检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2007年第5期23卷 524-527页

作者：陈义锋金宁一贾雷立鲁会军南文龙田明尧陈晓月马海利马鸣潇刘成宏吉林大学畜牧兽医学院长春130062 中国人民解放军军事医学科学院11所全军基因工程重点实验室长春130062 军事医学科学院疾病预防所北京100071

目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多... 详细信息

目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多表位基因插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至鸡痘病毒表达载体pUTA-2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA。应用脂质体介导的转染法,将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压筛选挑斑纯化后传代,并对重组以鸡痘病毒进行PCR和IFA检测和Western blot分析。结果成功构建了重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA,PCR、IFA和Western blot检测阳性。结论筛选出稳定共表达H5H7HA基因和通用多表位基因的重组鸡痘病毒vUTA2-H7HA-Epi-H5HA株,该重组鸡痘病毒的构建为跨种通用型流感病毒活载体疫苗的研究奠定了物质基础。

关键词：重组鸡痘病毒多表位基因(Epi) 构建

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鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)末端前体蛋白的基因结构分析

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病毒学报 1997年第4期13卷 351-356页

作者：曾力宇金奇章金钢李茂祥姚二梅殷震侯云德中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室中国人民解放军农牧大学军事兽医研究所

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株ＡＡ－２，经常规方法提取其病毒核酸后，组建了完整的限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库，并对其中ＨｉｎｄⅢ（２１．０ｍ．ｕ．）－ＳａｃⅠ（３３．２ｕ．）进行了... 详细信息

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株ＡＡ－２，经常规方法提取其病毒核酸后，组建了完整的限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库，并对其中ＨｉｎｄⅢ（２１．０ｍ．ｕ．）－ＳａｃⅠ（３３．２ｕ．）进行了序列测定。同源比较分析证明：其Ｌ链含编码病毒末端前体蛋白，容量为５８０个氨基酸残基（ａａ）的开放读码框架（Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）。由此推导的多肽氨基酸序列及结构特点，如保守序列、核定位信号（Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ）。等与其他腺病毒的相应多肽存在较大差异。本文为阐明腺病毒末端前体蛋白参与ＤＮＡ复制起始的机制提供了新的依据。

关键词：鸡减蛋综合征病毒末端前体蛋白基因结构

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衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的克隆、表达及纯化

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中国老年学杂志 2010年第5期30卷 635-638页

作者：王飞朱庆三苗旭漫胡宁宁李霄金宁一中国人民解放军第208医院吉林大学中日联谊医院吉林长春130033 军事医学科学院军事兽医研究所基因工程重点实验室

目的构建含衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的原核表达载体,经转化***以表达CPAF融合蛋白,研究其生物学功能。方法从病料中克隆得到CPAF的原始基因,将PCR产物经纯化连接到pMD18-T,将重组质粒pMD-CPAF经NdeI和BamHI双酶切,与用相同酶消化... 详细信息

目的构建含衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的原核表达载体,经转化***以表达CPAF融合蛋白,研究其生物学功能。方法从病料中克隆得到CPAF的原始基因,将PCR产物经纯化连接到pMD18-T,将重组质粒pMD-CPAF经NdeI和BamHI双酶切,与用相同酶消化的原核表达载体pET42b(+)连接,建立pET42b(+)-CPAF表达载体,阳性克隆经鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经亲和纯化、离子交换纯化、分子筛纯化融合蛋白,进行SDS-PAGE分析,Western印迹检测。结果经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确。SDS-PAGE和West-ern印迹结果显示在70kD处呈现单一蛋白条带,pET42b(+)-CPAF重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了CPAF天然蛋白,目的蛋白占全菌体蛋白的20%左右,采用镍柱的亲和纯化后,可达70%左右。结论经DNA测序、SDS-PAGE、Western印迹检测表明成功构建了能够稳定表达可溶性CPAF的菌株,并获得纯化CPAF的方法,为今后CPAF的研究及应用奠定了基础。

关键词：衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF) 表达纯化生物学功能

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季节性和大流行性H1N1流感血凝素DNA疫苗电穿孔免疫小鼠及攻毒保护实验

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中国科学：生命科学 2011年第2期41卷 143-149页

作者：谭磊鲁会军张丹王开艳田明尧刘存霞刘燕瑜胡博金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所基因工程重点实验室长春130062 吉林大学农学部畜牧兽医学院长春130062 延边大学农学院延吉133400

在流感病毒疫苗中,DNA疫苗有望成为常规疫苗的替代品.研究构建了两个分别编码A/New Caledonia/20/99(H1N1)和A/California/04/2009(H1N1)流感病毒株血凝素抗原的DNA疫苗pV1A5和pVEH1,目的抗原经验证能够正确表达后,利用小鼠模型通过电... 详细信息

