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植物遗传资源学报 2017年第3期18卷 520-529页

作者：江南张琳谭晓风谭慧张靖国湖南工业大学包装与材料工程学院株洲412007 中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室/经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 湖北省农业科学院果树茶叶研究所武汉430064

梨品种S基因型鉴定对梨栽培中授粉品种选择和遗传育种都具有重要意义。本研究利用梨S-RNase基因荧光标记的特异引物PCR扩增获得梨品种荧光标记的cDNA特异产物;进一步完善梨S-RNase基因cDNA芯片,以被检测梨品种cDNA特异序列与梨S-RNase基... 详细信息

梨品种S基因型鉴定对梨栽培中授粉品种选择和遗传育种都具有重要意义。本研究利用梨S-RNase基因荧光标记的特异引物PCR扩增获得梨品种荧光标记的cDNA特异产物;进一步完善梨S-RNase基因cDNA芯片,以被检测梨品种cDNA特异序列与梨S-RNase基因cDNA芯片杂交检测不同梨品种S基因型,并发现新的S-RNase基因。结果表明:利用梨S-RNase基因cDNA芯片鉴定了泸定王皮梨、兴山24号、弥渡百合等35个未知S基因型梨品种,确定了各品种的S基因型。结合PCRRFLP及DNA克隆和测序等技术,发现了7个新的S-RNase基因资源,获得了新S-RNase基因序列。序列分析表明各新S-RNase基因均具有S-RNase基因特异区域序列的典型特征;进化分析显示7个新S-RNase基因主要属于蔷薇科苹果亚科S-RNase类群,且存在种间和属间比种内和属内进化关系更近的现象。7个新的S基因分别命名为:PpS_(53)(Pyrus pyrifolia S53)、PpS_(54)、PpS_(55)、PpS_(56)、PpS_(57)、PpS_(58)和PpS_(59),GenBank登录号分别为:KX581753、KX581754、KX581755、KX581756、KX581757、KX581751和KX581752。

关键词：梨 S-RNase基因 cDNA芯片 S基因型进化分析

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梨自交不亲和基因cDNA芯片制备及对部分砂梨品种S基因型的鉴定

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园艺学报 2015年第12期42卷 2341-2352页

作者：江南谭晓风张琳张靖国胡红菊湖南工业大学包装与材料工程学院湖南株洲412007 中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 湖北省农业科学院果树茶叶研究所武汉430064

利用东方梨中已鉴定的52个S等位基因HV区c DNA序列作为靶基因序列设计探针,制备梨S基因c DNA检测芯片,每张芯片上含有240个位点55个c DNA探针,包含所有序列完善的S基因HV区特异的c DNA序列。以被检测品种雌蕊c DNA为模板,采用Cy3荧光修... 详细信息

利用东方梨中已鉴定的52个S等位基因HV区c DNA序列作为靶基因序列设计探针,制备梨S基因c DNA检测芯片,每张芯片上含有240个位点55个c DNA探针,包含所有序列完善的S基因HV区特异的c DNA序列。以被检测品种雌蕊c DNA为模板,采用Cy3荧光修饰引物经S基因特异PCR扩增标记被检测品种的c DNA序列,并与芯片杂交以检测不同品种的S基因型。结果表明:利用c DNA检测芯片与‘丽江黄酸梨’、‘秀玉’、‘弥渡玉梨’、‘白面梨’和‘德胜香’等已知S基因型品种杂交,杂交结果显示与S基因寡核苷酸芯片检测信号一致,与各品种已知S基因型相符合。利用c DNA芯片和进一步完善的S基因寡核苷酸芯片并行检测鉴定了‘文山红梨’等24个未知S基因型的砂梨品种,获得各品种的S基因型。梨S基因c DNA芯片的构建进一步完善了梨S基因检测平台。

关键词：梨自交不亲和 S基因型 c DNA芯片寡核苷酸芯片

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正渗透膜对水中重金属的处理效果研究

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工业水处理 2017年第11期37卷 65-69页

作者：马英冉美惠谷战英林锡柱吴玲利王金凤李建安中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004 株洲志恒实业有限公司湖南株洲412000

以1 mol/L KCl为汲取液,不同浓度重金属溶液为原液,进行了正渗透水处理试验。试验结果表明:随着正渗透处理时间的增加,原液逐渐被浓缩。水通量呈现出了先下降后上升,再下降的过程。反向盐通量以重金属Cd原液最高。正向截留率Cd原液最小... 详细信息

