检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2019年第1期35卷 1-4,10页

作者：胡永亮孙卫国张灵霞梁晓博中国人民解放军第309医院皮肤科北京100091 解放军第309医院结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的原核表达结核分枝杆菌Rv3425-Rv1168c融合蛋白并进行纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法评价重组蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,通过重叠PCR扩增得到Rv3425-Rv1168c全核酸序列克隆至表... 详细信息

目的原核表达结核分枝杆菌Rv3425-Rv1168c融合蛋白并进行纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法评价重组蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,通过重叠PCR扩增得到Rv3425-Rv1168c全核酸序列克隆至表达载体pET-24b中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,通过ELISA检测100份确诊结核病人、20例非结核呼吸疾病患者、100份健康人血清,评价融合蛋白进行临床血清学诊断的可行性。结果 Rv3425-Rv1168c融合蛋白在原核系统内获得高表达,纯化的融合蛋白经ELISA方法测定,在血清学实验中敏感性为54%,特异性为95%。结论 Rv3425-Rv1168c融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫原性,在结核病血清学诊断方面具有很大的应用价值。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3425蛋白 Rv1168c蛋白血清学诊断

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活动性肺结核患者PBMCs实时定量PCR内参基因的选择

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临床肺科杂志 2018年第11期23卷 1941-1945,1958页

作者：翟斐杨秉芬王若曹志红程小星中国人民解放军军事科学院军事医学研究院北京100091 解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因。方法用密度梯度离心方法分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌H37Rv裂解液、CFP-10和ESAT-6多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Tr... 详细信息

目的筛选适用于活动性肺结核患者PBMCs的内参基因。方法用密度梯度离心方法分离活动性肺结核患者PBMCs,然后使用结核分枝杆菌H37Rv裂解液、CFP-10和ESAT-6多肽库、共刺激因子CD28共孵育,或者不添加任何刺激物,培养过夜后收集细胞;使用Trizol提取mRNA,逆转录获得c DNA,然后用6个常用的内参基因ACTB、B2M、DDX5、GAPDH、YWHAZ和18sRNA的特异性引物进行实时定量PCR检测,结果用ge Norm、Norm Finder和Bestkeeper软件进行数据分析。结果 18sRNA基因丰度太高,在PBMCs表达不稳定,DDX5、YWHAZ和B2M的稳定最好,适合作为活动性肺结核患者PBMCs的内参基因,而ACTB和GAPDH稳定性略低。结论筛选出稳定的内参基因DDX5、YWHAZ和B2M,可用于活动性肺结核患者PBMCs基因表达分析。

关键词：内参基因实时定量PCR 结核外周血单个核细胞

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牛贝消核验方治疗结核病临床观察

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中医学报 2017年第4期32卷 528-530页

作者：李改梅凌彦博梁艳陈实兵刘光陵吴雪琼南京中医药大学江苏南京210029 中国人民解放军第三0九医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的:观察牛贝消核验方治疗结核病的临床疗效。方法:90例结核病患者均给予牛贝消核复方进行治疗,其中83例服用汤剂,7例服用散剂,3~4个月后复查胸片和痰菌。结果:治疗3~8个月后,汤剂组83例患者中治愈46例(55.42%),显效29例(34.94%),有效6... 详细信息

目的:观察牛贝消核验方治疗结核病的临床疗效。方法:90例结核病患者均给予牛贝消核复方进行治疗,其中83例服用汤剂,7例服用散剂,3~4个月后复查胸片和痰菌。结果:治疗3~8个月后,汤剂组83例患者中治愈46例(55.42%),显效29例(34.94%),有效6例(7.23%),无效2例(2.41%),有效率97.59%;散剂组7例患者中,治愈5例(71.43%),显效2例(28.57%),有效率100.00%。结论:牛贝消核复方汤剂和散剂治疗结核病疗效均显著。

关键词：结核病牛贝消核验方中医疗法

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结核分枝杆菌Rv1242蛋白抗原表位的预测

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郑州大学学报（医学版） 2016年第3期51卷 345-348页