在流感病毒疫苗中,DNA疫苗有望成为常规疫苗的替代品.研究构建了两个分别编码A/New Caledonia/20/99(H1N1)和A/California/04/2009(H1N1)流感病毒株血凝素抗原的DNA疫苗pV1A5和pVEH1,目的抗原经验证能够正确表达后,利用小鼠模型通过电穿孔方法肌肉注射免疫进行疫苗免疫效力评价.采用血凝抑制实验和酶联免疫吸附实验对免疫小鼠的血清进行血凝素特异性抗体检测,对血凝素特异性的T淋巴细胞经IFN-γ酶联免疫斑点实验进行检测.然后选择小鼠适应株A/NewCaledonia/20/99(H1N1)100个半数致死剂量对候选疫苗免疫的小鼠攻毒并监测生存率和体重变化率,以此评价疫苗保护效力.两疫苗组免疫小鼠T淋巴细胞和体液免疫水平显著高于pVAX1空载体对照组(P<0.05).此外,pV1A5组能够100%保护免疫小鼠抵抗100致死剂量同源病毒小鼠适应株的攻毒,而同种病毒下pVEH1组只有40%的保护率.结果表明,本实验构建的季节性流感DNA疫苗能够对同源病毒攻毒提供完全保护,而大流行流感株DNA疫苗只能部分抵抗季节性流感病毒.

关键词：季节性流感大流行性流感血凝素 DNA疫苗电穿孔 H1N1流感病毒

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鸡减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndrome Virus,EDSV)巯基内肽酶的基因序列分析

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病毒学报 1997年第2期13卷 176-179页

作者：曾力宇金奇朱雷章金钢殷震侯云德中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室中国人民解放军农牧大学军事兽医研究所

鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）巯基内肽酶的基因序列分析曾力宇１金奇１朱雷１章金钢２殷震２侯云德１关键词鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），巯基内肽酶（Ｔｈｉｏｌ－ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄ... 详细信息

鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）巯基内肽酶的基因序列分析曾力宇１金奇１朱雷１章金钢２殷震２侯云德１关键词鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），巯基内肽酶（Ｔｈｉｏｌ－ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ），核苷酸序列分析ＥＤＳ病毒...

关键词：鸡病毒鸡减蛋综合征病毒巯基内肽酶基因序列

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鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因组特点

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科学通报 1998年第5期43卷 524-527页

作者：曾力宇金奇章金钢李茂祥李虹朱雷殷震侯云德中国预防医学科学院病毒研究所基因工程国家重点实验室北京100052 中国人民解放军农牧大学军事兽医研究所长春130062

在完成鸡减蛋综合征病毒中国株AA2全基因组核苷酸序列测定的基础上 ,对其基因组的结构特点进行了分析 .结果表明 :AA2株基因组具有腺病毒科成员的某些结构特点 .尽管核苷酸及氨基酸序列的同源性较低 ,但是位于E2区中编码与病毒繁殖和基... 详细信息

在完成鸡减蛋综合征病毒中国株AA2全基因组核苷酸序列测定的基础上 ,对其基因组的结构特点进行了分析 .结果表明 :AA2株基因组具有腺病毒科成员的某些结构特点 .尽管核苷酸及氨基酸序列的同源性较低 ,但是位于E2区中编码与病毒繁殖和基因组复制相关的一些酶类或调节蛋白 ,以及组装病毒颗粒所需的结构蛋白等与其他腺病毒相似 .此外 ,AA2株基因组中还发现存在一些与基因组调控及与某些重要功能相关的核心序列或基序 .AA2株基因组的另一结构特征为与其他腺病毒成员基因组相比 ,没有明显的E3和E4区结构 .在与其他腺病毒E3和E4区相对应的区域 ,AA2株基因组的结构变异较大 ,所编码的蛋白产物与至今所发现的所有腺病毒科成员均不相同 .提示AA2株为腺病毒科中的一个具有独特结构特点的成员 .

关键词：鸡病减蛋综合征病毒基因组结构核苷酸序列

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O型口蹄疫病毒O/LZ株基因组全长cDNA的构建

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中国病原生物学杂志 2006年第3期1卷 164-167页

作者：马鸣潇金宁一刘慧娟沈国顺金明兰郑敏鲁会军贾雷力金扩世中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室

目的构建O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/LZ株基因组全长cDNA。方法根据FMDV基因组和克隆载体的限制性内切酶酶切位点,将FMDV基因组设计为4段,进行反转录和扩增(RT-PCR),得到的片段分别克隆到质粒pMD18T-vetcor,筛... 详细信息

