检索结果-内蒙古大学图书馆

陆军军医大学学报 2025年第2期47卷 141-150页

作者：孟子鹤徐永茹邓肇达张雨欣杨鹏辉扈瑞平内蒙古医科大学基础医学院内蒙古呼和浩特中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部研究所北京

目的探究基于反向遗传学(reversed genetics,RG)技术构建的重组溶瘤流感病毒OvFluGM-CSF联合化疗药吉西他滨(gemcitabine,GEM)杀伤胰腺癌细胞的效果。方法前期利用RG技术成功拯救重组溶瘤病毒OvFlu-GM-CSF,通过鸡红细胞凝集实验、透... 详细信息

目的探究基于反向遗传学(reversed genetics,RG)技术构建的重组溶瘤流感病毒OvFluGM-CSF联合化疗药吉西他滨(gemcitabine,GEM)杀伤胰腺癌细胞的效果。方法前期利用RG技术成功拯救重组溶瘤病毒OvFlu-GM-CSF,通过鸡红细胞凝集实验、透射电镜、病毒复制等对OvFlu-GM-CSF进行全面鉴定,CCK-8法检测OvFlu-GM-CSF在不同时间(24、48、72 h)、不同感染复数(MOI=0、0.1、1.0、3.0)条件下,对胰腺癌细胞系(Panc02、PANC-1、SW1990、BxPC-3)及正常胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)存活率的影响。利用胰腺癌小鼠皮下荷瘤模型,按照完全随机法将6周龄雌性C57BL/6小鼠分为4组(n=9):PBS组、重组溶瘤病毒组(OvFlu-GM-CSF组)、吉西他滨组(GEM组)以及重组溶瘤病毒与吉西他滨联合治疗组(OvFlu-GM-CSF+GEM组),并分别给予PBS、OvFlu-GM-CSF、GEM、OvFlu-GMCSF+GEM治疗,监测小鼠肿瘤体积及存活率等指标的变化。采用多重免疫荧光染色技术分析肿瘤组织中T细胞浸润及增殖情况。通过HE染色检测小鼠主要器官(心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑组织)的病理变化,小鼠血清肝功能实验检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)酶活性水平,以评估重组溶瘤病毒的安全性。结果重组溶瘤流感病毒OvFlu-GM-CSF的血凝效价为28,其病毒形态符合流感病毒典型特征,且病毒在胰腺癌细胞内可选择性复制。在细胞水平,OvFlu-GM-CSF在感染时间为48 h、MOI=3.0的条件下,与感染时间为48 h、MOI=0比较,对Panc02、PANC-1、SW1990、BxPC-3具有显著的选择性杀伤作用(P<0.01),且细胞存活率随着MOI值的增加以及感染时间的延长而逐渐降低(P<0.01),但对HPDE6-C7无明显影响。在胰腺癌荷瘤小鼠体内,与PBS组的肿瘤体积比较,OvFlu-GM-CSF组、OvFlu-GM-CSF+GEM组显著减小(P<0.01)。多重免疫荧光检测结果显示在OvFlu-GM-CSF+GEM组小鼠的肿瘤组织中T淋巴细胞浸润显著增加;在小鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑组织中未观察到明显病理变化;与PBS组比较,OvFlu-GM-CSF组、GEM组、OvFlu-GM-CSF+GEM组小鼠血清中ALT及AST酶活性水平无明显差异。结论通过反向遗传学技术构建的重组溶瘤流感病毒OvFlu-GM-CSF与化疗药GEM联合应用,提升了对胰腺癌细胞的杀伤效能,并有效激活了机体的抗肿瘤免疫应答。

关键词：溶瘤流感病毒吉西他滨胰腺癌联合治疗

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通用流感mRNA候选疫苗的构建及免疫效果评价

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陆军军医大学学报 2024年第7期46卷 725-731页

作者：田昱莹邓卓雅李聪孙芳曹蕊杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部研究所北京100853