作者：侯英白雪娟梁艳吴雪琼北京卫生职业学院医学技术系北京100053 中国人民解放军第309医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

目的:预测结核分枝杆菌Rv1242蛋白的抗原表位。方法:利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv1242氨基酸序列进行分析,采用包括二级结构、亲水性、抗原性、表面可能性、柔韧性等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果:Rv1242蛋... 详细信息

目的:预测结核分枝杆菌Rv1242蛋白的抗原表位。方法:利用DNAStar软件包中Protean软件对Rv1242氨基酸序列进行分析,采用包括二级结构、亲水性、抗原性、表面可能性、柔韧性等多参数预测其二级结构及T细胞和B细胞抗原表位。结果:Rv1242蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,有7个亲水性区域,含有B细胞抗原肽表位(可能在17-38、72-82、84-90、116-130、134-143位氨基酸残基或其附近),这些表位抗原性较好,都含有β转角和不规则卷曲结构,表面可能性和柔韧性都较大。该蛋白还含有T细胞抗原肽表位(可能在24-33、42-59、68-77、90-108位氨基酸残基或其附近)。结论:Rv1242蛋白可能是一个既有T细胞抗原表位、也有B细胞抗原表位的抗原,该研究为进一步研究该蛋白抗原表位及其应用奠定了基础。

关键词：抗原表位 Rv1242蛋白二级结构结核分枝杆菌

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牛贝消核提取物对耐多药结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的体外抑菌作用的研究

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时珍国医国药 2016年第4期27卷 834-835页

作者：刘晓梁艳李江英王兰张俊仙阳幼荣白雪娟王小美陈实兵刘军杨春玮罗华锋刘光陵吴雪琼河北北方学院河北张家口075000 中国人民解放军第309医院全军结核病研究所/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091 广东奇方药业有限公司广东广州510075

目的研究不同工艺制备的中药复方牛贝消核提取物的体外抑菌活性,为制备抗结核中成药制剂提供实验基础。方法制备分别含50,100,200 g·L-1牛贝消核水提取物、醇提取物的改良罗氏培养基,并分别制备含1,10μg/ml异烟肼(Isonicotinic ac... 详细信息

目的研究不同工艺制备的中药复方牛贝消核提取物的体外抑菌活性,为制备抗结核中成药制剂提供实验基础。方法制备分别含50,100,200 g·L-1牛贝消核水提取物、醇提取物的改良罗氏培养基,并分别制备含1,10μg/ml异烟肼(Isonicotinic acid hydrazide,INH)和50,250μg·ml-1利福平(Rifampicin,RFP)的改良罗氏培养基为对照,将3株耐多药结核分枝杆菌分离株、牛结核分枝杆菌和4株非结核分枝杆菌分别接种于含药的改良罗氏培养基中,置37℃培养4周,测定其最低抑菌浓度(MICs)。结果牛贝消核水提取物对这8株供试菌的MICs均为200 g·L-1;醇提取物对牛结核分枝杆菌和母牛分枝杆菌的MICs均为100 g·L-1,对3株耐多药结核分枝杆菌分离株、胞内、瘰疬、偶发分枝杆菌的MICs均为200 g·L-1。结论牛贝消核水提取物和醇提取物对敏感或耐药的结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌均有不同程度的抑制作用,醇提取物的抑菌活性比水提取物略强。

关键词：牛贝消核提取物最低抑菌浓度结核分枝杆菌非结核分枝杆菌耐药

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以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值

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中国医学科学院学报 2015年第1期37卷 44-49页

作者：袁凯梁德吴雪琼姚珍松晋大祥杨志东张顺聪丁金勇江晓兵陈建庭广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科广州510405 中国人民解放军第309医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京100091 南方医科大学南方医院脊柱骨科广州510515

目的评价以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点(ELISPOT)技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值。方法选取2012年5月至2013年12月广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科和南方医科大学南方医院脊柱骨科收治的疑似脊柱结核患者91例... 详细信息

