检索结果-内蒙古大学图书馆

癌变．畸变．突变 2016年第6期28卷 438-442页

作者：郭志兰车路阳李晶哲吴双孙震晓刘长振北京中医药大学中药学院北京100102 中国中医科学院医学实验中心中医药防治重大疾病基础研究北京市重点实验室北京100700 中国人民解放军总医院骨科北京100853

目的:探讨培养基p H、血清对Metridia荧光素酶(MLuc)检测的影响并尝试找到一种优化的检测条件。方法:构建表达MLuc的逆转录病毒载体,瞬时转染人宫颈癌细胞系He La,制备收获MLuc;利用化学发光仪检测不同条件下的培养基对MLuc发光性能的影... 详细信息

目的:探讨培养基p H、血清对Metridia荧光素酶(MLuc)检测的影响并尝试找到一种优化的检测条件。方法:构建表达MLuc的逆转录病毒载体,瞬时转染人宫颈癌细胞系He La,制备收获MLuc;利用化学发光仪检测不同条件下的培养基对MLuc发光性能的影响,并尝试通过不同缓冲液与试剂的组合代替培养基来获得最佳条件。结果:培养基p H变化导致MLuc发光值产生较大波动,血清的存在会导致检测背景;添加0.02%(V/V)NP-40的磷酸盐缓冲液(PBS)(p H=7.4)作为MLuc检测的缓冲体系代替培养基,其发光值大小相当,检测背景值由原来的600左右降低到20左右。结论:以添加0.02%NP-40的PBS作为MLuc检测的缓冲体系可消除培养基p H、血清的影响,使检测结果更加准确和灵敏。

关键词：荧光素酶 pH 血清检测优化

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不同生理病理状态下“弦脉”的脉诊信息特征研究

不同生理病理状态下“弦脉”的脉诊信息特征研究

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中华中医药学会中医诊断学分会第十七次学术年会

作者：刘佳薛利媛张佳琪周灵运黄大威汪南玥北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室、中国中医科学院医学实验中心北京100007 北京市朝阳区太阳宫医院 100028

目的：不同生理病理状态下弦脉脉诊信息的变化特征;从“病脉结合”的角度为中医传统脉象的可再分性提供科学依据。方法：将正常弦脉和高血压弦脉、乳腺增生弦脉、颈椎病弦脉4种不同状态人群作为研究对象，使用“高精度机械手中医脉诊信... 详细信息

目的：不同生理病理状态下弦脉脉诊信息的变化特征;从“病脉结合”的角度为中医传统脉象的可再分性提供科学依据。方法：将正常弦脉和高血压弦脉、乳腺增生弦脉、颈椎病弦脉4种不同状态人群作为研究对象，使用“高精度机械手中医脉诊信息采集分析系统”对其脉诊信息采集，采用“脉诊数据库-管理、建模、统计分析平台”对脉诊信息进行预处理、周期划分和参数提取，使用主成分分析、最小二乘(LS)识别和套索(Lasso)识别3种分类判决方法，分析同为弦脉的4种不同状态人群的脉诊信息间的差异及各自的信息特征。结果：首先，同为弦脉的4种不同状态人群的脉诊信息之间存在明显差异，该差异在使用3种分类判决方法时具有较强的一致性。其次，正常弦脉与分别与3种病理状态弦脉的脉诊信息进行比较，在剔除相兼疾病后，分类判决的准确率并无明显提高;而3种疾病状态间，在剔除相兼疾病后，分类判别的准确率均有所提高，且使用3种不同的分析方法结果一致。第三，不同状态弦脉人群的脉诊信息之间的差异呈现规律性和寸关尺的部位特异性。结论：弦脉在不同生理病理状态下，脉诊信息之间具有显著差异，通过“病脉结合”的脉诊信息特征研究，主要因传统脉象具有非特异性，而现代脉诊研究具有客观性、计算机分类具有高敏性特点，可将传统脉象的进行“可分类”;另一方面，由于不同生理病理人群的机体状态具有特征性，故脉诊信息呈现规律性和寸关尺部位特异性，与传统文献的记载部分重合，证实传统医学的科学性。传统脉象的脉诊信息“可分类”的理论可作为临床辅助诊断和疗效评价的脉诊方法。