以1 mol/L KCl为汲取液,不同浓度重金属溶液为原液,进行了正渗透水处理试验。试验结果表明:随着正渗透处理时间的增加,原液逐渐被浓缩。水通量呈现出了先下降后上升,再下降的过程。反向盐通量以重金属Cd原液最高。正向截留率Cd原液最小,其他4种重金属原液处理间无显著差异。重金属拦截率显示了CTA正渗透膜对5种重金属拦截效果较好。5种重金属的拦截率大小依次为:Cd>Hg>As>Cr>Pb。

关键词：重金属正渗透截留率

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基于灰色关联分析的湘西北石漠化区土壤质量评价

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中南林业科技大学学报 2016年第9期36卷 36-43页

作者：唐菲菲邓艳林郑茂郭徽曹福祥吴立潮中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004 中南林业科技大学生命科学与技术学院湖南长沙410004

在对湖南省西北部3县4种不同石漠化程度的13个样地进行植被调查及土壤样品分析的基础上,采用主成分分析和指标相关性分析的方法,构建了评价土壤肥力的土壤属性指标的最小数据集,并对30项土壤属性指标进行分析,通过灰色关联度分析法最终... 详细信息

在对湖南省西北部3县4种不同石漠化程度的13个样地进行植被调查及土壤样品分析的基础上,采用主成分分析和指标相关性分析的方法,构建了评价土壤肥力的土壤属性指标的最小数据集,并对30项土壤属性指标进行分析,通过灰色关联度分析法最终确定了各样地的土壤质量得分。结果表明:(1)湘西北石漠化区土壤肥力质量综合评价的最小数据集(MDS)为:土层厚度(ST)、A层厚度(AT)、土壤粗粉粒(Silt-1)、总孔隙度(BP)、全氮(TN)、有效钾(AK)、阳离子交换量(CEC)、微生物量氮(MBN)、微生物量磷(MBP)、C/N比。(2)潜在石漠化、轻度石漠化、中度石漠化、重度石漠化对应等级下的土壤肥力灰色关联度均值分别为0.649、0.523、0.555、0.519,表现为潜在石漠化>中度石漠化>轻度石漠化>重度石漠化。(3)石门、慈利、龙山三地的石漠化区土壤肥力质量综合加权关联度值得分分别为0.571、0.555、0.550,表现为石门>慈利>龙山,其变异系数为1.90%。(4)TN和BP与各样地加权关联度值显极显著相关(P<0.01)。结果表明湘西北石漠化区石漠化等级越高,其土壤肥力质量越低;石门、慈利和龙山三地之间整体质量虽有区别,但差异并不大;在湘西北石漠化区土壤肥力质量综合评价体系中,TN和BP对湘西北石漠化区的土壤质量影响最大。

关键词：石漠化土壤肥力灰色关联分析质量评价湘西北

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‘富平尖柿’炭疽病防治药剂筛选

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中南林业科技大学学报 2018年第3期38卷 70-74页

作者：邓全恩丁向阳徐建强李建安谷战英中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004 河南省林业科学研究院河南郑州450008 河南科技大学河南洛阳471003

通过测定10类21种药剂对‘富平尖柿’炭疽病病原菌的MIC值及菌丝生长的毒力(EC50),筛选出效果较好的药剂,并进行田间防治试验,最终选择适宜推广的防治药剂。2012—2014年连续3年采集陕西富平曹村镇的‘富平尖柿’炭疽病病害枝条和叶片样... 详细信息

通过测定10类21种药剂对‘富平尖柿’炭疽病病原菌的MIC值及菌丝生长的毒力(EC50),筛选出效果较好的药剂,并进行田间防治试验,最终选择适宜推广的防治药剂。2012—2014年连续3年采集陕西富平曹村镇的‘富平尖柿’炭疽病病害枝条和叶片样本,比较不同部位及不同分离方法炭疽病菌分离效果,以得到的炭疽病菌株为实验材料,通过设定药剂浓度梯度的含药培养皿,测定22种杀菌剂对病原菌抑制作用,测定MIC设置浓度梯度为0、1、5、10μg/m L,测定EC50设置浓度为0、0.15、0.312、0.625、1.25、2.5μg/m L。选择效果较好的防治药剂进行田间试验。结果表明:叶脉是病原菌分离的最好材料,但保存期短,枝条不易分离,但保存期长,对具有典型分生孢子角的材料可直接挑取孢子角进行分离。苯并咪唑类、脱甲基抑制剂类、苯吡咯类3类杀菌剂效果较好,MIC值均在10μg/m L以下,EC50多在0.5μg/m L的范围内,选择苯菌灵、甲基托布津、噻呋酰胺、苯醚甲环唑、咯菌腈、戊唑醇6种药剂进行田间试验。苯菌灵、噻呋酰胺、咯菌腈3种药剂对‘富平尖柿’炭疽病菌抑制效果较好,适宜推广。

