检索结果-内蒙古大学图书馆

世界华人消化杂志 2004年第1期12卷 42-46页

作者：董菁成军杨倩中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组是否存在高保守区或高变区,并探讨前-前-S基因和前-X基因的存在方式. 方法:自GenBank中按血清型搜索符合要求的HBV全基因组序列,并应用Vector 6.0版软件进行核苷酸序列同源性的分析和比较. 结果:GenBan... 详细信息

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组是否存在高保守区或高变区,并探讨前-前-S基因和前-X基因的存在方式. 方法:自GenBank中按血清型搜索符合要求的HBV全基因组序列,并应用Vector 6.0版软件进行核苷酸序列同源性的分析和比较. 结果:GenBank中搜索出28个adr血清型和22个adw血清型HBV病毒株全基因组,比较后发现2种血清型的核苷酸序列总一致率分别为76.6%和73.9%;adr血清型病毒株存有高度变异区和高度变异区,一致率分别为54.5%和92.1%;adw血清型基因组内部含有高度保守区,一致率为85.0%,不含有高度变异区.前-前-S区的存在是较为普遍的现象,而前-X区的编码具有adr血清型特异性特点,在某些病毒基因组中,因为存在A2608→C/T、和C/A2733→T替换突变,导致其前-X基因编码区起始密码子突变,因此部分HBV基因组无前-X基因结构区. 结论:HBV基因组内部可能存在高度保守区,前-前-S区的存在是一个重要的现象,而前-X编码区具有adr血清型特异性的特点.

关键词：乙型肝炎病毒基因组高变区界定核苷酸序列同源性分析

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应用基因表达谱芯片技术筛选HBV前-S2蛋白反式调节基因

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世界华人消化杂志 2004年第7期12卷 1559-1563页

作者：纪冬成军董菁刘妍王建军郭江中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV S基因编码的具有多种功能的蛋白质.前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响.为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1 (-)和pcDNA3.1(-)-preS... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV S基因编码的具有多种功能的蛋白质.前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响.为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1 (-)和pcDNA3.1(-)-preS2分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析. 方法:以含有HBV全基因组的质粒G376-7(GenBank号: AF384371)作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增前-S2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-preS2.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较. 结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA事列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1 152个基因表达谱的筛选中,发现有42个基因表达水平显著上调,36个基因表达水平显著下调. 结论:HBV的前-S2蛋白是一种反式激活因子,前-S2基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.

关键词：基因表达谱芯片技术筛选 HBV 前-S2蛋白反式调节基因聚合酶链反应乙型肝炎病毒

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乙型肝炎病毒增强子的结构和调控研究

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世界华人消化杂志 2003年第7期11卷 1008-1011页

作者：王建军成军刘妍张忠东杨倩杨艳杰中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

0引言HBV属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.他的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有四个主要的开放阅读框架,分别负责编码核心... 详细信息

0引言 HBV属嗜肝DNA病毒,其基因组为3.2kb部分双链的环状DNA.他的复制需要一个RNA中间物-前基因组RNA,经过反转录产生新的DNA分子.HBV基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用.目前已确定有四个主要的开放阅读框架,分别负责编码核心抗原(pre-C/C)、核酸聚合酶(P)、表面抗原(preS/S)和X蛋白(X).这些基因的表达受到顺式元件-启动子和增强子的调控.目前在HBV基因组已发现并鉴定的顺式元件有四个启动子(C、X、SP Ⅰ、SPⅡ)、两个增强子(Enh Ⅰ和EnhⅡ)和糖皮质激素应答元件[1-4].其中增强子的作用主要是调控HBV的转录和复制.

关键词：乙型肝炎病毒增强子结构调控启动子基因突变

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丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活作用的研究

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世界华人消化杂志 2003年第7期11卷 1011-1014页

作者：杨艳杰成军陈东风钟彦伟张忠东李强中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

0引言丙型肝炎病毒(HCV)是1989年应用分子生物学技术克隆成功的一个RNA病毒,属黄病毒科,可引起慢性肝炎、肝硬化及肝细胞肝癌,目前有1.7亿人感染,干扰素联合利巴韦林是其治疗方案,但是疗效不佳[1-9].目前世界各国都在积极研究其发病机制... 详细信息

0引言丙型肝炎病毒(HCV)是1989年应用分子生物学技术克隆成功的一个RNA病毒,属黄病毒科,可引起慢性肝炎、肝硬化及肝细胞肝癌,目前有1.7亿人感染,干扰素联合利巴韦林是其治疗方案,但是疗效不佳[1-9].目前世界各国都在积极研究其发病机制,探索新的治疗措施.但由于HCV的宿主范围较窄,只能在人及黑猩猩中繁殖,为研究带来一定困难.HCV是怎样与宿主细胞相互作用的,世界上进行了广泛的研究.