关键词：弦脉脉诊信息分类高血压乳腺增生颈椎病

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脉诊客观化研究的思考

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中华中医药杂志 2015年第8期30卷 2655-2657页

作者：汪南玥于友华刘佳陈燕萍中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700

脉诊是中医四诊方法之一,其客观化研究具有极其重要的意义。经过数十年科技工作者的努力,脉诊客观化取得了阶段性的成果,但是尚没有一致公认的成果,临床转化推广也受到一定局限。文章系统分析了脉诊客观化研究中存在的主观性、缺乏标准... 详细信息

脉诊是中医四诊方法之一,其客观化研究具有极其重要的意义。经过数十年科技工作者的努力,脉诊客观化取得了阶段性的成果,但是尚没有一致公认的成果,临床转化推广也受到一定局限。文章系统分析了脉诊客观化研究中存在的主观性、缺乏标准和规范等根本问题,并就上述问题进行了研究方向、研究思路的整理与探讨,即从以疾病为研究对象回避主观因素的影响,建立脉诊信息采集的操作规范,开展病脉结合、脉诊体质分类研究的同时,注重脉诊基础研究,为脉诊信息客观化提供可靠的研究方法与可行的研究思路。

关键词：脉诊客观化研究疾病病脉结合体质基础研究

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首乌方对美多芭诱发异动症模型大鼠行为学及脑内糖代谢的影响

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中华中医药杂志 2015年第1期30卷 73-77页

作者：刘洋焦玥孙丹丹王丹巧赵小亮张美玉北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室中国中医科学院医学实验中心北京100700

目的:探讨首乌方对美多芭诱发异动症模型大鼠行为学指标及其纹状体细胞外液糖类物质水平的影响。方法:采用6-羟多巴胺(6-OHDA)脑内立体定位注射造成偏侧帕金森病大鼠模型,成模动物分为美多芭组和美多芭+首乌方组,另设假手术组。所有动... 详细信息

目的:探讨首乌方对美多芭诱发异动症模型大鼠行为学指标及其纹状体细胞外液糖类物质水平的影响。方法:采用6-羟多巴胺(6-OHDA)脑内立体定位注射造成偏侧帕金森病大鼠模型,成模动物分为美多芭组和美多芭+首乌方组,另设假手术组。所有动物连续给药22d,在第1、7、14、21天给药后对大鼠进行异常不自主运动(AIM)评分。第22天采用微透析技术对大鼠纹状体细胞外液进行取样,并采用ISUCSflex分析仪监测样本中葡萄糖、乳酸水平动态变化。结果:与假手术组相比,美多芭组、美多芭+首乌方组AIM评分均显著升高(P<0.05,P<0.01);与美多芭组相比,美多芭+首乌方组AIM评分降低,但差异无统计学意义。第22天,与假手术组相比,美多芭组大鼠纹状体细胞外液葡萄糖、乳酸水平均显著升高(P<0.01),与美多芭组相比,美多芭+首乌方组大鼠纹状体细胞外液葡萄糖、乳酸水平降低(P<0.05)。结论:首乌方配伍美多芭改善异动症模型大鼠行为学症状,其作用机制或与其改善LID大鼠脑内糖类物质代谢障碍有关。

关键词：帕金森病左旋多巴诱发异动症首乌方微透析葡萄糖乳酸

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二苯乙烯苷对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞外氨基酸,细胞内钙离子浓度的影响

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中国实验方剂学杂志 2015年第15期21卷 111-115页

作者：焦玥李涛马淑骅欧阳竞峰王毅孙丹丹王丹巧梁嵘中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700 北京中医药大学基础医学院北京100029

目的:观察二苯乙烯苷(TSG)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用并探讨相关机制。方法:以SH-SY5Y细胞为研究对象,以100μmol·L-16-OHDA建立SH-SY5Y细胞损伤模型,以浓度6.25,12.5,25,50,100,200μmol·L-1TSG作... 详细信息