关键词： '富平尖柿’ 炭疽病药剂筛选

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油茶总RNA的提取与内参基因的初选

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经济林研究 2014年第2期32卷 93-98页

作者：宋志波刘敏贾宝光田雷曾艳玲周俊琴谭晓风张琳中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004 康涅狄格大学植物科学与园林建筑系美国康涅狄格州斯托尔斯06269

为得到高质量的油茶总RNA及稳定的内参基因,以油茶良种‘华硕’为试验材料,采用ambion试剂盒结合CTAB法进行总RNA提取。获得的总RNA完整性好,纯度高;从前期构建的油茶转录组数据中选取ACT(肌动蛋白基因)等14个基因作为候选内参基因,共设... 详细信息

为得到高质量的油茶总RNA及稳定的内参基因,以油茶良种‘华硕’为试验材料,采用ambion试剂盒结合CTAB法进行总RNA提取。获得的总RNA完整性好,纯度高;从前期构建的油茶转录组数据中选取ACT(肌动蛋白基因)等14个基因作为候选内参基因,共设计22对引物,通过RT-PCR反应体系的优化及琼脂糖凝胶电泳检测,快速筛选出了适合油茶不同组织(器官)的内参基因。ALB(清蛋白基因),EF1α(延伸因子基因),ETIF3H(启动因子基因),UBC2(泛素结合酶基因)可以作为油茶果实初选内参基因,EF1α可以作为油茶根、茎、花及果实内参基因,ETIF3H可以作为油茶根、茎、叶、花瓣的内参基因。

关键词：油茶 RNA提取内参基因逆转录PCR

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梨自交不亲和基因cDNA芯片杂交条件优化及应用

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生物技术 2017年第1期27卷 58-64,70页

作者：谭慧谭晓风江南邓靖王楚正中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室/经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 湖南工业大学包装与材料工程学院/生命科学与化学学院湖南株洲412007

[目的]优化梨自交不亲和基因(S-RNase或S基因)c DNA芯片杂交条件,利用芯片检测梨品种S基因型。[方法]提取梨品种雌蕊RNA,Cy3标记引物RT-PCR获得S基因荧光标记特异c DNA序列。设置不同杂交条件,用已知S基因型品种荧光标记的PCR产物在不... 详细信息

[目的]优化梨自交不亲和基因(S-RNase或S基因)c DNA芯片杂交条件,利用芯片检测梨品种S基因型。[方法]提取梨品种雌蕊RNA,Cy3标记引物RT-PCR获得S基因荧光标记特异c DNA序列。设置不同杂交条件,用已知S基因型品种荧光标记的PCR产物在不同条件下分别与芯片杂交,杂交信号分析芯片杂交效果。用芯片优化杂交体系鉴定梨品种未知S基因型,DNA测序验证芯片鉴定结果。[结果]芯片杂交最佳条件:杂交温度42℃,杂交时间8~9 h,PCR纯化产物终浓度为200 ng·μl-1。优化杂交条件下芯片鉴定晚咸丰、秀水、丽江马占梨1、湘菊、木通梨、甘甜、弥渡小红梨、丽江大中古、金晶和弥渡火把等梨品种S基因型分别为:Pp S15Pp S52、Pp S4Pp S5、Pb S22Pp S37、Pp S1Pp S2、Pp S1Pp S3、Pp S13Pp S15、Pp S12Pb S42、Pb S21Pb S22、Pp S3Pp S60和Pp S5Pp S5。DNA测序验证各品种所含S基因与芯片鉴定结果一致。[结论]梨自交不亲和基因c DNA芯片优化杂交条件后可准确鉴定梨品种所含已鉴定的S基因资源。

关键词：梨 cDNA芯片 S-RNase基因杂交 S基因型

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油茶丙二酰单酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆与原核表达

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林业科学 2015年第3期51卷 148-154页

作者：王建勇谭晓风陈鸿鹏曾艳玲龙洪旭梅芳芳刘凯中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 国家林业局桉树研究开发中心湛江524022 华中师范大学生命科学学院武汉430079 广西林业科学研究院南宁530001

