检索结果-内蒙古大学图书馆

动物营养学报 2025年第4期37卷 2716-2727页

作者：周一晨卫旭彪李震震张皓森张日俊中国农业大学饲料生物技术实验室动物营养学国家重点实验室北京100193

本试验旨在优化桑叶蛋白的提取工艺并探究桑叶蛋白的体外抗氧化活性。试验在利用超声破碎辅助碱溶酸沉法提取桑叶蛋白的基础上,先进行单因素试验,再结合单因素试验结果,采用Box-Behnken响应面法对料液比、浸提温度、超声时间和超声功率... 详细信息

本试验旨在优化桑叶蛋白的提取工艺并探究桑叶蛋白的体外抗氧化活性。试验在利用超声破碎辅助碱溶酸沉法提取桑叶蛋白的基础上,先进行单因素试验,再结合单因素试验结果,采用Box-Behnken响应面法对料液比、浸提温度、超声时间和超声功率4个因素进一步优化,以确定最佳的提取条件;并进一步通过化学抗氧化能力试验测定新工艺提取的桑叶蛋白的生物活性。结果表明:1)经优化后得到桑叶蛋白提取的最佳工艺为:料液比1∶24(g/mL)、浸提温度30℃、超声时间4.9 min、超声功率235 W、浸提液pH 11、浸提时间60 min,此条件下桑叶蛋白的提取率为34.12%。2)提取的桑叶蛋白在0.4 mg/mL的浓度下对2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟基自由基的体外清除率分别达到100.47%、74.92%和34.94%,还原力达到0.43。综上可知,本试验通过单因素试验和响应面试验优化了桑叶蛋白的提取工艺,并且在此工艺下提取的桑叶蛋白表现出较好的抗氧化活性。

关键词：桑叶蛋白碱溶酸沉法超声破碎工艺优化抗氧化活性

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姿态对家畜体尺测量的影响及优化策略

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中国畜牧杂志 2025年第1期61卷 114-122页

作者：叶梦言李建功曹克涛王勤中国农业大学动物科学技术学院畜禽生物育种全国重点实验室北京100193 中国农业大学动物科学技术学院畜禽营养与饲养国家重点实验室北京100193 新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所新疆乌鲁木齐830000

家畜体尺是育种和管理的重要基础数据,但传统测量方法存在效率低、应激大、误差高等问题;非接触式测量方法虽具潜力,但家畜姿态引起的测量变异度显著影响其精准性,是影响非接触式体尺测定准确度的重要因素之一。本文主要综述了不同类型... 详细信息

家畜体尺是育种和管理的重要基础数据,但传统测量方法存在效率低、应激大、误差高等问题;非接触式测量方法虽具潜力,但家畜姿态引起的测量变异度显著影响其精准性,是影响非接触式体尺测定准确度的重要因素之一。本文主要综述了不同类型非接触式测量方法在体尺测定方面的应用、误差来源,以及提高非标准姿态测定准确度的方法和实现路径以及应用场景,以期为家畜非接触式精准测量的发展提供参考。

关键词：非接触测量家畜姿态体尺

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基因编辑异种器官移植供体猪的研究进展

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中国猪业 2025年第2期20卷 5-14,4页

作者：冯沈泂倪征钰马昭孙尉峻张林林杜旭光中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 天津启瓴生物科技有限公司天津301799 天津农学院天津300384

异种器官移植作为解决全球器官短缺问题的潜在方案备受瞩目,其中基因编辑猪作为供体来源更是受到广泛关注。与传统器官移植面临诸多难题的情况相比,猪器官移植至人体时,主要会遭遇免疫排斥反应、凝血功能失调以及器官尺寸不匹配等问题。... 详细信息