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活 C蛋白异源核糖核蛋白K

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应用表达谱芯片技术对乙型肝炎病毒前-S2抗原结合蛋白S2-29反式调节基因的研究

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世界华人消化杂志 2004年第1期12卷 58-61页

作者：陆荫英刘妍成军梁耀东陈天艳邵清王琳张玲霞中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(R... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增S2-29蛋白编码基因片段,经测序鉴定后构建表达载体pcDNA3.1(-)-S2-29,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-S2-29转染的人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA 进行检测和分析. 结果:筛选出肝文库中HBV前-S2结合蛋白S2-29的编码基因,构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有9个基因表达水平显著下调,包括真核翻译延伸因子2、MAP激酶激活的死亡域、谷胱甘肽过氧化物酶、肌动蛋白、NDRG、Prosaposin、SUMO-1激活酶亚基1、胰岛素受体和1个未知功能蛋白.1个未知蛋白编码基因的表达上调. 结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV前-S2结合蛋白S2—29蛋白的反式调节基因,为进一步阐明S2—29蛋白对细胞表达调控的影响提供了新的依据.

关键词：表达谱芯片技术乙型肝炎病毒前-S2 抗原结合蛋白 S2—29反式调节基因

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乙型肝炎病毒包膜大蛋白的自激活

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世界华人消化杂志 2004年第10期12卷 2321-2324页

作者：纪冬成军陆荫英董菁郭江刘妍中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:构建乙型肝炎病毒包膜大蛋白的酵母表达载体,研究其自激活作用.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV包膜大蛋白(LHBs),前-S1蛋白(pre-S1),前-S2蛋白(pre-S2)及主蛋白(SHBs)的编码基因,并在其5’端引入EcoRI/BamHI内切酶位点,分别连... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒包膜大蛋白的酵母表达载体,研究其自激活作用.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV包膜大蛋白(LHBs),前-S1蛋白(pre-S1),前-S2蛋白(pre-S2)及主蛋白(SHBs)的编码基因,并在其5’端引入EcoRI/BamHI内切酶位点,分别连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建酵母表达质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后分别铺于含有X-α-半乳糖的营养缺陷型培养基SD/-Trp和SD/-Trp-His-Ade上进行自激活验证(蓝/白筛选).结果:成功克隆出编码各种HBV包膜蛋白的基因,构建表达载体并在酵母细胞中表达,转化了pGBKT7-LHBs和pGBKT7-preS1的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶从而在铺有X-α-半乳糖的培养基上呈现蓝色,而转化了pGBKT7-preS2和pGBKT7-SHBs的细胞只能在SD/-Trp的培养基上生长,且没有变蓝.结论:LHBs可以作为反式激活子发挥作用,代替GAL4蛋白的激活域来激活GAI4上游激活序列(GALUAS)和TATA盒,从而激活了下游报告基因(ADE2,HIS3,MEL1和LacZ)的表达,并且其自激活作用来自于前-S1结构域.

关键词：乙型肝炎病毒包膜大蛋白自激活前-S2蛋白主蛋白前-S1蛋白

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乙型肝炎病毒e抗原真核表达载体的构建及在酵母中的表达

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临床肝胆病杂志 2003年第3期19卷 166-168页

作者：陆荫英王琳刘妍李克成军张玲霞李莉中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

为探讨乙型肝炎病毒 (HBV)e抗原 (HBeAg)的功能 ,用多聚酶链反应 (PCR)的方法以HBVayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增HBeAg基因 ,克隆到pGEM -T载体中扩增并测序 ,鉴定符合GenBank报告序列。用EcoRI和PstI双酶切后回收片段 ,连接到真核表... 详细信息

为探讨乙型肝炎病毒 (HBV)e抗原 (HBeAg)的功能 ,用多聚酶链反应 (PCR)的方法以HBVayw亚型全序质粒pCP10为模板扩增HBeAg基因 ,克隆到pGEM -T载体中扩增并测序 ,鉴定符合GenBank报告序列。用EcoRI和PstI双酶切后回收片段 ,连接到真核表达载体pGBKT7中并转化酵母AH10 9,在色氨酸缺陷型培养基 (SD/-Trp)上筛选阳性菌落。提取阳性酵母菌的蛋白质 ,进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)和Western免疫印迹分析 ,显示HBeAg基因在酵母细胞中表达 ,表达产物在胞内存在 ,相对分子质量 (Mr)为 43 0 0

关键词：乙型肝炎病毒e抗原真核表达载体构建酵母表达酵母遗传学

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HBcAg生物学特性研究进展

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世界华人消化杂志 2004年第12期12卷 2833-2836页

