoderma sp.、Neurospora sp.和Melanotus flavolivens这3种经过白木香白木固体催化筛选所得的菌株能够有效诱导白木香结香。

关键词：白木香结香方法促结香真菌 GC-MS

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枯草芽胞杆菌Y13挥发性物质的分析及抑菌活性

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中国生物防治学报 2019年第4期35卷 597-604页

作者：冯福山刘君昂胡廉成文瑞芝周国英中南林业科技大学长沙410004 南方人工林病虫害防控国家林业局重点实验室/森林有害生物防控湖南省重点实验室/经济林培育与保护教育部重点实验室长沙410004

枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis Y13是一株高效广谱的生防菌,对油茶主要病害具有较好的生防效果,试验表明其发酵产生的挥发性物质对油茶炭疽病菌有较好的抑制作用。对菌株Y13产生的挥发性物质进行定性定量分析,并测定其抑菌活性,为油茶... 详细信息

枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis Y13是一株高效广谱的生防菌,对油茶主要病害具有较好的生防效果,试验表明其发酵产生的挥发性物质对油茶炭疽病菌有较好的抑制作用。对菌株Y13产生的挥发性物质进行定性定量分析,并测定其抑菌活性,为油茶病害无公害防治及药剂开发提供理论依据。采用顶空固相微萃取技术(HS-SPME)和气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)收集并分析Y13挥发性物质成分,购买相应挥发性物质纯品,采用双皿倒扣法测定其抑菌活性。Y13挥发性物质对10种植物病原真菌抑菌率在19.2%~83.9%,其中挥发性物质对果生炭疽菌Colletotrichum fructicola的抑菌活性最强,抑菌率达到83.9%;检测其中10种挥发性化合物纯品对果生炭疽菌的抑菌活性发现,除了正十八烷外,其他9种挥发性化合物纯品均具有不同程度的抑菌活性;筛选出的4种高效抑菌挥发性化合物纯品对7种常见的油茶病原真菌的抑菌活性检测结果表明,4种挥发性化合物纯品(10μL/平板)对7种常见的油茶病原真菌均具有较好的抑菌活性,抑菌活性壬醛>苯甲醛>3-甲基-4-苯基吡唑>苯丙噻唑。Y13挥发性物质对油茶主要病害病原菌有很好的抑制作用,具有一定的研究意义和良好的开发价值。

关键词：枯草芽胞杆菌挥发性物质 GC-MS 抑菌活性

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油茶根际土壤拮抗菌分离鉴定及其对油茶炭疽病的防效

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江苏农业科学 2024年第10期52卷 145-153页

作者：桑梦科刘君昂周国英中南林业科技大学/南方人工林病虫害防控国家林草局重点实验室/森林有害生物防控湖南省重点实验室/经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004

油茶炭疽病是由多种真菌引起的主要危害油茶叶片和果实的病害,其发生严重时会影响油茶的产量。为从土壤中寻找对油茶炭疽病具有生防潜力的拮抗菌,通过稀释涂布平板法分离出可人工培养的微生物与指示菌平板对峙试验,经过初筛和复筛确定... 详细信息

油茶炭疽病是由多种真菌引起的主要危害油茶叶片和果实的病害,其发生严重时会影响油茶的产量。为从土壤中寻找对油茶炭疽病具有生防潜力的拮抗菌,通过稀释涂布平板法分离出可人工培养的微生物与指示菌平板对峙试验,经过初筛和复筛确定目标菌株。对目标菌株进行形态特征观察、生理生化鉴定及功能验证。利用盖玻片斜插法于显微镜下观察目标菌株对指示菌菌丝的影响,并进行抑菌谱试验。利用离体刺伤接种试验,验证目标菌株对油茶炭疽病发生的防治效果和治疗效果。通过16S rDNA基因扩增技术、gyrA基因扩增技术,对目标菌株进行分子鉴定。结果表明:从土壤中分离出可培养不同菌落形态的菌株34株,结合初筛、复筛,将菌株YFB-10-3-2确定为目标菌株。菌株YFB-10-3-2具有产生解淀粉酶、解纤维素酶、蛋白酶的能力和固氮功能,能使指示菌菌丝膨大、弯曲。进一步试验发现,目标菌株对10种病原菌的抑制率为46%~72%,表明该菌株具有抑菌广谱性。室内试验发现,该菌株对油茶炭疽病有68.11%的预防效果和28.60%的治疗效果,结合形态特征和生理生化试验,通过双基因分子鉴定,将菌株YFB-10-3-2鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。综上,菌株YFB-10-3-2具有开发成为油茶炭疽病生防菌剂的巨大潜力。

关键词：油茶拮抗细菌分离鉴定离体防效生物防治

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拮抗菌与中药提取物复配对松枯梢病的抑菌效果筛选

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中国生物防治学报 2024年第6期40卷 1355-1365页

作者：牛安琪周德明缪新宇陈行钢周国英刘君昂中南林业科技大学长沙410004 森林有害生物防控湖南省重点实验室长沙410004 南方人工林病虫害防控国家林业和草原局重点实验室长沙410004 经济林培育与保护教育部重点实验室长沙410004

松枯梢病是由松球壳孢菌Sphaeropsis sapinea引发的世界性松树病害,目前的防治手段主要集中于化学防治和生物防治。生物防治因取材于自然,具有绿色环保的先天优势而备受青睐。以筛选高效拮抗微生物为目的,本研究从马尾松根际土壤中筛选... 详细信息