异种器官移植作为解决全球器官短缺问题的潜在方案备受瞩目,其中基因编辑猪作为供体来源更是受到广泛关注。与传统器官移植面临诸多难题的情况相比,猪器官移植至人体时,主要会遭遇免疫排斥反应、凝血功能失调以及器官尺寸不匹配等问题。而CRISPR/Cas9等基因编辑技术,能够精准定位猪体内相关基因位点,实现对免疫原性抗原敲除(如敲除GGTA1基因)、补体激活抑制(如抑制β2M基因)、凝血功能调节(如调节vWF基因)以及器官生长控制(如控制GHR基因)等方面的定向改良,针对性地解决猪器官移植面临的问题。此外,引入人类转基因(如hCD47基因),还能进一步增强猪器官的免疫耐受性。目前,在全球范围内,已经成功开展了多例基因编辑猪肾、肝移植至人体的亚临床和临床研究,取得了显著的进展。不过,由于基因编辑工具的种类多样,其作用机制和安全性也存在差异,有一定的技术和安全门槛。因此,本文系统梳理了当前已进入亚临床和临床试验的异种器官移植供体猪所需编辑的关键基因以及具体的编辑手段,探讨与分析基因编辑工具的安全性和效率问题以及当前面临的机遇与挑战。在确保基因编辑安全有效的前提下,为优化相关基因编辑方法和推动后续研究提供一定的参考,以促进异种器官移植技术迈向新的台阶。

关键词：猪基因编辑异种器官移植 CRISPR/Cas9 动物模型

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PF40的亚细胞定位研究

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生物化学与生物物理进展 2005年第11期32卷 1020-1025页

作者：夏玉凤赵倩于静娟敖光明中国农业大学农业生物技术国家重点实验室

pf40基因是从谷子未成熟种子cDNA文库中获得的,与水稻、拟南芥的离子通道蛋白同源性很高,具有8个跨膜区.该基因转入烟草,可使烟草分枝增多,将其转入谷子,可使谷子分蘖增多.构建pf40与绿色荧光蛋白gfp的融合基因,转入烟草进行稳定表达,... 详细信息

pf40基因是从谷子未成熟种子cDNA文库中获得的,与水稻、拟南芥的离子通道蛋白同源性很高,具有8个跨膜区.该基因转入烟草,可使烟草分枝增多,将其转入谷子,可使谷子分蘖增多.构建pf40与绿色荧光蛋白gfp的融合基因,转入烟草进行稳定表达,通过荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察研究其亚细胞定位,发现荧光主要集中在内质网.将pf40不同缺失区段的4个片段与gfp构建融合基因,转入烟草进行稳定表达,发现PF40N端93个氨基酸残基就能够使得PF40定位在内质网,C端缺失没有影响蛋白质的亚细胞定位.

关键词： PF40/绿色荧光蛋白定位分枝内质网

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甜菜黑色焦枯病毒外壳蛋白与病毒致病性的关系

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生物化学与生物物理进展 2006年第2期33卷 127-134页

作者：曹云鹤原雪峰王晓星郭立华蔡祝南韩成贵李大伟于嘉林中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094

利用RT-PCR方法,构建获得了由T7RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产... 详细信息

利用RT-PCR方法,构建获得了由T7RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产物的侵染活性.构建了BBSVp24基因的原核表达载体pECP1,转化大肠杆菌BL21后的诱导表达产物能够与BBSV的抗血清呈现特异性反应,表明该基因编码产生BBSV的外壳蛋白(CP).以pUBF52为模板,分别构建了BBSVCP基因的移码突变体和不同程度的缺失突变体.侵染性检测表明,CP基因的移码突变对BBSV在苋色藜上所导致的枯斑症状及病毒RNA在寄主体内的积累基本没有影响,但CP基因的大部或完全缺失会使体内病毒RNA的积累水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突变体转录物接种苋色藜后仅能够产生很轻的枯斑症状.将绿色荧光蛋白(GFP)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因分别与BBSVCP基因的5′端融合,构建了表达载体pBGFP和pBGUS.摩擦接种苋色藜叶片后可观察到GFP或GUS基因的表达,为探索利用BBSV作为外源蛋白的表达载体奠定了基础.