目的:观察二苯乙烯苷(TSG)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用并探讨相关机制。方法:以SH-SY5Y细胞为研究对象,以100μmol·L-16-OHDA建立SH-SY5Y细胞损伤模型,以浓度6.25,12.5,25,50,100,200μmol·L-1TSG作用损伤的SH-SY5Y细胞,另设空白组,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,观察不同浓度的TSG对其的保护作用,激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度的变化,高效液相-荧光法检测上清液中兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu),抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果:与空白组比较,模型组细胞存活率降低,游离钙明显增多(P<0.01),细胞外Glu及GABA浓度明显升高(P<0.01);与模型组比较,TSG预处理24 h可以改善6-OHDA造成的细胞存活率的下降,其中12.5μmol·L-1的细胞保护作用最为明显(P<0.05),明显降低内游离钙含量,明显降低细胞外Glu及GABA浓度(P<0.05,P<0.01),TSG对其有明显的抑制作用。结论:TSG可能通过减轻钙超载及兴奋性毒性对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞起到保护作用。

关键词：二苯乙烯苷 6-羟基多巴胺钙离子氨基酸

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基于自动采血系统与HPLC-QQQ-MS的青藤碱药动学分析

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中国实验方剂学杂志 2015年第14期21卷 66-70页

作者：赵小亮李涛刘洋张美玉陈跃崔月张莹孙丹丹王志国王丹巧中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700 山东省分析测试中心济南250014

目的：建立灵敏、简便、准确的自动采血系统采集大鼠血浆样本,高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术（HPLC-QQQ-MS）测定血浆中青藤碱含量的方法,并应用于其体内药代动力学研究。方法：SD大鼠颈总静脉插管,待清醒后按40 mg·kg-1腹... 详细信息

目的：建立灵敏、简便、准确的自动采血系统采集大鼠血浆样本,高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术（HPLC-QQQ-MS）测定血浆中青藤碱含量的方法,并应用于其体内药代动力学研究。方法：SD大鼠颈总静脉插管,待清醒后按40 mg·kg-1腹腔注射青藤碱,应用自动采血系统在大鼠自由活动状态下采集样品。血浆样品中加入内标（磷酸可待因）,乙腈沉淀蛋白,流动相乙腈-水（含0.1%甲酸铵）梯度洗脱。质谱采用电喷雾电离源（ESI）,扫描方式为多反应离子监测模式（MRM）,定量分析离子对分别为青藤碱m/z 330.0,磷酸可待因m/z 300.0。利用Win Nonlin软件计算药代动力学参数。结果：血浆中青藤碱在5.0~500.0μg·L-1线性关系良好,定量下限1μg·L-1,样品处理方法的提取回收率〉88%,日内及日间准确度101.08%~111.08%,RSD均〈10%,稳定性良好。血浆中青藤碱的达峰时间（tmax）,药峰浓度（Cmax）,药时曲线下面积（AUC0-24 h）,表观分布容积（Vz/F）,清除率（CL/F）,平均驻留时间（MRT0-24 h）分别为（1.65±1.48）h,（210.43±96.35）μg·L-1,（1 053.80±427.69）h·μg·L-1,（252.65±57.36）L·kg-1,（30.37±11.85）L·h-1·kg-1,（5.15±2.47）h。结论：建立的方法有效控制了采血过程对药动学分析结果的影响,样品用量少,简便、准确、可靠,能够满足自由活动大鼠体内青藤碱连续定量分析和药代动力学研究。

关键词：青藤碱自动采血系统自由活动大鼠药代动力学高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术

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乌头碱、新乌头碱及次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响

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国际中医中药杂志 2015年第6期37卷 517-523页

作者：余丞浩于友华孙明杰石晓路中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室100700

目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min，灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放（SCR）... 详细信息