松枯梢病是由松球壳孢菌Sphaeropsis sapinea引发的世界性松树病害,目前的防治手段主要集中于化学防治和生物防治。生物防治因取材于自然,具有绿色环保的先天优势而备受青睐。以筛选高效拮抗微生物为目的,本研究从马尾松根际土壤中筛选出一株对马尾松枯梢病有良好抑菌效果的解淀粉芽胞杆菌CSUFT-CSBA69,其抑制率为76.18%;以筛选潜在植物源药剂为目的,本研究对中药粗提物并进行毒力测定。结果表明黄连粗提物抑菌效果最佳,其EC_(50)值为0.033 mg/mL,最小抑菌浓度0.3125 mg/mL,最小杀菌浓度为0.625 mg/mL,浓度降至0.0097 mg/mL时仍有抑菌效果。为解决生产实践中单一生防因子效果不稳定的现实问题以及满足降低生防药剂成本的需求,本研究采用复配的方法探究菌株CSUFT-CSBA69与黄连低浓度提取液对***的协同防治作用,其中黄连提取液终浓度为0.05 mg/mL、无菌滤液接种量为10%的复配液的抑菌效果为97.45%。研究说明,黄连提取物对病原菌有良好的抑菌效果,且能与生防菌复配,本项研究为复配制备生物源农药提供了新思路。

关键词：松枯梢病解淀粉芽胞杆菌植物提取物复配生物防治

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促白木香结香真菌的分子鉴定及结香效果分析

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分子植物育种 2023年

作者：杜壮彭江涛刘君昂周国英中南林业科技大学南方人工林病虫害防治国家林业局重点实验室森林有害生物防控湖南省重点实验室经济林培育与保护教育部重点实验室

沉香经济价值极高，市场需求量大，白木香(Aquilaria sinensis)是中国唯一药用沉香来源，其野生资源遭遇掠夺式采伐，导致其成为稀缺资源。为探索促进白木香有效结香途径，使其短时间内快速结香，并筛选出可有效诱导白木香结香的真菌，... 详细信息

沉香经济价值极高，市场需求量大，白木香(Aquilaria sinensis)是中国唯一药用沉香来源，其野生资源遭遇掠夺式采伐，导致其成为稀缺资源。为探索促进白木香有效结香途径，使其短时间内快速结香，并筛选出可有效诱导白木香结香的真菌，配置真菌诱导剂。本研究从白木香已结香部位分离筛选出促进白木香结香的内生促结香真菌，通过形态特征及分子生物学方法鉴定促结香真菌种类。将促结香真菌分别研制成3种配比不同的诱导剂，将其重新注射回白木香，并对结香木材进行防御性酶活检测以及显微观察和染色观察，进一步验证促结香真菌能够有效促进白木香结香。在结香部位筛选得到的菌株CX-1-1为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、CX-1-2为禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、CX-G-2-2为层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)、CX-G-3-2为腐皮镰刀菌(Fusarium solani-melongenae)、CX-1-5为假可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia pseudotheobromae)和CX-C3-1为可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)。在回接处理中，处理组3促结香效果最为明显，树体出现明显颜色变化，由乳白色变为黄褐色。将颜色变化部位进行燃烧处理，可见有白烟并伴有明显香味。染色结果显示，颜色变化部位的醇溶性浸出物显现出明显的樱红色，符合《中华人民共和国药典》以及《沉香行业标准》证明该黄褐色物质为沉香。本研究重点探讨利用促结香真菌诱导剂处理白木香，共筛选出6种具有诱导结香效果的真菌，揭示白木香结香机理，为进一步研究微生物在促进沉香产业可持续性发展中的应用提供一定的科学依据。

关键词：白木香内生真菌真菌诱导剂防御免疫反应

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果生刺盘孢效应子CfCFEM21的结构分析与功能验证

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分子植物育种 2022年

作者：包安华刘君昂陈星州陈行钢周国英中南林业科技大学南方人工林病虫害防治国家林业局重点实验室森林有害生物防控湖南省重点实验室经济林培育与保护教育部重点实验室

果生刺盘孢(Colletotrichum fructicola)是导致油茶(Camellia oleifera)炭疽病的主要病原菌之一。病原菌侵染植物时会分泌效应子来促进侵染，已有的研究表明某些包含真菌胞外膜(common in fungal extracellular membrane， CFEM)结构域...

果生刺盘孢(Colletotrichum fructicola)是导致油茶(Camellia oleifera)炭疽病的主要病原菌之一。病原菌侵染植物时会分泌效应子来促进侵染，已有的研究表明某些包含真菌胞外膜(common in fungal extracellular membrane， CFEM)结构域的蛋白为效应子，为了研究果生刺盘孢的致病机理，我们利用hmmsearch搜索CFEM结构域从果生刺盘孢中筛选出一个包含CFEM结构域的蛋白——CfCFEM21。生物信息学分析显示：CfCFEM21具有长度为17个氨基酸的N端信号肽、无跨膜结构域、不包含GPI锚定位点和其它定位序列、并且包含一个CFEM结构域、其CFEM结构域内预测形成4对二硫键，其结构域的三维建模与已知的Csa2的CFEM结构域建模类似，具有篮子状立体结构。此外，我们根据YTK12酵母分泌系统，验证了CfCFEM21的N端信号肽的分泌功能。在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中瞬时表达CfCFEM21显示：CfCFEM21全长的表达并不导致本氏烟叶片的坏死，但可以同时抑制Bax/INF1引起的本氏烟叶片的坏死，CfCFEM21瞬时表达至本氏烟能显著促进辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的侵染，表明CfCFEM21能促进病原菌的侵染。本研究为果生刺盘孢中CFEM效应子的功能和作用机制研究提供参考。

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