目的构建O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)O/LZ株基因组全长cDNA。方法根据FMDV基因组和克隆载体的限制性内切酶酶切位点,将FMDV基因组设计为4段,进行反转录和扩增(RT-PCR),得到的片段分别克隆到质粒pMD18T-vetcor,筛选阳性重组质粒,测序正确的重组质粒(pMD18-S、pMD18-I、pMD18-P1和pMD18-P2)保存备用。然后对S区、I区和P2片段重新设计引物,其中S区的上游引物引入T7启动子序列;I区上游引物引入6个C,下游引物带有FMDV基因组中唯一酶切位点NruⅠ;用于3′端扩增的下游引物引入16个T,并以pMD18-S和pMD18-I为模板,对S区和I区进行融合PCR获得IS,以pMD18-P2为模板对P2片段进行2次PCR,获的带16个T的P3片段。将扩增片段克隆到pMD18T-vetcor,在pBuescriptⅡSK(-)中进行长片段的连接,获得基因组全长cDNA克隆。结果获得O型FMDV O/LZ株全基因组,并在此基础上构建了O/LZ株FMDV全长cDNA。结论成功构建了O型FMDV O/LZ基因组全长cDNA克隆,为进一步获得具有感染性的FMDV分子克隆,并研究该病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 cDNA RT-PCR 基因组

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口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建

口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：马鸣潇金宁一刘慧娟金明兰郑敏贾雷立金扩世中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室

本研究针对我国口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白 VPI全基因和Asia Ⅰ型F... 详细信息

本研究针对我国口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白 VPI全基因和Asia Ⅰ型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其中2个抗原表位来源于 FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株)作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个T2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7．5×20)和单一启动子 (P7．5)下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡瘟病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDV VPI基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出 OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：复合多表位抗原表达盒 OAAT 口蹄疫病毒鸡痘病毒

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猪源新城疫病毒J1L01株分离鉴定及遗传进化分析

猪源新城疫病毒J1L01株分离鉴定及遗传进化分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：鲁会军金扩世李旭王瑞琳韩松金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验

2000年,在吉林省某猪场发生具有较高发病率和死亡率的急性传染病,发病率达到40-50%,病死率15%,取其脾、肺、肾等组织进行电镜观察,可见副粘病毒样颗粒,表明其病原可能为某种猪源副粘病毒,命名为JL01株。在对该病毒的的血凝、血凝抑制等... 详细信息

2000年,在吉林省某猪场发生具有较高发病率和死亡率的急性传染病,发病率达到40-50%,病死率15%,取其脾、肺、肾等组织进行电镜观察,可见副粘病毒样颗粒,表明其病原可能为某种猪源副粘病毒,命名为JL01株。在对该病毒的的血凝、血凝抑制等生物学特性进行鉴定后,初步确定该种猪副粘病毒为猪源新城疫病毒。该病毒对鸡胚平均致死时间（MDT）和半数致死量(EID)分别为55.2h和10/0.1mL,表明该毒株属于新城疫病毒强毒株。在此基础上,采用RT-PCR方法克隆了猪源新城疫病毒F基因,与其它10株NDV毒株进行序列比较分析,结果表明,IL01株与B1、LaSota、Clone30等经典的新城疫病毒弱毒株同源性较高（91.5%-98.5%）,与ZJ1、Mukteswar等强毒株的同源性较低。F基因氨基酸裂解位点的序列为G-K-Q-G-R-L,与弱毒株序列完全相同。基因分型结果表明JL01株属于基因Ⅰ型。因此,本研究所分离到感染猪的新城疫病毒属于基因变异的新城疫病毒弱毒株,但其致病力与强毒株相当。

关键词：猪源新城疫病毒分离鉴定 F基因分析

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口蹄疫病毒泛亚株VP1基因的克隆与原核表达

口蹄疫病毒泛亚株VP1基因的克隆与原核表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：鲁会军韩松郑敏李旭李昌金扩世金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验

根据口蹄疫流行毒株设计一对包含VP1部分基因编码区的特异性引物,扩增出VP1基因633bp的特异带,并将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T载体上。再用设计的酶切位点将VP1基因分别连接到两种原核表达载体上,构建了重组质粒pETCKS-VP1及pET28a-V... 详细信息

根据口蹄疫流行毒株设计一对包含VP1部分基因编码区的特异性引物,扩增出VP1基因633bp的特异带,并将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T载体上。再用设计的酶切位点将VP1基因分别连接到两种原核表达载体上,构建了重组质粒pETCKS-VP1及pET28a-VP1,转入BL21菌中进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,VP1基因在两种表达系统中均高效表达.最后,对表达的蛋白通过包涵体及切胶纯化的方法进行纯化,获得了高纯度的VP1蛋白。

关键词：口蹄疫 VP1基因克隆表达

来源：评论

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