目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min，灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放（SCR）诱发率以及舒张末期钙浓度（F0）、钙瞬变幅度（ΔF）的变化。检测灌流0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液后12 min，心肌细胞发挥正性肌力作用时钙瞬变和收缩功能动力学指标的变化。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可诱发SCR，0.3μmol/L时新乌头碱SCR诱发率最高，3μmol/L时乌头碱SCR诱发率最高。与对照组比较，给药后12 min，3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加 F0[（1.459±0.379）、（1.585±0.493）、（1.213±0.254）比（1.079±0.108）]、ΔF[（1.615±0.455）、（2.210±0.756）、（1.528±0.422）比（1.036±0.125）]，差异有统计学意义（P均＜0.05）；且新乌头碱ΔF高于乌头碱和次乌头碱（P均＜0.05）。与对照组比较，0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加ΔF[（0.409±0.127）、（0.423±0.107）、（0.414±0.118）比（0.260±0.065）；P＜0.05或P＜0.01]、收缩幅度[（5.464±2.239）%、（7.449±2.548）%、（5.524±1.645）%比（3.428±0.911）%；P＜0.05或 P＜0.01]，延长钙瞬变达峰时间[（0.041±0.016）s、（0.039±0.009）s、（0.038±0.011）s 比（0.032±0.007）s；P＜0.05或P＜0.01]；与乌头碱组比较，新乌头碱和次乌头碱可降低钙瞬变消除时间常数[（0.301±0.054）s、（0.324±0.064）s 比（0.361±0.076）s；P＜0.05或P＜0.01]，缩短舒张期收缩恢复至50%时的时间[（0.124±0.035）s、（0.126±0.040）s 比（0.157±0.056）s；P＜0.05或 P＜0.01]。结论乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的正性肌力作用与毒性效应同时存在，表明心肌细胞内钙浓度升高是产生正性肌力作用的有利因素，也是诱发SCR的危险因素。

关键词：肌细胞,心脏钙中草药乌头碱大鼠新乌头碱次乌头碱

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中枢内神经化学物质在癌症侵袭镜像痛中的作用及加巴喷丁对其的影响

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中国生化药物杂志 2015年第3期35卷 13-17页

作者：孙丹丹王志国李涛赵小亮焦玥刘洋李玉娟欧阳竞锋牛晓红王丹巧中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700

目的研究脊髓组织神经化学物质谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及大脑皮质内P物质(substance P,SP)和强啡肽A1-13(dynorphin A1-13,Dyn A1-13)在癌症侵袭镜像痛中的作用及加巴喷丁对其影响。方法雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、操作对照组(注射0.2 m L灭活的S180肉瘤细胞液)、模型组(于右腿股骨大转子处注射0.2 m L S180肉瘤细胞液)和加巴喷丁组(0.2 m L S180肉瘤细胞液+120 mg/kg加巴喷丁,ip),造模前及术后分别用Von Frey纤维丝测定术侧及对侧后足的机械痛阈值;采用高效液相-荧光法检测脊髓L3-L5节段内Glu、GABA浓度;放射免疫法检测大脑皮质内SP、Dyn A1-13的含量。结果伴随术侧癌症侵袭痛的产生,模型组小鼠术侧的镜像部位出现了与术侧发展趋势相同、程度近似的机械痛阈下降。模型组小鼠脊髓内Glu及大脑皮质内SP水平均显著升高(P<0.05,P<0.01),而脊髓内GABA及大脑皮质内Dyn A1-13的含量均显著降低(P<0.05);加巴喷丁给药后小鼠双侧的机械痛阈值均显著升高,可持续240 min(P<0.05,P<0.01),并逆转了癌症侵袭镜像痛小鼠中枢神经系统内上述神经化学物质的改变(P<0.01或P<0.05)。结论 S180肉瘤细胞所致癌症侵袭痛模型小鼠存在镜像痛现象,脊髓内Glu、GABA及大脑皮质中SP、Dyn A1-13可能参与癌症侵袭镜像痛的发生和维持机制,加巴喷丁通过这一机制对癌症侵袭镜像痛模型小鼠发挥镇痛作用。

关键词：镜像痛癌症侵袭痛加巴喷丁神经化学物质

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乌头碱致急性自发性钙释放的机制研究

乌头碱致急性自发性钙释放的机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：石晓路余丞浩于友华孙明杰北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室中国中医科学院医学实验中心

【目的】研究乌头碱致心肌细胞急性白发性钙释放的作用及其基于钙信号的机制研究。【材料和方法】急性分离大鼠左心室心肌细胞,灌流含不同浓度的乌头碱溶液,使用多细胞钙瞬变检测系统检测心肌细胞的舒张末期钙浓度（F0）、钙瞬变幅度（... 详细信息