目的评价以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点(ELISPOT)技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值。方法选取2012年5月至2013年12月广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科和南方医科大学南方医院脊柱骨科收治的疑似脊柱结核患者91例,根据临床和细菌性诊断结果分为脊柱结核组(n=52)和对照组(n=39)。采用ELISPOT试验检测脊柱结核组和对照组外周血单个核细胞,观察斑点形成细胞的数量。患者同时接受结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体检测、病灶病理学检查、抗酸杆菌涂片和病灶结核分枝杆菌培养,比较不同检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,分析不同检测结果的一致性。结果 52例脊柱结核患者中共47例接受病灶活检穿刺病理检查,其中41例病理证实为结核。ELISPOT试验在脊柱结核诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为82.7%、87.2%、89.6%和79.1%;PPD皮肤试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为61.5%、46.2%、60.4%和47.4%;血清抗结核抗体试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.8%、61.5%、65.9%和51.1%。在脊柱结核患者中,ELISPOT试验的阳性率显著高于PPD皮肤试验(82.7%比61.5%,χ2=5.786,P=0.016)和血清抗结核抗体试验(82.7%比55.8%,χ2=8.847,P=0.003),与病理学检查比较差异无统计学意义(82.7%比87.2%,χ2=0.396,P=0.529)。ELISPOT试验与病理学检查一致性较好(87.2%,κ=0.498,P=0.001)。结论以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的ELISPOT法应用于脊柱结核诊断有良好的敏感性和特异性,可作为脊柱结核感染辅助诊断的有效方法。

关键词：脊柱结核酶联免疫斑点试验 CFP10/ESAT6融合蛋白辅助诊断

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牛贝消核验方治疗结核病临床观察

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中医学报 2015年第7期30卷 955-956页

作者：陈丹陈实兵梁艳刘光陵吴雪琼中国人民解放军第309医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京100091

目的：观察牛贝消核验方治疗结核病的临床疗效。方法：44例结核病患者均给予牛贝消核验方。结果：治疗90～120 d后，治愈43例，好转1例，无效0例，治愈率为97．73％。结论：牛贝消核治疗结核病疗效较好。

关键词：牛贝消核验方结核病结核杆菌

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结核分枝杆菌Rv3425蛋白原核可溶性表达

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实用预防医学 2014年第12期21卷 1409-1411页

作者：孙卫国张灵霞熊志红杨秉芬程小星中国人民解放军第309医院结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京100091

目的在原核系统内获得结核分枝杆菌Rv3425蛋白可溶性表达并进行纯化,Western-blot技术初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法将Rv3425核酸编码序列克隆至融合表达载体p ET-Dsb C中,然后进行融合蛋白Dsb CRv3425表达并实现亲和纯化,用W... 详细信息

目的在原核系统内获得结核分枝杆菌Rv3425蛋白可溶性表达并进行纯化,Western-blot技术初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。方法将Rv3425核酸编码序列克隆至融合表达载体p ET-Dsb C中,然后进行融合蛋白Dsb CRv3425表达并实现亲和纯化,用Western-blot分析其抗原性和特异性。结果 Rv3425基因在大肠杆菌中获得可溶性表达,亲和纯化的Dsb C-Rv3425蛋白与结核病患者血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本呈阴性反应。结论Dsb C-Rv3425蛋白在大肠杆菌中以可溶性表达形式存在,具有较好的抗原特异性和免疫原性,对结核病诊断有潜在的应用价值。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3425蛋白表达

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结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗的构建及免疫原性研究

结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗的构建及免疫原性研究

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科学研究与结核病防治高峰论坛

作者：梁艳张晓燕白雪娟肖漓高钰张俊仙阳幼荣王兰史迎昌吴雪琼中国人民解放军第309医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室

