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武汉大学学报(医学版) 2025年第2期46卷 153-159页

作者：李东旭宋振举王璐于兵戴青青复旦大学附属妇产科医院重症医学科上海200082 复旦大学附属中山医院急诊科/复旦大学应急救援与急危重症研究所上海200032 武汉大学人民医院重症医学科湖北武汉430060 中国人民解放军海军军医大学细胞生物学教研室上海200433

目的:探讨抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)对脓毒症急性肺损伤肺泡屏障的保护作用。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成3组,①脓毒症组(LPS组):将小鼠饥饿16 h后,腹腔注射20 mg/kg脂多糖(LPS);②脓毒症+ATⅢ组(LPS+ATⅢ组):LPS注射2 h后,尾静脉注射750 I... 详细信息

目的:探讨抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)对脓毒症急性肺损伤肺泡屏障的保护作用。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成3组,①脓毒症组(LPS组):将小鼠饥饿16 h后,腹腔注射20 mg/kg脂多糖(LPS);②脓毒症+ATⅢ组(LPS+ATⅢ组):LPS注射2 h后,尾静脉注射750 IU/kg ATⅢ;③对照组(Control组):参照LPS和ATⅢ的给药途径与时间分别注射等体积生理盐水。在ATⅢ给药24 h后收集血清、肺泡灌洗液以及肺组织等标本,采用HE染色结合肺损伤评分评价肺组织的形态结构与损伤程度;采用肺湿/干重比(W/D)、肺泡灌洗液(BALF)中的细胞数量与蛋白量以及FITC-Dextran渗透实验测量肺泡屏障通透性;采用免疫组织学染色检测肺组织细胞间紧密连接组成蛋白的表达量。结果:LPS组的肺损伤评分、肺湿/干重比(W/D值)、肺泡屏障通透性均较Control组显著升高(P<0.01),细胞间紧密连接的组成蛋白ZO-1、Occludin和Claudin3的表达水平均显著降低(P<0.001)。而LPS+ATⅢ组的肺损伤评分、W/D值、肺泡屏障通透性较LPS组均降低(P<0.05),ZO-1、Occludin和Claudin3表达水平升高(P<0.01)。结论:ATⅢ增加细胞间紧密连接组成蛋白的表达,进而降低肺泡屏障的通透性,从而减轻脓毒症急性肺损伤。

关键词：脓毒症急性肺损伤抗凝血酶Ⅲ 肺泡屏障

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功能胰腺β细胞获取与应用的研究进展

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生物工程学报 2022年第9期38卷 3316-3328页

作者：向桂齐阳刘清桂胡以平王敏君陈费中国人民解放军海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433 中国人民解放军海军军医大学基础医学院学员六大队上海200433

胰腺β细胞生成和分泌的胰岛素对维持人体正常血糖起到关键作用,胰岛素分泌不足或利用缺陷将会导致糖尿病(diabetes mellitus,DM)的发生。经典的DM治疗方法包括药物治疗和胰岛移植,新兴的胰腺β细胞替代疗法可以使患者摆脱对药物的依赖... 详细信息

胰腺β细胞生成和分泌的胰岛素对维持人体正常血糖起到关键作用,胰岛素分泌不足或利用缺陷将会导致糖尿病(diabetes mellitus,DM)的发生。经典的DM治疗方法包括药物治疗和胰岛移植,新兴的胰腺β细胞替代疗法可以使患者摆脱对药物的依赖并且可以缓解胰岛移植供体缺乏的难题。通过重编程技术或者定向诱导干细胞分化等方法可以获得胰腺β样细胞,相关功能已经在体外细胞和动物体内水平得以验证。有些医院已开展了β细胞替代疗法的临床试验。体外获取具有功能的胰腺β样细胞有望成为临床DM细胞治疗的可靠来源。文中总结了胰腺β细胞主要获取方式,讨论了现有方法存在的问题,为将来获取和应用功能胰腺β细胞提供了思路。

关键词：糖尿病干细胞类器官胰腺β细胞分化

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基于HT-SELEX筛选的节球藻毒素-R适配体的鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2018年第1期34卷 69-76页

作者：欧阳生群胡波周蓉李振钢焦炳华王梁华中国人民解放军海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

