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大肠杆菌CFT073中Curli系统重要基因csgF的克隆、表达、纯化和结构分析

微生物学通报 2016年第9期43卷 2063-2071页

作者：陆利曹保华王义强中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学湖南省经济林培育与利用协同创新中心湖南长沙410004 中国科学院生物物理研究所北京100101

【目的】对大肠杆菌CFT073中Culri系统的重要蛋白CsgF进行高效表达,探索其纯化条件和三维结构,为研究Curli生物合成机制提供理论基础。【方法】以大肠杆菌CFT073基因组为模板扩增csgF基因,构建pET28a-csg F(nsp)-N-6His、pET28a-csg F(2... 详细信息

【目的】对大肠杆菌CFT073中Culri系统的重要蛋白CsgF进行高效表达,探索其纯化条件和三维结构,为研究Curli生物合成机制提供理论基础。【方法】以大肠杆菌CFT073基因组为模板扩增csgF基因,构建pET28a-csg F(nsp)-N-6His、pET28a-csg F(20-129)-N-6His、pET28a-csg F-C-6His和p ET28a-csg F(nsp)-C-6His等重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α并在BL21(DE3)中诱导表达;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定CsgF蛋白在大肠杆菌中的表达情况,用Ni-NTA His Bind Resin和凝胶排阻层析色谱纯化重组蛋白CsgF,SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定分析;用Pull down实验研究CsgF与CsgG蛋白的相互作用,同源模建方法分析重组蛋白CsgF的三级结构。【结果】克隆了目的基因csg F,并筛选出稳定CsgF蛋白的条件:50 mmol/L Sodium acetate(pH 5.0)、150 mmol/L NaCl、5%Glyercol;CsgF与CsgG存在相互作用,CsgF三维结构模型显示为(β/α)。【结论】获得了高纯度稳定的CsgF重组蛋白及其三维结构,为进一步研究CsgF结构与功能奠定了基础。

关键词：大肠杆菌CFT073 CsgF 基因克隆蛋白质表达纯化凝胶排阻层析色谱

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不同粘片剂对油茶叶片石蜡切片效果的影响

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安徽大学学报（自然科学版） 2016年第5期40卷 105-108页

作者：尚坤王承南陈昊袁源谷战英中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004

比较不同粘片剂处理对油茶叶片石蜡切片粘片效果的影响,优化植物石蜡切片粘片方法,笔者在制作油茶叶片石蜡切片过程中,用4种不同的粘片剂(甲醛明胶液、铬矾明胶液、明胶甘油液、蛋清甘油液)处理石蜡切片,比较其粘片效果.结果显示,经蛋... 详细信息

比较不同粘片剂处理对油茶叶片石蜡切片粘片效果的影响,优化植物石蜡切片粘片方法,笔者在制作油茶叶片石蜡切片过程中,用4种不同的粘片剂(甲醛明胶液、铬矾明胶液、明胶甘油液、蛋清甘油液)处理石蜡切片,比较其粘片效果.结果显示,经蛋清甘油液处理的切片的形态结构完整度最佳,切片完整率高,而且染色效果清晰.不使用粘片剂处理的切片,叶片结构完整度最低,染色效果一般.最终得到结论为蛋清甘油液是制作植物石蜡切片的理想粘片剂.

关键词：油茶石蜡切片粘片剂植物组织

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南北产区不同品种漆树种仁含油率及漆油成分分析

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经济林研究 2016年第4期34卷 67-72页

作者：邵凤侠王森余江帆中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省协同创新中心湖南长沙410004 江西省林业厅科技处江西南昌330000

摘要：为给漆油的研究和开发利用提供理论依据，以不同产区不同品种漆树果实（以下简称漆籽）为试材，利用索氏提取法和气相色谱．质谱联用法，测定了漆籽种仁的含油率和漆油脂肪酸成分。结果表明：（1）南北漆树产区4个不同品种漆树种... 详细信息