目的构建通用流感mRNA疫苗并全面评价其免疫保护效果。方法优化流感病毒株A/California/04/2009的血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)和基质蛋白2胞外区(matrix protein 2 ectodomain,M2e)抗原序列,并将HA、NP和3个串联的M2e(3M2e)分别克隆至pcDNA3.1载体,通过线性化、体外转录、酶学法加帽、酶促加尾合成mRNA,命名为mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e。3种mRNA分别转染293T细胞后,通过免疫荧光实验鉴定蛋白的表达。利用脂质纳米颗粒分别包裹mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e并测量其粒径和电位。再将3种mRNA等体积混合制备成Comb-mRNA疫苗。将28只6周雌性Balb/c小鼠(体质量为18~22 g)按简单随机分组法分为2组:LNP组(n=14)和Comb-mRNA组(n=14)。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)、微量中和(microneutralization,MN)实验评价流感mRNA疫苗诱导小鼠产生的血清抗体滴度;通过流式细胞术评价Comb-mRNA疫苗诱导的细胞免疫反应。采用5LD_(50)野生型H1N1流感病毒株感染小鼠评价Comb-mRNA疫苗的免疫保护效果。结果成功构建mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e,且3种mRNA均能在293T细胞表达。脂质纳米颗粒包裹mRNA平均粒径为(119.53±6.5)nm,平均电位为(-8.23±1.3)mV。与LNP组比较,Comb-mRNA组疫苗的HI几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)达179.6,MN的GMT达201.6,同时诱导IFNγ+CD4+/CD8+T细胞比例升高。Comb-mRNA组在加强免疫后2周能够提供对5LD_(50)野生流感H1N1亚型病毒的保护。结论通用流感疫苗候选疫苗Comb-mRNA能够诱导小鼠免疫反应并保护小鼠免受病毒感染。

关键词： mRNA疫苗流感疫苗血凝素核蛋白基质蛋白2胞外区

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嵌合IL-21的重组溶瘤流感病毒构建及其在肝癌中的溶瘤机制

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陆军军医大学学报 2024年第24期46卷 2736-2744页

作者：曹蕊曾桂能田昱莹李聪肖瑞雪徐永茹杨鹏辉康毅敏内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部研究所北京100853

目的拯救嵌合白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)的重组溶瘤流感病毒,评价其对肝细胞癌的抑制效果及安全性,并探索其联合程序性死亡受体1(programmed cell death-protein 1,PD-1)抗体增强抗肿瘤作用的机制。方法将IL-21基因片段插入... 详细信息

目的拯救嵌合白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)的重组溶瘤流感病毒,评价其对肝细胞癌的抑制效果及安全性,并探索其联合程序性死亡受体1(programmed cell death-protein 1,PD-1)抗体增强抗肿瘤作用的机制。方法将IL-21基因片段插入流感病毒PR8的非结构蛋白(nonstructural protein,NS)序列,利用反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,拯救重组溶瘤流感病毒rOV-IL-21-NS;采用半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)和血凝实验测定病毒滴度和毒力;采用反转录定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、凝胶电泳和测序分析验证外源基因是否成功插入NS序列;通过透射电镜观察病毒形态特征及大小,采用CCK-8检测其对肝癌细胞活力的影响;建立C57BL/6小鼠肝细胞癌皮下荷瘤模型,将45只8周龄雌性C57BL/6小鼠(体质量16~20 g)按简单随机分组法分为5组(每组9只):PBS组、PR8组、PD-1抗体组、rOV-IL-21-NS组和rOV-IL-21-NS联合PD-1抗体治疗组,以评价单药和联合疗法抗肿瘤效果;通过流式细胞术评价单药和联合疗法对肿瘤免疫微环境的调控作用。结果利用RG技术成功拯救重组溶瘤流感病毒rOV-IL-21-NS,经测序验证了IL-21成功插入目的序列,其可稳定传代,第6代病毒血凝效价达211,病毒滴度达106 TCID50/mL。rOV-IL-21-NS选择性降低肝癌细胞活力而对正常肝细胞无明显影响。相对于PBS组,rOV-IL-21-NS联合PD-1抗体显著抑制小鼠肿瘤的生长(P<0.001),增加脾脏组织中CD4+CD69+T及CD8+CD69+T细胞的比例(P<0.05)。结论嵌合IL-21的重组溶瘤流感病毒rOV-IL-21-NS可有效、安全地靶向杀伤肝癌细胞,协同PD-1抗体进一步增强T细胞活化,改善免疫微环境。

关键词：溶瘤病毒反向遗传学技术联合治疗白细胞介素-21 PD-1抗体肝细胞癌

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肝动脉解剖学的计算机3D影像研究及其在活体肝移植中的意义

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中国临床新医学 2020年第12期13卷 1194-1198页

作者：孟翔飞潘颖威段伟东中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部中国人民解放军总医院肝胆外科研究所全军数字肝胆外科重点实验室北京100853

目的采用计算机3D重建模型,研究肝动脉的解剖和肝脏第4段动脉的解剖,并讨论其在活体肝移植中的意义。方法采用该中心99例低位梗阻性黄疸病例的DICOM格式的薄层增强CT影像,以Intrasense Myrian®工作站进行肝脏、肝动脉、门静脉、胆... 详细信息