【目的】油茶种仁含油率较低且易遭逆性环境等的影响,这些都严重影响和制约了油茶产业的快速发展。丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶是脂肪酸合成酶(FASⅡ)复合体的组成酶之一,在脂肪酸合成中起着装载作用,它的酶促反应产物丙二酰单酰ACP是脂... 详细信息

【目的】油茶种仁含油率较低且易遭逆性环境等的影响,这些都严重影响和制约了油茶产业的快速发展。丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶是脂肪酸合成酶(FASⅡ)复合体的组成酶之一,在脂肪酸合成中起着装载作用,它的酶促反应产物丙二酰单酰ACP是脂肪酸合成关键组成部分。开展该基因的功能研究,能为油茶的分子遗传育种奠定基础。【方法】以油茶品种‘华硕’种子为材料,借助其种子转录组和表达谱数据库,通过RACE技术,克隆丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因并对该基因进行生物信息学分析。利用常规的酶切连接技术构建基因的原核表达载体,并利用α酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性。【结果】丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因的全长c DNA 1 867 bp,含有1 131 bp的开放读码框,编码376个氨基酸,具有58个氨基酸长度的叶绿体转运肽,该基因被命名为Co MCAT(Gen Bank登录号KJ910337)。在malonyl-Co A结合位点和ACP结合位点上分别存在高度保守的基序"GQGXQ"和"GXSXG"。原核表达载体p ET30a-Co MCAT在BL21(DE3)细胞中被成功地诱导表达,目的重组蛋白分子量约为40 k Da。酶活性分析表明,重组蛋白Co MCAT的最佳催化温度为30℃,最佳p H为7.0,比酶活性约为2.384 U·μg-1。【结论】以本实验室构建的油茶转录组数据库为基础,首次克隆获得油茶MCAT基因的全长c DNA序列,构建其原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)中成功诱导表达目的蛋白,并对重组蛋白进行初步的酶活性分析。研究结果为今后进一步深入开展和揭示油茶MCAT基因在油脂合成的代谢过程中的作用奠定基础。

关键词：油茶丙二酰单酰CoA:ACP转酰酶基因克隆原核表达酶活性

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油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的克隆与原核表达

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分子植物育种 2016年第6期14卷 1410-1420页

作者：王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯梅芳芳中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 国家林业局桉树研究开发中心湛江524022 广西林业科学研究院南宁530001 华中师范大学生命科学学院武汉430079

油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为... 详细信息

油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的cDNA全长序列,命名为CoMFP(Gen Bank登录号为KJ910342)。序列分析表明,该基因cDNA全长为2 541 bp,含有2 178 bp的开放读码框,编码725个氨基酸,分子量为79.033 3 kD,理论等电点pI为9.11,具有六个比较明显的跨膜区,不仅存有反式烯酰CoA水合酶(ECH)信号序列、3羟酰Co A脱氢酶(HCDH)信号序列、ECH基序和磷酸结合基序,也具有相当保守的盐桥、活性位点及五个亚结构域。成功地构建了原核表达载体并在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为79 kD的相应目的蛋白。

关键词：油茶多功能蛋白克隆载体构建原核表达

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油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的克隆与表达分析

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植物遗传资源学报 2015年第5期16卷 1080-1088页

作者：王建勇谭晓风梅芳芳曾艳玲龙洪旭刘凯陈鸿鹏中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室/经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 华中师范大学生命科学学院武汉430079 广西林业科学研究院南宁530001 国家林业局桉树研究开发中心湛江524022

以国审油茶(Camellia oleifera)良种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库基础之上,采用RACE技术,克隆获得油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的全长c DNA序列,命名为Co ACAD(基因登录号KJ910338)。该基因c DNA全长为2702 bp,含有24... 详细信息

以国审油茶(Camellia oleifera)良种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库基础之上,采用RACE技术,克隆获得油茶脂酰辅酶A脱氢酶基因的全长c DNA序列,命名为Co ACAD(基因登录号KJ910338)。该基因c DNA全长为2702 bp,含有2487 bp的开放读码框,编码828个氨基酸,分子量为92.4113 k D,理论等电点p I为8.47,具有2个比较明显的跨膜区和酪氨酸蛋白激酶活性位点LVHGDFRIDNLVF,存在5个亚结构域;在Co ACAD基因c DNA全长序列的基础上构建表达载体,其中原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)中成功诱导表达,获得表观分子量约为93 k D的目的蛋白;实时荧光定量PCR分析表明,Co ACAD基因在果实膨大期和成熟期上调表达,预示着Co ACAD基因可能在种子发育过程中参与能量供应过程的调控。

关键词：油茶脂酰辅酶A脱氢酶克隆表达分析

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