节球藻毒素-R(nodularin-R,NOD-R)是具有强烈肝毒性的蓝藻毒素。然而,现有的NOD-R检测技术均存在一定的局限性,亟待开发一种新的检测方法。本文利用指数富集的配基系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,... 详细信息

节球藻毒素-R(nodularin-R,NOD-R)是具有强烈肝毒性的蓝藻毒素。然而,现有的NOD-R检测技术均存在一定的局限性,亟待开发一种新的检测方法。本文利用指数富集的配基系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术结合高通量测序(HTSELEX),筛选出NOD-R特异的高亲和力适配体。生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术对适配体的鉴定结果表明,适配体H62与NOD-R之间的亲和力最高,达到了168 n M。而且,该适配体不与其他毒素结合,具有较高的特异性。以上结果表明,适配体H62有望作为NOD-R检测新方法——适配体生物传感器的分子识别元件。

关键词：高通量测序-指数富集的配基系统进化技术节球藻毒素-R 适配体生物膜干涉技术

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我国赫坎按蚊种团的分子鉴别及中华按蚊的区系分布研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第1期38卷 58-66,73页

作者：彭恒陈翰明陈辉莹王琰李翔宇李基旭杨振洲马雅军中国人民解放军海军军医大学病原生物学教研室上海200433 中国人民解放军海军军医大学热带病学教研室上海200433 吉林省延边州疾病预防控制中心病媒与寄生虫病防治科延吉133001 中国人民解放军疾病预防控制中心北京100071

目的改进赫坎按蚊种团部分成员种的多重PCR鉴别方法,鉴别赫坎按蚊种团中的中华按蚊,研究我国中华按蚊的区系分布及其影响因素。方法依据赫坎按蚊种团成员种中华按蚊、八代按蚊、雷氏按蚊、比伦按蚊和克莱按蚊的核糖体DNA内转录间隔区2 (... 详细信息

目的改进赫坎按蚊种团部分成员种的多重PCR鉴别方法,鉴别赫坎按蚊种团中的中华按蚊,研究我国中华按蚊的区系分布及其影响因素。方法依据赫坎按蚊种团成员种中华按蚊、八代按蚊、雷氏按蚊、比伦按蚊和克莱按蚊的核糖体DNA内转录间隔区2 (rDNA-ITS2)序列差异设计种特异引物,改进多重PCR分子鉴别方法。2013-2018年,在我国8个省(直辖市、自治区)共18个地点,以诱虫灯和人工吸取相结合的方法采集按蚊,依据形态特征初步鉴定为赫坎按蚊种团的成员种。提取单只蚊虫基因组DNA,使用改进的多重PCR方法鉴定种类。对多重PCR法无扩增产物的个体分析rDNA-ITS2序列,在GenBank上进行BLAST比对,确定其种类。查找我国以及韩国和俄罗斯远东地区用分子特征鉴别为中华按蚊的文献,结合本研究结果,汇总中华按蚊采集地的地理位置和气候数据,使用地理探测器模型计算影响决定力q值,分析经度、纬度、年平均气温和年平均降雨量对中华按蚊分布的影响。结果改进的多重PCR法一次扩增即可依据扩增片段大小鉴别赫坎按蚊种团的5个成员种:中华按蚊(490 bp)、雷氏按蚊(313 bp)、八代按蚊(216 bp)、克莱按蚊(386 bp)和比伦按蚊(165 bp)。在我国18个采集点共捕获赫坎按蚊种团按蚊365只,多重PCR鉴别为中华按蚊114只(来自陕西、安徽与山东的采集点)、八代按蚊34只、雷氏按蚊9只、克莱按蚊181只和比伦按蚊5只。22只多重PCR无扩增产物的蚊虫中,经rDNA-ITS2序列分析鉴定为贵阳按蚊2只、类中华按蚊1只、朝鲜按蚊8只、林氏按蚊7只和帕氏按蚊4只。获取用分子特征鉴别为中华按蚊的文献17篇,共汇总了101个采集地信息,其中有中华按蚊分布的采集点80个,无中华按蚊分布的21个地点。地理探测器软件计算获得的q值,从大到小依次为0.592 0(年平均气温)、0.507 2 (纬度)、0.351 2 (经度)和0.214 4 (年平均降雨量)。中华按蚊的分布与年平均气温关系最为密切,其次是纬度。综合分析分布地的纬度和年平均温度等结果显示,年平均气温10℃可以作为划分中华按蚊在我国分布北界线的依据。我国中华按蚊的分布范围包括云南、贵州、重庆、河南、山东、天津、江苏、安徽、湖北、浙江、上海、福建、江西、广西、广东、海南等省(直辖市、自治区)及台湾、香港、澳门特别行政区的全境,以及西藏、四川、甘肃、陕西、山西、河北、北京、辽宁等省(直辖市、自治区)的南部部分地区。结论改进的赫坎按蚊种团多重PCR分子鉴定方法快速简单、客观可靠。综合分析显示划分中华按蚊在我国分布北界线的依据是年平均气温10℃线,中华按蚊在我国的分布应小于之前记载的范围。