【目的】研究乌头碱致心肌细胞急性白发性钙释放的作用及其基于钙信号的机制研究。【材料和方法】急性分离大鼠左心室心肌细胞,灌流含不同浓度的乌头碱溶液,使用多细胞钙瞬变检测系统检测心肌细胞的舒张末期钙浓度（F0）、钙瞬变幅度（ΔF）变化和自发性钙释放（SCR）发生率。分析钠通道、钙通道、钠钙交换体、钙调蛋白激酶、肾上腺素能受体阻断下乌头碱诱导心肌细胞SCR发生率、F0、ΔF的变化。使用单细胞收缩与离子检测系统检测乌头碱对持续搏动状态下心肌细胞内钙,钙瞬变,SERCA和NCX功能、肌浆网钙容量及钙泄漏影响。化学发光法检测乌头碱作用下细胞胞浆cAMP含量,westenblot检测p-Ser16-PLB,PLB,SERCA-2a。【结果】0.3,1,3μmol·L乌头碱能浓度依赖性诱发心肌细胞出现自发性钙释放,发生率分别为9.2±8.2%,69.0±8.1%,80.1±5.6%;同时能够提高舒张末期钙浓度、钙瞬变幅度。利多卡因、KB-R7943及其联合应用下,利多卡因能够明显降低钙瞬变幅度但仍高于正常细胞,单独或联合使用KB-R7943能够使舒张期钙和钙瞬变恢复至正常水平,乌头碱诱导的心肌细胞SCR发生率均发生下降且三者之间无显著性差异。证明乌头碱主要通过钠通道-反向钠钙交换（NaC-rNCX）途径增加钙离子浓度并诱发自发性钙释放。硝苯地平能够降低SCR发生率同时大幅降低钙瞬变幅度,但其与利多卡因联用并未协同降低SCR发生率。说明L-型钙通道贡献的钙参与了钙不节律释放过程,但并非主导因素。阻断钙调蛋白激酶（CaMKⅡ）不能有效消除乌头碱致心肌细胞SCR发生率,而阻断肾上腺素能受体（AR）能够有效消除SCR发生率。联合应用AR阻断剂和钠通道阻滞剂能够达到消除SCR最佳效果,使乌头碱在1μmol·L的SCR发生率降低至9.0±1.4%。0.3μmol·L乌头碱能增加心肌收缩力及钙瞬变幅度和速率;加快舒张期的钙消除速率;增强SERCA蛋白活性并增加肌浆网内的钙容量,造成肌浆网钙泄漏水平增加;显著增加钙瞬变过程中钙从肌浆网释放占肌浆网内钙容量的比例。乌头碱能够导致细胞胞浆内cAMP含量升高,分子生物学结果显示乌头碱能够使Ser16-PLB磷酸化水平增加,调节SERCA2a使其活性增强,使肌浆网摄取钙增多,造成肌浆网内钙超载,使RyR受体对钙敏感性增加,钙泄漏增多。【结论】乌头碱致心肌细胞急性自发性钙释放不仅由于调控NaC-rNCX导致胞浆内钙升高,肾上腺素能受体介导的cAMP通路激活造成的肌浆网内钙超载和钙泄漏参与了乌头碱的毒性机制。

关键词：乌头碱肌浆网内钙钙泄漏肌浆网钙泵环磷酸腺苷

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首乌方对6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内GABA水平变化的调节作用

首乌方对6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内GABA水平变化的调...

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第五届中国药理学会补益药药理专业委员会学术研讨会

作者：王丹巧焦玥刘洋吴兆恩中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700

目的：观察抑制性氨基酸类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)水平在6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内的变化以及首乌方对其的影响。方法：SD大鼠,用微透析探针在纹状体内灌流6-OHDA制作急性脑损伤模型;6-OHDA纹状体内注射制作PD模型;PD模... 详细信息

目的：观察抑制性氨基酸类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)水平在6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内的变化以及首乌方对其的影响。方法：SD大鼠,用微透析探针在纹状体内灌流6-OHDA制作急性脑损伤模型;6-OHDA纹状体内注射制作PD模型;PD模型基础上美多芭诱发成为LID的模型。对3种模型大鼠采用微透析技术,在清醒自由活动状态下进行纹状体细胞外液动态采样,高效液相-荧光法检测透析液中GABA的浓度。结果：6-OHDA灌流造成的急性脑损伤大鼠模型,GABA浓度随6-OHDA灌流而显著升高,停灌后快速下降,可恢复至接近正常水平;美多芭抑制了GABA浓度的快速升高,并使其下降缓慢;首乌方与美多芭联用可进一步降低GABA的快速升高。

关键词： GABA 脑内微透析首乌方

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