目的采用计算机3D重建模型,研究肝动脉的解剖和肝脏第4段动脉的解剖,并讨论其在活体肝移植中的意义。方法采用该中心99例低位梗阻性黄疸病例的DICOM格式的薄层增强CT影像,以Intrasense Myrian®工作站进行肝脏、肝动脉、门静脉、胆管的3D模型重建,并对肝动脉和A4进行描述性解剖学研究。结果99例均成功完成肝脏、肝动脉、门静脉和胆管的3D重建。按照改良的Hiatt分型,肝动脉的解剖类型1型79例(79.8%),2型14例(14.1%),3型3例(3.0%),4型2例(2.0%),5型1例(1.0%)。Couinaud分段第4段动脉参考Jin等的分型分为3型,1型38例(38.4%),2型52例(52.5%),3型9例(9.1%)。结论肝动脉及A4均存在各种变异形式,对活体肝移植具有重要影响。计算机3D重建是评估肝脏脉管解剖的良好工具。术前利用计算机3D重建进行个体化解剖学评估有利于手术设计和手术安全。

关键词：肝动脉局部解剖学肝脏移植计算机三维重建

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术中意外发现肝外胆管绒毛管状腺瘤的外科处理经验:附两例报道并文献复习

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中华肝脏外科手术学电子杂志 2023年第5期12卷 567-571页

作者：田驹孙伯洋杨荣华赵向前中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部、中国人民解放军总医院肝胆外科研究所、全军数字肝胆外科重点实验室北京100853

目的总结术中意外发现肝外胆管绒毛管状腺瘤(EHBVTA)的诊治经验。方法回顾性分析2021年4月至2022年4月解放军总医院肝胆胰外科医学部派驻第七中心收治的2例EHBVTA患者临床资料。例1男,66岁;例2女,59岁。临床症状均为间断发作上腹部疼痛... 详细信息

目的总结术中意外发现肝外胆管绒毛管状腺瘤(EHBVTA)的诊治经验。方法回顾性分析2021年4月至2022年4月解放军总医院肝胆胰外科医学部派驻第七中心收治的2例EHBVTA患者临床资料。例1男,66岁;例2女,59岁。临床症状均为间断发作上腹部疼痛,实验室检测结果均无明显异常。例1术前影像学检查示:胆囊结石,胆总管结石,肝内外胆管扩张伴管壁增厚。例2术前影像学检查示:低位胆道梗阻,胆总管下端类圆形充盈缺损,考虑胆总管结石、胆囊结石。结果例1行腹腔镜胆囊切除、胆道探查取石术,术中发现"胆管腺瘤(中上段)",一期实施肝外胆管切除、胆肠吻合术。例2行腹腔镜胆囊切除、胆道探查取石术,术中发现"胆管腺瘤(下端)",放置T管引流,4周后再次行胰十二指肠切除术。2例患者术后病理均为"胆管绒毛管状腺瘤",其中例1病灶局部呈高级别上皮内肿瘤伴癌变。2例患者随访至投稿日期未见复发。结论EHBVTA发病率低,术前诊断困难,提高诊断率、根治性切除是获得良好预后的关键。

关键词：胆管肿瘤绒毛管状腺瘤肝外胆管腺瘤误诊外科手术

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新冠肺炎遗传易感基因的研究进展

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遗传 2023年第11期45卷 963-975页

作者：李元丰吴天准陈顺琦王玉婷曾涛李若凡周钢桥中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所医学蛋白质组全国重点实验室国家蛋白质科学中心北京100850 河北大学化学与环境科学学院保定071002 广西医科大学附属肿瘤医院南宁530021 中国人民解放军医学院北京100853 中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部北京100853 南京医科大学公共卫生学院全球健康中心南京211166

新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染人体后,个体间存在显著不同的新冠肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)临床症状。机体遗传因素在新冠病毒感染后的临床转归过程中发挥重要的作用... 详细信息

新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染人体后,个体间存在显著不同的新冠肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)临床症状。机体遗传因素在新冠病毒感染后的临床转归过程中发挥重要的作用。以全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)为代表的遗传关联研究方法,已成功鉴定了多个与新冠肺炎相关的易感基因,为新冠肺炎防诊治措施的研发提供了理论基础。本文综述了新冠肺炎遗传易感基因的研究进展,包括多种表型、多个人群、多种遗传变异类型的新冠肺炎全基因组关联研究以及易感基因区域的精细定位研究等,旨在为新冠肺炎遗传易感基因的后续研究提供参考。

关键词：新冠病毒新冠肺炎遗传易感基因全基因组关联研究

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TM6SF1通过抑制KRAS-MEK-ERK信号通路影响肝内胆管癌细胞的生物学行为

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中国癌症防治杂志 2024年第3期16卷 261-270页

作者：陈顺琦刘信燚曾涛刘梦玉王玉婷辛海贝李元丰周钢桥河北大学化学与材料科学学院保定071002 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所医学蛋白质组全国重点实验室国家蛋白质科学中心北京100850 中国人民解放军医学院北京100853 中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部海军军医大学第三附属医院肝外一科上海201805