摘要：为给漆油的研究和开发利用提供理论依据，以不同产区不同品种漆树果实（以下简称漆籽）为试材，利用索氏提取法和气相色谱．质谱联用法，测定了漆籽种仁的含油率和漆油脂肪酸成分。结果表明：（1）南北漆树产区4个不同品种漆树种仁含油率分别为20．04％、21．03％、16．03％、15．07％，差异显著，且南方产区漆树种仁含油率高于北方产医（2）南方产区漆油中脂肪酸成分至少有20种，其中主要脂肪酸含量占总脂肪酸含量（测定到的脂肪酸含量）的97．95％以上（含97．95％）；北方产区漆油中脂肪酸成分至少有21种，其中主要脂肪酸含量占总脂肪酸含量（测定到的脂肪酸含量）的97．28％以上（含97．28％）；（3）南北漆树产区不同品种的漆油在主要不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸的构成上，存在较大差别。4个不同品种漆油中不饱和脂肪酸占总脂肪酸含量百分比在78．26％～83．00％之间，最大差值为4．7％。（4）二十三烷酸和十五烷酸等2种脂肪酸在南北产区漆油之间存在质的差别。

关键词：南北产区漆树漆油含油率脂肪酸

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锥栗芽苗砧嫁接技术

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经济林研究 2016年第3期34卷 153-157页

作者：谭露曼袁德义张党权熊欢刘冬明张旭辉朱周俊中南林业科技大学林学院湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004

为了提高锥栗芽苗砧嫁接成活率,以野生锥栗种子作为砧木,以‘华栗3号’当年生营养枝作为接穗,采用嫩枝劈接法,研究4个嫁接时期(4月20日、5月10日、6月1日、7月10日)、5种日龄砧木(20、30、45、60、90 d)和封口材料及封口方式(铝箔、嫁... 详细信息

为了提高锥栗芽苗砧嫁接成活率,以野生锥栗种子作为砧木,以‘华栗3号’当年生营养枝作为接穗,采用嫩枝劈接法,研究4个嫁接时期(4月20日、5月10日、6月1日、7月10日)、5种日龄砧木(20、30、45、60、90 d)和封口材料及封口方式(铝箔、嫁接膜封顶、嫁接膜不封顶)对锥栗芽苗砧嫁接成活率的影响。结果表明:封口材料与封口方式对嫁接成活率存在较大影响,不同的封口材料与封口方式处理的嫁接苗成活率从高到低依次为:嫁接膜封顶、铝箔、嫁接膜不封顶;6月1日为最佳嫁接时期,嫁接膜封顶处理的嫁接成活率达64.00%;砧木年龄过小(20 d)或过大(90 d)均对嫁接成活不利,当砧木日龄为45 d时,嫁接成活率最高,为69.33%。

关键词：锥栗芽苗砧嫁接嫁接时期砧木年龄封口材料与封口方式

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基于灰色关联分析的湘西北石漠化区土壤质量评价

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中南林业科技大学学报 2016年第9期36卷 36-43页

作者：唐菲菲邓艳林郑茂郭徽曹福祥吴立潮中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004 中南林业科技大学生命科学与技术学院湖南长沙410004

在对湖南省西北部3县4种不同石漠化程度的13个样地进行植被调查及土壤样品分析的基础上,采用主成分分析和指标相关性分析的方法,构建了评价土壤肥力的土壤属性指标的最小数据集,并对30项土壤属性指标进行分析,通过灰色关联度分析法最终... 详细信息

在对湖南省西北部3县4种不同石漠化程度的13个样地进行植被调查及土壤样品分析的基础上,采用主成分分析和指标相关性分析的方法,构建了评价土壤肥力的土壤属性指标的最小数据集,并对30项土壤属性指标进行分析,通过灰色关联度分析法最终确定了各样地的土壤质量得分。结果表明:(1)湘西北石漠化区土壤肥力质量综合评价的最小数据集(MDS)为:土层厚度(ST)、A层厚度(AT)、土壤粗粉粒(Silt-1)、总孔隙度(BP)、全氮(TN)、有效钾(AK)、阳离子交换量(CEC)、微生物量氮(MBN)、微生物量磷(MBP)、C/N比。(2)潜在石漠化、轻度石漠化、中度石漠化、重度石漠化对应等级下的土壤肥力灰色关联度均值分别为0.649、0.523、0.555、0.519,表现为潜在石漠化>中度石漠化>轻度石漠化>重度石漠化。(3)石门、慈利、龙山三地的石漠化区土壤肥力质量综合加权关联度值得分分别为0.571、0.555、0.550,表现为石门>慈利>龙山,其变异系数为1.90%。(4)TN和BP与各样地加权关联度值显极显著相关(P<0.01)。结果表明湘西北石漠化区石漠化等级越高,其土壤肥力质量越低;石门、慈利和龙山三地之间整体质量虽有区别,但差异并不大;在湘西北石漠化区土壤肥力质量综合评价体系中,TN和BP对湘西北石漠化区的土壤质量影响最大。

