检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2007年第3期47卷 423-429页

作者：冉智光陈小云杨汉春郭鑫盖新娜王芳中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京10094

对已构建的覆盖猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ-4全长cDNA的6个重组质粒进行测序,并对部分点突变进行定点回复突变,将突变片段顺次连接,获得了全长cDNA克隆pWSK-DCBA。通过体外转录获得病毒基因组RNA,将RNA与脂质体混合后直接转染MARC... 详细信息

对已构建的覆盖猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ-4全长cDNA的6个重组质粒进行测序,并对部分点突变进行定点回复突变,将突变片段顺次连接,获得了全长cDNA克隆pWSK-DCBA。通过体外转录获得病毒基因组RNA,将RNA与脂质体混合后直接转染MARC-145细胞,获得拯救病毒(rV68)。rV68能在MARC-145细胞上稳定传代,并可引起PRRSV特征性的细胞病变(CPE)。增殖动态分析表明,rV68在MARC-145细胞上的生长有所迟滞,达到最高滴度的培养时间比亲本病毒延迟12h,但滴毒无显著差异(P>0.05)。结果表明,构建的BJ-4全长cDNApWSK-DCBA具有感染性,为研究中国PRRSV的分子致病与免疫机制、新型疫苗等奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性cDNA克隆拯救病毒

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鸭肝炎病毒基因组3′末端序列的克隆和分析

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病毒学报 2007年第4期23卷 312-319页

作者：丁春宇张大丙中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

用3′RACE和RT-PCR扩增并克隆鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV）Ⅰ型毒株C80和Ⅰ型变异株E63的3′末端序列。分析结果显示,C80株和E63株基因组3′末端均包含1 359 nt的3D、终止密码子TGA、长314nt的3′UTR,而poly（A）尾分别含18... 详细信息

用3′RACE和RT-PCR扩增并克隆鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV）Ⅰ型毒株C80和Ⅰ型变异株E63的3′末端序列。分析结果显示,C80株和E63株基因组3′末端均包含1 359 nt的3D、终止密码子TGA、长314nt的3′UTR,而poly（A）尾分别含18个A和19个A。由2株DHV 3D核苷酸序列所推导的3D蛋白均含453个氨基酸,均包含KDELR、DxxxxD、GxxCSGxxxTxxxNS、YGDD和FLKR等小RNA病毒RNA聚合酶的特征基序,该结果进一步证实Ⅰ型DHV属于小RNA病毒科的成员。两株DHV与小RNA病毒科9个已知属之间3D蛋白的氨基酸序列同源性为16%-37%,介于属间3D蛋白的氨基酸序列同源性范围（18%-60%）之内;此外,Ⅰ型DHV的3′UTR在小RNA病毒科是最长的。用3D蛋白进行进化分析的结果表明,Ⅰ型DHV可能属于小RNA病毒科的一个独立的病毒属。

关键词：鸭肝炎病毒 3D基因 3′UTR poly(A) 3′RACE

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稳定表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白P815细胞系的建立

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中国兽医学报 2008年第6期28卷 646-648,662页

作者：宋勤叶杨汉春郭鑫盖新娜中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室

应用脂质体介导的基因转染方法,将表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus,PCV2)衣壳蛋白的重组质粒pcDNA3.1-orf2转染P815细胞,筛选G418抗性单克隆细胞,并经PCR、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,随后对目的蛋白表达稳定性进行了检测。结果表... 详细信息

应用脂质体介导的基因转染方法,将表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus,PCV2)衣壳蛋白的重组质粒pcDNA3.1-orf2转染P815细胞,筛选G418抗性单克隆细胞,并经PCR、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,随后对目的蛋白表达稳定性进行了检测。结果表明PCV2orf2基因已经整合进P815细胞基因组DNA中,ORF2编码的衣壳蛋白在获得的阳性P815细胞中稳定表达,建立了稳定表达PCV2衣壳蛋白的P815细胞系。该细胞系的建立为PCV2新型疫苗的研究提供了必要的实验材料,同时也可为其他病毒疫苗的研究提供有价值的参考。

关键词： PCV2衣壳蛋白 P815细胞系表达 CTL杀伤活性

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CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应

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畜牧兽医学报 2006年第1期37卷 44-49页

作者：李杰杨汉春郭鑫陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

将3种不同的未甲基化CpG ODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后,经滴鼻和点眼免疫鸡,通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量,以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1βmRNA量,分析各CpG ODN对... 详细信息

将3种不同的未甲基化CpG ODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后,经滴鼻和点眼免疫鸡,通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量,以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1βmRNA量,分析各CpG ODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明,经2次免疫后,含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组,鸡血清平均HI抗体效价最高达8.2log2、淋巴细胞刺激指数达9.836、NO分泌量达35.833μmol/L,分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度(P<0.05)、4.4(P<0.01)、27.6μmol/L(P<0.01);含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显,与疫苗单独免疫组无差异;而CpG ODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响,作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响,CpG ODN3组IFN-γmRNA表达量稍高于CpG ODN1组,而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高(P<0.05)。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂。

关键词： CpG ODN 新城疫LaSota活疫苗免疫刺激活性鸡

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猪脑心肌炎病毒P1和P12A3C基因重组腺病毒的构建及其在小鼠体内的免疫应答

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中国兽医科学 2007年第9期37卷 760-766页

作者：陈振海杨汉春郭鑫盖新娜贾红陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

为研制脑心肌炎病毒（EMCV）新型活载体疫苗，首先将病毒核衣壳前体多肽P1与P12A3C串联基因分别插入穿梭质粒pDC316中，构建得到了重组穿梭质粒pDC316一P1和pDC316-P12A3C。将其分别与辅助质粒pBHGloxAEl、3Cre共转染293细胞，成功包装... 详细信息