关键词：赫坎按蚊种团中华按蚊复合体分子鉴别区系分布

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基于环介导等温扩增微流控芯片技术快速检测蚊媒携带登革病毒方法的建立

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 234-241页

作者：姜宁白洁李平单文琪周秋明董昊炜袁浩陶峰李翔宇马雅军彭恒上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 中国人民解放军海军军医大学基础医学院病原生物学教研室上海200433 海口市疾病预防控制中心海南海口571100 中国人民解放军海军军医大学海医系上海200433

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增... 详细信息

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组。制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组。用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性。评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较。用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测。对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测。结果引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组。CprMG2引物组可检测浓度低至10-6 ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3×10^(3)拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/μl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝。最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应。LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3×10^(3)拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3×10^(4)拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×10^(3)拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3×10^(3)拷贝、1拷贝)相当。LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100%。LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性。结论建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测。

关键词：登革病毒蚊虫环介导等温扩增微流控芯片现场检测技术

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肝外胆管组织中干性细胞的研究现状和应用潜能

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中国细胞生物学学报 2023年第3期45卷 550-556页

作者：王紫君刘清桂王敏君胡以平陈费中国人民解放军海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433

肝外胆管是肝脏胆管系统的组成部分,包括胆囊、胆总管等组织。近年来研究发现肝外胆管组织中存在一群具有干性特征的细胞。这群细胞在体外可以扩增培养,形成类器官结构,改变培养条件可以使胆管上皮干性细胞分化为具有一定功能的肝细胞... 详细信息

肝外胆管是肝脏胆管系统的组成部分,包括胆囊、胆总管等组织。近年来研究发现肝外胆管组织中存在一群具有干性特征的细胞。这群细胞在体外可以扩增培养,形成类器官结构,改变培养条件可以使胆管上皮干性细胞分化为具有一定功能的肝细胞、胆管细胞以及胰腺β样细胞等。将分化后的功能细胞分别植入肝脏受损、胆管缺陷、胰腺受损的模型小鼠中,功能细胞可以修复模型小鼠受损的肝脏或胆管,分化后的功能细胞甚至可以在胰腺受损的模型小鼠中分泌胰岛素。该文描述了肝外胆管组织的发育过程,阐明了干细胞的定位分布与具体特征,介绍了肝外胆管组织干细胞治疗疾病的相关应用,为后续研究启发思路并提供参考。

关键词：肝外胆管组织胆管发育肝脏损伤细胞治疗

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中国南沙群岛美济礁蠓种描述(双翅目:蠓科)

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第5期33卷 732-736页

作者：庄松阳彭恒袁浩董昊炜周秋明单文琪杨振洲石华马雅军中国人民解放军海军军医大学海军医学系/基础医学院病原生物学教研室上海200433 中国人民解放军疾病预防控制中心有害生物防制科北京100071

目的描述中国南沙群岛美济礁的蠓种。方法2020年8月采用诱虫灯法采集蠓样本,保存于70%乙醇溶液中带回实验室,制片后依据形态特征进行鉴定。结果共鉴定蠓科铗蠓属2种和毛蠓属3种,即:栩杨铗蠓[Forcipomyia(Forcipomyia)xuyangi Yu,***.]... 详细信息