关键词：甜菜黑色焦枯病毒侵染性cDNA克隆外壳蛋白致病性

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miR-133b可能通过调控foxO1的表达影响小鼠B细胞发育

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生物化学与生物物理进展 2011年第8期38卷 744-750页

作者：梁婧文王鹏陈黎胡益清孙亿中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193

microRNAs(miRNAs)是一类具有转录后调控作用的非编码RNA,在发育、细胞增殖、凋亡及肿瘤发生等多种生理和病理过程中发挥重要作用.为全面了解小鼠B细胞中miRNAs的表达模式,利用流式细胞仪(FACS)分选处于不同发育时期的B细胞,采用TaqMan... 详细信息

microRNAs(miRNAs)是一类具有转录后调控作用的非编码RNA,在发育、细胞增殖、凋亡及肿瘤发生等多种生理和病理过程中发挥重要作用.为全面了解小鼠B细胞中miRNAs的表达模式,利用流式细胞仪(FACS)分选处于不同发育时期的B细胞,采用TaqMan誖低密度芯片对其进行检测,筛选到pre-B阶段9个miRNAs表达量显著上调.将筛选出的miRNAs进行靶基因预测,并对预测靶基因进行功能聚类和通路分析,发现约4%的基因参与免疫系统过程,包括Bcl2、Kit等.选取foxO1与miR-19b、miR-142-3p、miR-106b、miR-182及miR-133b进行初步功能验证,双荧光素酶报告系统及Westernblot检测结果均显示,miR-133b可直接作用于foxO1 3′UTR从而降低foxO1的表达.结合人类和小鼠B细胞中foxO1的表达情况分析,其表达模式同miR-133b表达模式呈负相关,说明miR-133b可能参与了B细胞发育过程中foxO1的表达调控过程.

关键词： B细胞发育 microRNAs miR-133b foxO1

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转基因哺乳动物细胞自合成多不饱和脂肪酸

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生物化学与生物物理进展 2008年第11期35卷 1305-1311页

作者：孔平杜茁汤波孟庆勇李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193

亚油酸、亚麻酸是哺乳动物体内的必需脂肪酸,但哺乳动物由于缺乏△12和ω-3脂肪酸脱氢酶而自身不能合成.△12和ω-3脂肪酸脱氢酶存在于真菌、植物和一些低等动物中.为了实现哺乳动物细胞亚油酸的自身合成,克隆了线虫编码△12脂肪酸脱氢... 详细信息

亚油酸、亚麻酸是哺乳动物体内的必需脂肪酸,但哺乳动物由于缺乏△12和ω-3脂肪酸脱氢酶而自身不能合成.△12和ω-3脂肪酸脱氢酶存在于真菌、植物和一些低等动物中.为了实现哺乳动物细胞亚油酸的自身合成,克隆了线虫编码△12脂肪酸脱氢酶的FAT-2基因cDNA序列,通过优化密码子,构建真核表达载体,稳定转染细胞,经抗生素筛选获得稳定整合FAT-2基因的CHO细胞.PCR和RNA印迹(Northern blot)验证了基因的整合和表达.气相色谱分析细胞的脂肪酸含量表明,FAT-2基因的表达显著提高了转基因细胞中亚油酸的含量,亚油酸含量为阴性对照细胞的2.4倍.研究结果表明,低等动物△12脂肪酸脱氢酶可以重建哺乳动物多不饱和脂肪酸合成途径,并利用细胞中的油酸合成亚油酸.上述研究为进一步利用转基因技术促进农业动物合成多不饱和脂肪酸从而提高食品营养价值奠定基础.

关键词：亚油酸多不饱和脂肪酸必需脂肪酸 △12脂肪酸脱氢酶转基因

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一种适用于生产转染色体动物的微细胞制备方法(英文)

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生物化学与生物物理进展 2007年第7期34卷 770-776页

作者：何祖勇孙秀柱赵永辉李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094

微细胞介导的染色体转移技术(MMCT)是一项将外源染色体转入哺乳动物细胞的技术,具有广阔的应用前景.与体细胞核移植技术结合,MMCT可用于生产具有重要医学药用价值和优良农业生产性状的转染色体动物.制备高质量的微细胞是关系MMCT技术成... 详细信息

微细胞介导的染色体转移技术(MMCT)是一项将外源染色体转入哺乳动物细胞的技术,具有广阔的应用前景.与体细胞核移植技术结合,MMCT可用于生产具有重要医学药用价值和优良农业生产性状的转染色体动物.制备高质量的微细胞是关系MMCT技术成功的关键步骤之一.通过荧光染色和吉姆萨染色分析,结果表明,A9(neo12)细胞经0.2mg/L秋水仙素酰胺处理48h后,89%的细胞产生微核化,每个细胞平均形成10个微核.微核化的细胞在含有20mg/L细胞松弛B的Percoll密度梯度介质中,经39000g高速离心后,包含微细胞、完整细胞、细胞核和细胞碎片的混合液,依次通过8μm和5μm孔径的滤膜过滤后可获得纯化的微细胞溶液.通过光学显微镜和吉姆萨染色观察,可见微细胞为一群直径约为3～5μm的类细胞核的球形物质.微细胞PCR技术首次用于检测微细胞溶液的质量,检测结果显示,所制备的溶液中均匀分布着带有目的染色体的微细胞,适用于进一步作转染色体动物实验.