为研制脑心肌炎病毒（EMCV）新型活载体疫苗，首先将病毒核衣壳前体多肽P1与P12A3C串联基因分别插入穿梭质粒pDC316中，构建得到了重组穿梭质粒pDC316一P1和pDC316-P12A3C。将其分别与辅助质粒pBHGloxAEl、3Cre共转染293细胞，成功包装出重组腺病毒Ad-P1和Ad-P12A3C。免疫过氧化物酶单层试验确证，重组腺病毒可表达目的蛋白。分1次和2次肌肉注射免疫小鼠，然后通过间接ELISA试验和中和试验评价其诱导的特异性体液免疫水平。结果，Ad-P1诱导的VPl特异总抗体IgG水平显著高于Ad-P12A3C，但不能检测到明显的中和抗体（〈1：8）；Ad-P12A3C能诱导产生良好的中和抗体（1：32～1：128），用1×10^8TCID50剂量EMCVBJC3株攻毒，Ad-P12A3C免疫组能获得100％的保护，而Ad-P1免疫组仅能获得部分保护。以上结果表明，Ad-P12A3C可作为良好的EMCV腺病毒活载体疫苗。

关键词：脑心肌炎病毒重组腺病毒免疫应答

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PRRSV BJ-4株ORF5基因的原核表达与重组蛋白的纯化

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畜牧兽医学报 2004年第1期35卷 64-69页

作者：谷红杨汉春郭鑫陈艳红中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在***21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,表达... 详细信息

为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在***21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,表达产物以包涵体的形式存在,表达量为20 8%。Western Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。利用融合肽进行亲和层析得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词： PRRSV BJ-4株 ORF5基因原核表达重组蛋白分离纯化猪繁殖与呼吸综合症

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猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异株的基因组特征

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畜牧兽医学报 2005年第6期36卷 578-584页

作者：高志强郭鑫杨汉春陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分离株HB-2(sh)/2002的全基因组序列进行了测定与分析.该毒株基因组全长为15 373 nt(不包括PolyA尾),与国内外美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于88.7%～95.1%之间.序列分析表明,该毒株是1个天然存在缺... 详细信息

对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分离株HB-2(sh)/2002的全基因组序列进行了测定与分析.该毒株基因组全长为15 373 nt(不包括PolyA尾),与国内外美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于88.7%～95.1%之间.序列分析表明,该毒株是1个天然存在缺失的变异毒株,其ORF1a的Nsp2存在编码12个氨基酸的连续36个核苷酸的缺失,ORF3存在编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失.这是国内外首次发现PRRSV存在缺失变异现象,研究结果补充和丰富了PRRSV毒株的基因组信息数据,为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组特征缺失变异株 PRRSV 全基因组序列序列相似性生物学特性变异毒株首次发现信息数据研究结果分离株国内外核苷酸氨基酸分析表编码全长遗传

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猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

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畜牧兽医学报 2007年第1期38卷 59-65页

作者：盖新娜杨汉春郭鑫吕艳丽王芳陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1... 详细信息

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。

关键词：猪脑心肌炎病毒分离鉴定

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PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86 mRNA转录的影响

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中国兽医科学 2007年第1期37卷 43-48页

作者：李焕荣郭鑫磨美兰周双海陈艳红查振林杨汉春中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

用猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康大白仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)共刺激分子CD80-CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明,在感染后第3 d和第7 d CD80与CD8... 详细信息

用猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康大白仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)共刺激分子CD80-CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明,在感染后第3 d和第7 d CD80与CD86 mRNA转录显著下调(P<0.05),感染后第14 d CD86 mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80 mRNA转录水平在第14 d和第28 d高于对照组,CD86 mRNA转录水平在第28 d高于对照组,两者在第42 d均高于对照组,但无显著差异。证实,PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制,PAM的抗原呈递能力受到影响。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型肺泡巨噬细胞 CD80-CD86 实时荧光定量PCR

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PRRS病毒感染对猪细胞因子IL-2、IL-4和IL-10mRNA转录的影响

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畜牧兽医学报 2003年第5期34卷 483-489页

作者：郑洁郭鑫杨汉春王彬陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

通过构建猪细胞因子IL 2、IL 4和IL 10的缺失cDNA竞争分子,利用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒感染过程中细胞因子IL 2、IL 4和IL 10的mRNA进行转录水平变化的定量检测,研究PRRS病毒感染对猪细胞因子IL 2、IL 4和IL 10m... 详细信息

通过构建猪细胞因子IL 2、IL 4和IL 10的缺失cDNA竞争分子,利用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒感染过程中细胞因子IL 2、IL 4和IL 10的mRNA进行转录水平变化的定量检测,研究PRRS病毒感染对猪细胞因子IL 2、IL 4和IL 10mRNA转录的影响。结果表明猪Th1型细胞因子IL 2的mRNA转录水平分别在PRRS病毒感染后1d、28d和56d出现3个mRNA转录高峰;而Th2型细胞因子IL 4的mRNA转录水平在病毒感染后56d内,一直处于低水平,而后才逐渐升高;IL 10的mRNA转录水平在病毒感染后6d内,一直处于低水平状态,第6d后才逐渐上升,至42d到达高峰,而后下降,恢复正常。结果显示PRRS病毒感染可导致Th2型细胞因子IL 4和IL 10基因转录的抑制。

关键词： PRRS病毒感染猪细胞因子 IL-2 IL-4 IL-10mRNA转录影响因素 PCR技术繁殖器官呼吸道

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