作者：徐志强成军张鸿飞中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室感染三科北京市100039

HBcAg存在于Dane颗粒的核心,是HBV的结构蛋白即病毒核壳蛋白,具有重要的生物学特性和临床病理意义. HBcAg由HBV基因组的C开放读码区(ORFI)编码,具有高度免疫原性,对HBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要作用.血清HBcAg阳性可提供肝内HBV... 详细信息

HBcAg存在于Dane颗粒的核心,是HBV的结构蛋白即病毒核壳蛋白,具有重要的生物学特性和临床病理意义. HBcAg由HBV基因组的C开放读码区(ORFI)编码,具有高度免疫原性,对HBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要作用.血清HBcAg阳性可提供肝内HBV合成的信息,是病毒存在的直接标志.HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞,肝细胞溶解后HBcAg可直接释放入血,故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度.检测肝组织HBcAg 有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向,推测慢性乙型肝炎的预后.血清和肝组织HBcAg检测具有多种实用价值,值得推荐.

关键词： HBcAg 生物学特性研究进展免疫原性 HBcAg感染

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慢性丙型病毒性肝炎脂肪变的临床与病理学特点

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世界华人消化杂志 2002年第9期10卷 1009-1013页

作者：李莉成军李梵王建军张健吴勤韩萍陈国凤纪冬李克中国人民解放军第302医院感染四科传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:利用临床资料和病例资料的回顾性分析,阐明慢性丙型肝炎患者合并脂肪肝的比例和临床病理学特点,为了解慢性丙型病毒性肝炎的脂肪变病理特征,探索新型治疗技术和方法奠定基础.方法:对于经过肝脏活检的159例慢性丙型肝炎患者的临床... 详细信息

目的:利用临床资料和病例资料的回顾性分析,阐明慢性丙型肝炎患者合并脂肪肝的比例和临床病理学特点,为了解慢性丙型病毒性肝炎的脂肪变病理特征,探索新型治疗技术和方法奠定基础.方法:对于经过肝脏活检的159例慢性丙型肝炎患者的临床和病理学特点进行回顾性分析,阐明慢性丙型肝炎合并肝脏脂肪变的比例和临床、病理学特点.根据病理改变的类型和程度,分析慢性丙型肝炎患者合并脂肪肝的流行率、临床与病理学特点.计量资料应用SAS统计学软件进行分析.结果:159例慢性丙型肝炎患者中有131例患者合并肝脏脂肪变,占82.39%(131/159).对其中112例患者进行了病理改变的程度分析,轻度、中度和重度分别为29.46%(33/112)、60.71%(68/112)和9.82%(11/112);对其中131例患者进行病理类型分类,小泡型、大泡型和混合型分别为47.33%(62/131)、3.82%(5/131)和48.85%(64/131).对于慢性丙型肝炎患者合并脂肪肝进行多因素相关回归分析,结果表明慢性丙型肝炎合并脂肪肝的病理类型、病变程度与是否合并其他肝炎病毒感染、HCVRNA是否阳性、是否有输血史及年龄等因素无关,但与性别有关.男性与女性患者相比,合并肝脏脂肪变的慢性丙型肝炎女性患者以小泡型为主.而男性患者以混合型为主;女性患者以轻度和中度为主,没有重度患者,而男性患者则以中度和重度为主,总的来说,男性患者病理改变较女性患者为重.性别之间的差异有显著的统计学意义.结论:82.39%慢性丙型肝炎患者合并肝脏脂肪变,肝脏脂肪变的病理分型和病理改变程度与性别有关,女性患者脂肪肝病变较轻,男性较重.

关键词：临床特点慢性丙型病毒性肝炎脂肪变病理学

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丙型肝炎病毒核心蛋白与载脂蛋白A1结合的研究

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世界华人消化杂志 2002年第9期10卷 1018-1021页

作者：王琳李克成军陆荫英张健洪源刘妍王刚钟彦伟段惠娟芮莉莉中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性生肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:为了探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白在肝脂肪变性中起作用的分子机制,研究了核心蛋白是否与脂肪代谢相关蛋白存在相互作用.方法:应用酵母双杂交系统3,构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配... 详细信息

目的:为了探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白在肝脂肪变性中起作用的分子机制,研究了核心蛋白是否与脂肪代谢相关蛋白存在相互作用.方法:应用酵母双杂交系统3,构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选.筛选出30个克隆,对能在涂有x-α-gal的四缺营养缺陷培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上生长并变蓝的菌落,提取酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后测序,进行生物信息学分析.结果:发现了一个与载脂蛋白A1(apoA1)同源序列,同源性99%.结论:载脂蛋白A1在酵母双杂交中能与HCV核心蛋白相互作用,推测此蛋白参与了脂质代谢紊乱,部分解释了HCV感染后普遍引起肝脂肪变性的发病机制.

关键词：肝脂肪变性丙型肝炎丙型肝炎病毒核心蛋白载脂蛋白A1

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