关键词： A9(neo12)细胞系人类染色体微细胞微细胞介导的染色体转移技术(MMCT)

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烟草坏死病毒A诱导的基因沉默及其条件优化

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生物化学与生物物理进展 2011年第10期38卷 919-928页

作者：高阳张永亮张晓峰韩成贵于嘉林李大伟中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193

以烟草坏死病毒A中国分离物(Tobacco necrosis virus A Chinese isolate,TNV-AC)侵染性cDNA克隆为基础,通过基因替换、基因插入策略构建获得多种重组TNV-AC,比较了外源基因片段插入位置、插入形式及接种植物培养温度对TNV-AC诱导的基因... 详细信息

以烟草坏死病毒A中国分离物(Tobacco necrosis virus A Chinese isolate,TNV-AC)侵染性cDNA克隆为基础,通过基因替换、基因插入策略构建获得多种重组TNV-AC,比较了外源基因片段插入位置、插入形式及接种植物培养温度对TNV-AC诱导的基因沉默的影响.外源基因片段替换CP基因19～828 nt的重组TNV-AC丧失了在本生烟中的系统移动能力,也不能有效诱导相应基因发生明显的沉默,说明替换策略不适合于TNV-AC.向CP基因终止密码子UAG附近插入外源基因片段后,TNV-AC仍可进行复制,但最适的插入位点位于UAG之后,且容纳外源片段的长度约为120 nt.当外源片段以反向重复的形式插入UAG之后,诱导基因沉默的效率较高.接种植物的培养温度也会显著影响基因沉默的效率以及插入片段的稳定性,低温(18℃)条件下诱导NbPDS基因沉默的效率明显高于高温(24℃)条件,且沉默表型可持续110天以上.除了本生烟PDS基因,TNV-AC沉默载体还可诱导本生烟sulfur基因Su和镁离子螯合酶H亚基基因ChlH发生沉默,以上结果说明,TNV-AC具有开发为本生烟基因功能鉴定的新VIGS载体的潜力.

关键词：烟草坏死病毒A 病毒诱导的基因沉默条件优化

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单卵RT-PCR方法的优化和对牛卵母细胞中发育相关基因的表达研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第7期31卷 659-665页

作者：李彦欣李世杰赵定胜赵春江杜卫华戴蕴平李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094

到目前为止 ,虽然许多动物如羊、牛、猪、鼠、兔、马、骡等均已克隆成功 ,但克隆技术普遍存在着克隆效率低、流产率高、畸胎、巨胎和死亡率高等问题 .为了较全面地探索其基因方面的原因 ,需要对大量的候选基因进行分析 .而利用传统的RT ... 详细信息

到目前为止 ,虽然许多动物如羊、牛、猪、鼠、兔、马、骡等均已克隆成功 ,但克隆技术普遍存在着克隆效率低、流产率高、畸胎、巨胎和死亡率高等问题 .为了较全面地探索其基因方面的原因 ,需要对大量的候选基因进行分析 .而利用传统的RT PCR方法从单个卵母细胞或胚胎中获得的RNA量不足以分析大量的基因 .为了解决这一问题 ,利用并优化了一套全新的扩增细胞中整体cDNA的方法 ,使微量材料进行大量的基因表达分析成为现实 .通过该方法研究了与发育相关的重要基因IL6、IFτ、CX4 3、PSMC3、oct4和DNMT1在牛卵母细胞中的表达 .IL6、IFτ和CX4 3的表达与前人报告的结果相同 ,而DNMT1和PSMC3在牛卵母细胞中表达情况此前未见报道 .

关键词：单卵RT-PCR方法发育相关基因表达

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