目的构建结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗,并评价其免疫原性。方法以基因HRv基因组为模板,PCR扩增Rv2190c基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv2190c。50只BALB/c小鼠随... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗,并评价其免疫原性。方法以基因HRv基因组为模板,PCR扩增Rv2190c基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv2190c。50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水（A组）、pVAX1载体（B组）、微卡菌苗（C组）、Ag85A DNA疫苗（D组）和Rv2190c DNA疫苗（E组）,每2周肌肉注射1次,共3次,以研究Rv2190c DNA疫苗的免疫原性。最后1次免疫后3周杀死小鼠。用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;应用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的Th1细胞百分比和分泌IL-4的Th2细胞百分比以及Th1/Th2细胞比值。结果 PCR扩增获得长1177bp的Rv2190c基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv2190c经双酶切及DNA测序证明构建成功。E组[（126.03±221.46）pg/ml]IFN-γ水平高于A[（15.69±17.57）pg/ml]、B[（10.23±17.78）pg/ml]、C组[（8.25±23.87）pg/ml]（P<0.05）,略高于D[（77.22±153.92）pg/ml]组,但无统计学意义。E组Th1细胞百分比（3.01%±2.07%）显著高于A组（0.19%±0.12%）和B组（0.22%±0.09%）(P<0.01),但与C组（2.44%±1.17%）、D组（2.56%±0.86%）无统计学差异;Th1/Th2细胞比值E组（1.86±2.03）高于A（0.32±0.19）、B（0.48±0.22）和C组（1.13±0A1）,但无统计学意义,显著低于D组（3.47±3.11）(P<0.05)。结论成功构建了结核分枝杆菌DNA疫苗,并且证明此疫苗有较强的免疫原性,主要刺激Th1型细胞介导的免疫应答。

关键词：分枝杆菌,结核 DNA疫苗 Ag85A Rv2190c 免疫原性

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结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗的构建及免疫原性研究

结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗的构建及免疫原性研究

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2014科学研究与结核病防治高峰论坛

作者：梁艳吴雪琼张晓燕白雪娟肖漓高钰张俊仙阳幼荣王兰史迎昌中国人民解放军第309医院全军结核病研究所全军结核病防治重点实验室北京 100091

目的：构建结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗,并评价其免疫原性. 方法：以基因H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv2190c基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv2190c.50只BALB/... 详细信息

目的：构建结核分枝杆菌Rv2190c DNA疫苗,并评价其免疫原性. 方法：以基因H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv2190c基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv2190c.50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、微卡菌苗(C组)、Ag85A DNA疫苗(D组)和Rv2190c DNA疫苗(E组),每2周肌肉注射1次,共3次,以研究Rv2190c DNA疫苗的免疫原性.最后1次免疫后3周杀死小鼠.用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)水平;应用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-γ的Th1细胞百分比和分泌IL-4的Th2细胞百分比以及Th1/Th2细胞比值. 结果：PCR扩增获得长1177bp的Rv2190c基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv2190c经双酶切及DNA测序证明构建成功.E组[(126.03±221.46) pg/ml]IFN-γ水平高于A[(15.69±17.57) pg/ml]、B[(10.23±17.78) pg/ml]、C组[(8.25±23.87) pg/ml](P＜0.05),略高于D[(77.22±153.92) pg/ml]组,但无统计学意义.E组Th1细胞百分比(3.01％±2.07％)显著高于A组(0.19％±0.12％)和B组(0.22％±0.09％)(P＜0.01),但与C组(2.44％±1.17％)、D组(2.56％±0.86％)无统计学差异;Th1/Th2细胞比值E组(1.86±2.03)高于A(0.32±0.19)、B(0.48±0.22)和C组(1.13±0.41),但无统计学意义,显著低于D组(3.47±3.11)(P＜0.05). 结论：成功构建了结核分枝杆菌DNA疫苗,并且证明此疫苗有较强的免疫原性,主要刺激Th1型细胞介导的免疫应答.

关键词：结核分枝杆菌 Rv2190c基因脱氧核糖核酸疫苗免疫原性

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