关键词：石漠化土壤肥力灰色关联分析质量评价湘西北

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油茶高接换冠枯桩现象调查与研究

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经济林研究 2016年第1期34卷 171-175页

作者：柯镔峰熊利王金凤任俊李建安中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004 湖南省林业种苗中心湖南浏阳410300

为了探寻影响油茶高接换冠后枯桩的相关因素,为今后油茶高接换冠技术改良提供理论依据,调查研究了嫁接方法、接穗品种、砧木粗度、留截高度和嫁接方位等因素对油茶高接换冠后枯桩现象的影响。结果表明：5种因素对油茶枯桩程度影响极显... 详细信息

为了探寻影响油茶高接换冠后枯桩的相关因素,为今后油茶高接换冠技术改良提供理论依据,调查研究了嫁接方法、接穗品种、砧木粗度、留截高度和嫁接方位等因素对油茶高接换冠后枯桩现象的影响。结果表明：5种因素对油茶枯桩程度影响极显著。其中,采用插皮腹接、砧木直径2~6 cm枯桩程度最低;采用‘华硕’和‘湘林XLJ14’其枯桩程度显著低于其它品种;留截高度越低枯桩程度越低;嫁接方位在外侧枯桩程度最低。偏相关分析结果表明,留截高度对油茶枯桩程度的影响最大;其次是嫁接方法、砧木直径和嫁接品种;而嫁接方位对油茶枯桩程度的影响最小。

关键词：油茶高接换冠枯桩调查

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‘湘林’系列油茶授粉品种配置模式研究

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中南林业科技大学学报 2016年第4期36卷 17-24页

作者：刘慧敏敖书飞乌云塔娜中国林业科学院经济林研究中心河南郑州450003 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学林学院湖南长沙410004 襄阳市林业科学研究所湖北襄阳441053

油茶被认为自交不亲和树种,在优质丰产栽培中需要配置授粉品种。本研究以60个‘湘林’系列油茶无性系品种为对象,在品种开花物候期观察,花粉量和花粉活力测定的基础上,通过品种间授粉亲和程度的调查研究,建立了‘湘林’系列油茶品种的... 详细信息

油茶被认为自交不亲和树种,在优质丰产栽培中需要配置授粉品种。本研究以60个‘湘林’系列油茶无性系品种为对象,在品种开花物候期观察,花粉量和花粉活力测定的基础上,通过品种间授粉亲和程度的调查研究,建立了‘湘林’系列油茶品种的授粉品种配置模式。结果表明:60个‘湘林’系列油茶品种开花物候期主要集中在10月底开始到11月底,根据盛花期可分成3组;60个湘林系列油茶品种的花粉量大小存在差异,6800-200个/花药,花粉活力也存在差异,100%-57%;综合考虑盛花期、花粉量、花粉活力等因素,共分出3个授粉组合,在每个组合所预选的授粉品种中,根据其杂交授粉亲和程度,分别筛选出了1-5个、2-4个、1-3个授粉品种,授粉座果率达70%-100%。该研究首次系统研究油茶品种间授粉亲和性及授粉模式,为‘湘林’系列油茶高产栽培提供了重要的理论依据。

关键词：普通油茶授粉品种杂交亲和性

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高温处理对漆蜡皂化值的影响

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经济林研究 2016年第2期34卷 96-100页

作者：邵凤侠王森常双双李凡松晏巢叶霖毛克俭中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省协同创新中心湖南长沙410004 中国林业科学研究院亚林中心江西分宜336600 平江县林业局湖南平江414500 中南林业科技大学芦头实验林场湖南平江410400

