目的:研究O-GlcNAcylation调节蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,Rack1)的稳定性在SHH型髓母细胞瘤(SHH type medulloblastoma,SHH-MB)形成中的功能作用。方法:选取中国人民解放军西部战区总医院临床肿瘤标本库中分子...
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目的:研究O-GlcNAcylation调节蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,Rack1)的稳定性在SHH型髓母细胞瘤(SHH type medulloblastoma,SHH-MB)形成中的功能作用。方法:选取中国人民解放军西部战区总医院临床肿瘤标本库中分子分型所确定的SHH-MB肿瘤及癌旁组织,分析样本中Rack1和O-GlcNAcylation(O-Glc NAc)的表达水平差异。对于人源髓母细胞瘤细胞系Daoy使用糖基化转移酶(OGT)抑制剂(OSMI-1)和去糖基化转移酶(OGA)抑制剂(TM-G)进行处理,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和免疫荧光染色检测肿瘤细胞增殖能力。采用O-Glc NAc酶标记系统、免疫共沉淀(Co-IP)和Western blot法判断Rack1有无发生O-Glc NAc,而后通过环己酰亚胺(CHX)实验和泛素化修饰实验证实O-GlcNAcylation对Rack1蛋白水平的影响。构建敲低Rack1的髓母细胞瘤模型,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、免疫荧光染色和划痕实验检测肿瘤细胞增殖能力。同时通过在免疫缺陷型小鼠进行异种原位肿瘤移植进行验证,在所得组织样本中(sh-NC和shRack1)使用Western blot检测下游SHH信号通路变化。结果:Rack1和O-GlcNAcylation在SHH-MB中表达水平显著增高,且Rack1表达水平和患者生存率呈负相关关系。对Daoy细胞系使用OSMI-1、TM-G处理后,发现O-Glc NAc能明显促进Daoy细胞增殖,而抑制细胞O-GlcNAc则抑制细胞增殖。分子实验证实Rack1蛋白O-GlcNAcylation可以调节其蛋白稳定性,进而促进肿瘤细胞增殖。在Daoy细胞系敲低Rack1表达,其细胞增殖能力明显低于对照组;在动物水平方面,相较于对照组,Rack1蛋白敲低的肿瘤组织增殖受到显著抑制。并且Rack1可通过调节SHH信号通路参与SHH-MB形成。结论:O-GlcNAcylation可通过调节Rack1蛋白的稳定性进而参与SHH-MB形成。
目的：探讨阳虚便秘患者肠道菌群结构组成、肠道微生物代谢通路及粪便短链脂肪酸的特征，为阳虚便秘的诊治提供依据。方法：选取20名阳虚便秘患者和20名健康志愿者为研究对象，运用16S rRNA测序技术分析肠道菌群结构组成，气相色谱-质谱联用法测定粪便短链脂肪酸水平，分析显著差异菌群与短链脂肪酸的相关性，最后运用宏基因测序技术分析肠道微生物的差异代谢通路。结果：与健康对照者相比，阳虚便秘患者肠道菌群α多样性指数显著升高，β多样性显著改变，在门水平，拟杆菌门(Bacteroidota)、疣微菌门(Verrucomicrobiota)、梭杆菌门(Fusobacteriota)等丰度显著增加（P＜0.05），厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)等丰度显著降低（P＜0.05）；在属水平，副拟杆菌属(Parabacteroides)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)及柯林斯氏菌属(Collinsella)等丰度显著增加(P＜0.05）；戴阿利斯特杆菌属(Dialister)、Fusicatenibacter、罗氏菌属(Roseburia)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、普拉梭菌属(Faecalibacterium)等丰度显著降低（P＜0.05）。阳虚便秘患者粪便短链脂肪酸乙酸、丙酸、己酸水平显著降低(P＜0.001)；丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸水平显著升高(P＜0.001)，相关性分析结果表明短链脂肪酸与差异菌群存在相关性，宏基因组测序的功能分析表明阳虚便秘患者肠道微生物碳水化合物代谢(Carbohydrate metabolism)、氨基酸代谢(Amino acid metabolism)、辅助因子和维生素代谢(Metabolism of cofactors and vitamins)等通路的相关基因丰度显著减少(P＜0.05)，基因翻译(Translation)、神经退行性疾病(Neurodegenerative disease)等通路的相关基因丰度显著增加(P＜0.05)。结论：阳虚便秘患者肠道菌群结构组成、微生物代谢通路及粪便短链脂肪酸水平发生显著性改变，这些改变可能是导致便秘的重要原因。
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