目的探究六次跨膜蛋白1(transmembrane 6 superfamily member 1,TM6SF1)在肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,iCCA)中的生物学行为及其作用机制。方法收集2008年8月至2012年12月于东方肝胆外科医院(中国上海)收治的26例iCCA患者肿瘤组织及相应癌旁正常组织。采用RT-qPCR分析TM6SF1 mRNA表达情况;下载FU-iCCA队列iCCA患者的临床数据和肿瘤组织mRNA测序数据,分析TM6SF1与iCCA患者的临床特征以及KRAS-MEK-ERK信号通路相关分子的相关性,并进行通路富集分析;基于TCGA数据库,采用Log-rank分析TM6SF1的表达水平与患者预后的关系。利用瞬时转染技术在人源肝胆管癌细胞系RBE、HCCC-9810中构建瞬时敲低或过表达TM6SF1的肝胆管癌细胞株。采用CCK-8、平板克隆形成、Transwell实验评估TM6SF1对RBE、HCCC-9810细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。采用流式细胞术实验评估TM6SF1对RBE、HCCC-9810细胞周期和凋亡的影响。采用Ras活性检测实验检测GTP-RAS活性。采用Western blot法检测信号通路节点分子的表达情况。结果相比于癌旁组织,TM6SF1 mRNA表达水平在iCCA癌组织中显著下调(P<0.001),且TM6SF1低表达的iCCA患者其肿瘤恶性程度更高,总生存率和无病生存率更低(均P<0.05)。敲低TM6SF1促进RBE、HCCC-9810细胞的增殖、迁移与侵袭能力,抑制细胞凋亡(均P<0.01);而过表达TM6SF1抑制RBE、HCCC-9810细胞的增殖、迁移与侵袭能力,促进细胞凋亡(均P<0.05),但均不影响细胞周期。基于FU-iCCA队列mRNA测序数据的通路富集分析显示,TM6SF1低表达与KRAS信号通路的激活相关。RBE和HCCC-9810细胞中敲低TM6SF1可增强GTP-RAS活性,上调p-MEK和p-ERK的蛋白表达(均P<0.001);而过表达TM6SF1可抑制GTP-RAS活性,下调p-MEK和p-ERK的蛋白表达(均P<0.01)。使用KRAS激动剂KRA-533处理瞬时过表达TM6SF1的细胞株后GTP-RAS、p-MEK、p-ERK蛋白表达水平均增加(均P<0.05)。结论TM6SF1可能通过抑制KRAS-MEK-ERK信号通路抑制iCCA细胞的增殖、迁移与侵袭能力,促进细胞凋亡,并且TM6SF1的低表达与iCCA的不良预后相关。

关键词：肝内胆管癌 TM6SF1 增殖迁移侵袭凋亡 KRAS

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KAT8通过增强METTL3表达促进结直肠癌细胞系增殖

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基础医学与临床 2024年第7期44卷 931-939页

作者：张鹏举李杰张梦迪孙少科许寅喆中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理学系北京100005 北京大学第三医院妇产科临床研究中心北京100191 中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆胰外科医学部全军肝胆外科研究所全军数字肝胆外科重点实验室北京100853

目的探究赖氨酸乙酰转移酶8(KAT8)在结直肠癌细胞增殖过程中所扮演的角色及潜在作用机制。方法通过TCGA数据库的RNA-seq数据分析KAT8在结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织的表达情况;集落形成实验和CCK8法检测KAT8敲低细胞的增殖;利用GEO... 详细信息

目的探究赖氨酸乙酰转移酶8(KAT8)在结直肠癌细胞增殖过程中所扮演的角色及潜在作用机制。方法通过TCGA数据库的RNA-seq数据分析KAT8在结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织的表达情况;集落形成实验和CCK8法检测KAT8敲低细胞的增殖;利用GEO数据库对KAT8敲低细胞与对照细胞的差异基因进行分析,并进一步进行功能通路富集分析;利用cBioPortal网站分析结直肠癌数据库中KAT8与调控N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的相关性;Western blot检测KAT8和METTL3的蛋白表达。结果与人正常结直肠组织相比,KAT8在结直肠癌中高表达(P<0.05);敲低或选择性抑制KAT8抑制结直肠癌细胞系增殖(P<0.05);敲低KAT8降低结直肠癌细胞总RNA的m6A修饰水平(P<0.05);敲低KAT8抑制METTL3的表达(P<0.05);过表达METTL3能够逆转敲低KAT8抑制的细胞增殖(P<0.05)。结论KAT8通过增强METTL3介导的m6A修饰进而促进结直肠癌细胞系的增殖。

关键词： KAT8 METTL3 N6-甲基腺苷细胞增殖

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