为给漆蜡的开发利用提供参考,采用真空高温加热方法,研究了6种高温处理对漆蜡皂化值的影响。结果表明：高温处理漆蜡的皂化值存在差异,但不显著;高温140℃,处理时间为4 h时,漆蜡的皂化值最小,为162.59 mg/g;高温130℃,处理时间为3 h的... 详细信息

为给漆蜡的开发利用提供参考,采用真空高温加热方法,研究了6种高温处理对漆蜡皂化值的影响。结果表明：高温处理漆蜡的皂化值存在差异,但不显著;高温140℃,处理时间为4 h时,漆蜡的皂化值最小,为162.59 mg/g;高温130℃,处理时间为3 h的条件下,漆蜡皂化值最大,为218.00 mg/g;其它几组高温处理下的漆蜡的皂化值均在162.59～218.00 mg/g之间;高温140℃处理漆蜡的皂化值整体相对于其它几组较小,变化范围为162.59～194.18 mg/g,但是整体波动较大,最大与最小值的差值为31.59 mg/g;高温150℃处理时,漆蜡皂化值相对于100、110、120和130℃较小,整体波动较小,变化范围为185.39～197.27 mg/g,最大与最小值的差值为11.88 mg/g。

关键词：漆蜡高温皂化值

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枣抑制消减cDNA文库构建与分析

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经济林研究 2016年第4期34卷 20-24页

作者：魏琦琦段经华冯延芝李芳东张琳中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室湖南长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省2011协同创新中心湖南长沙410004 中国林业科学研究院经济林研究开发中心河南郑州450003

枣树具有独特的开花结果特性，为获得枣花发育基因，以金丝4号枣不同发育时期的花蕾和同时期的叶片cDNA互为试验方和驱动方，利用抑制消减杂交技术分别构建了枣花和枣叶抑制消减杂交cDNA文库（SSH文库）。枣花和枣叶SSH文库重组率分别... 详细信息

枣树具有独特的开花结果特性，为获得枣花发育基因，以金丝4号枣不同发育时期的花蕾和同时期的叶片cDNA互为试验方和驱动方，利用抑制消减杂交技术分别构建了枣花和枣叶抑制消减杂交cDNA文库（SSH文库）。枣花和枣叶SSH文库重组率分别是92．05％和90．26％，插入片段长度均介于200～2000bp之间，主要集中于1000bp左右。分别从枣花和枣叶SSH文库中随机挑选1000个阳性克隆进行DNA测序、组装拼接，结果显示枣花SSH文库中获得96条unigene，其中contigs43个，singletons53个，96条unigene预测得到73个ORF，经过同源比对分析获得有注释的序列20条，按功能分为7类；枣叶SSH文库中获得86条unigene，其中contigs45个，singletons41个，86条unigene预测得到70个ORF，经过同源比对分析获得有23条注释的序列，按功能分为6类。

关键词：枣抑制消减杂交 cDNA文库生物信息学分析功能注释

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油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的克隆与原核表达

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分子植物育种 2016年第6期14卷 1410-1420页

作者：王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯梅芳芳中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004 国家林业局桉树研究开发中心湛江524022 广西林业科学研究院南宁530001 华中师范大学生命科学学院武汉430079

油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为... 详细信息

油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的cDNA全长序列,命名为CoMFP(Gen Bank登录号为KJ910342)。序列分析表明,该基因cDNA全长为2 541 bp,含有2 178 bp的开放读码框,编码725个氨基酸,分子量为79.033 3 kD,理论等电点pI为9.11,具有六个比较明显的跨膜区,不仅存有反式烯酰CoA水合酶(ECH)信号序列、3羟酰Co A脱氢酶(HCDH)信号序列、ECH基序和磷酸结合基序,也具有相当保守的盐桥、活性位点及五个亚结构域。成功地构建了原核表达载体并在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为79 kD的相应目的蛋白。

关键词：油茶多功能蛋白克隆载体构建原核表达

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