目的描述中国南沙群岛美济礁的蠓种。方法2020年8月采用诱虫灯法采集蠓样本,保存于70%乙醇溶液中带回实验室,制片后依据形态特征进行鉴定。结果共鉴定蠓科铗蠓属2种和毛蠓属3种,即:栩杨铗蠓[Forcipomyia(Forcipomyia)xuyangi Yu,***.]、依沙铗蠓[F.(F.)esakiana Tokunaga,1940]、小斧毛蠓[Dasyhelea ascia Yu,***.]、莱保毛蠓[*** Clastrier,1959]和四叶毛蠓[*** Yu,***.],其中栩杨铗蠓、小斧毛蠓、四叶毛蠓为新种,依沙铗蠓和莱保毛蠓在我国为首次记录。结论首次描述了南沙群岛的蠓类,共2属5种,未发现吸血蠓,观察标本保存于海军军医大学。

关键词：南沙群岛蠓科铗蠓毛蠓新种

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基于学为中心理念的医学细胞生物学教学改革

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2024年第12期 149-153页

作者：刘清桂王敏君高俊灵陈费中国人民解放军海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433

医学细胞生物学课程是一门培养高层次医学人才的课程,主要面向临床医学等专业开展,是一门基础核心课程。通过研究医学细胞生物学课程的教学现状,发现并总结教学实施中存在的问题,进而引进“学为中心”的概念,基于现状和具体问题提出医... 详细信息

医学细胞生物学课程是一门培养高层次医学人才的课程,主要面向临床医学等专业开展,是一门基础核心课程。通过研究医学细胞生物学课程的教学现状,发现并总结教学实施中存在的问题,进而引进“学为中心”的概念,基于现状和具体问题提出医学细胞生物学教学改革策略,分别对教学资源、教学模式和教学考评实施变革,提高了课堂质量和学生的学习效果,培养了学生的自主学习、科研实践和创新能力,达成培养符合国家需求的高素质医学人才目标。

关键词：学为中心医学细胞生物学教学改革

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脂质体介导的胚胎干细胞高效转染教学方案探索

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2022年第11期 71-73页

作者：刘清桂陈费王敏君中国人民解放军海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室上海200433

基因工程实验是一门独具专业特色的综合性实验课程。然而在实验教学过程中往往容易出现外源基因转染效率低下的技术性问题。本文通过增设脂质体毒性检测、设计不同脂质体转染试剂、调整DNA用量和脂质体用量的方式来优化实验课程内容,有... 详细信息

基因工程实验是一门独具专业特色的综合性实验课程。然而在实验教学过程中往往容易出现外源基因转染效率低下的技术性问题。本文通过增设脂质体毒性检测、设计不同脂质体转染试剂、调整DNA用量和脂质体用量的方式来优化实验课程内容,有助于实现小鼠胚胎干细胞的高效转染教学方案的优化,也提高课堂教学效果,不仅有利于胚胎干细胞特色课程的推广,同时极大开发了学生自主创新和探索精神,为学生科研素质的培养奠定了基础。

关键词：实验优化胚胎干细胞脂质体转染效率

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1株北极真菌Eutypella sp.D-1的生物活性成分研究

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中国海洋药物 2020年第2期39卷 38-41页

作者：于豪冰王晓丽胡波张建鹏卢小玲刘小宇焦炳华中国人民解放军海军特色医学中心海洋生物医药与极地医学研究室上海200433 中国人民解放军海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的对分离自北极高纬度地区的1株真菌Eutypella sp. D-1的抗肿瘤活性成分进行研究。方法运用溶剂分部萃取、硅胶柱色谱、中压ODS柱色谱以及高效液相色谱(HPLC)等多种分离方法对次级代谢产物进行分离纯化;通过运用核磁共振波谱法(NMR)... 详细信息

目的对分离自北极高纬度地区的1株真菌Eutypella sp. D-1的抗肿瘤活性成分进行研究。方法运用溶剂分部萃取、硅胶柱色谱、中压ODS柱色谱以及高效液相色谱(HPLC)等多种分离方法对次级代谢产物进行分离纯化;通过运用核磁共振波谱法(NMR)、质谱分析(MS)等波谱技术,结合文献比对,解析化合物的结构。结果从真菌Eutypella sp. D-1大米培养基萃取物中分得3个化合物,鉴定为cladoacetal C (1)、benzophomopsin A (2)、pestalospirane B (3)。结论化合物1为新化合物,化合物2、3均为首次从该属真菌中分离得到。

关键词：北极真菌 Eutypella sp. 次级代谢产物

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