检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2022年第8期38卷 2928-2938页

作者：常贺高辉王永强高丽曹红李晓齐郑世军中国农业大学动物医学院农业动物流行病学重点实验室北京100193

本研究旨在克隆鸡foxp3(chfoxp3)基因全长编码区序列(coding sequence,CDS),并对其进行生物信息学及组织表达谱分析。以50日龄无特定病原鸡为样本,从脾脏组织中克隆chfoxp3基因全长CDS序列,利用在线工具和软件对chFoxp3进行生物信息学分... 详细信息

本研究旨在克隆鸡foxp3(chfoxp3)基因全长编码区序列(coding sequence,CDS),并对其进行生物信息学及组织表达谱分析。以50日龄无特定病原鸡为样本,从脾脏组织中克隆chfoxp3基因全长CDS序列,利用在线工具和软件对chFoxp3进行生物信息学分析,以实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测chfoxp3基因在鸡各组织中的表达分布情况。研究结果表明,chfoxp3基因包含882 bp的开放阅读框,编码293个氨基酸,chFoxp3分子质量为33.44 kDa,属于亲水蛋白;chFoxp3具有Fox转录因子家族典型的forkhead结构域,含有核定位信号;其二级结构由α-螺旋(29.35%)、延伸链(10.92%)、β-转角(5.12%)和无规则卷曲(54.61%)组成;chfoxp3在不同组织中表达有差异,在鸡心脏及胰腺中表达水平较高,显著高于脾脏、法氏囊以及胸腺等免疫器官(P<0.01),这一特点明显区别于哺乳动物;通过系统进化树分析发现,鸡Foxp3与其他野禽属于相同分支,但与哺乳动物相差较远。这些研究结果为进一步深入研究chFoxp3的免疫调节功能奠定了基础。

关键词：鸡 Foxp3 克隆表达分析

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致雏鹅痛风相关病原的分子检测

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中国兽医杂志 2023年第9期59卷 77-83页

作者：王家英金美玲储丽丽王笑言张大丙中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学重点实验室北京海淀100193

2021年3月,江西省某养鹅场免疫过雏鹅痛风和小鹅瘟卵黄抗体的雏鹅发生痛风,为分析其原因,本试验取9只7日龄病死鹅,剖检观察大体病变;采集所有病例的肝脏样品,分别用星状病毒通用RT-PCR和水禽细小病毒通用PCR进行扩增,对所有扩增产物进... 详细信息

2021年3月,江西省某养鹅场免疫过雏鹅痛风和小鹅瘟卵黄抗体的雏鹅发生痛风,为分析其原因,本试验取9只7日龄病死鹅,剖检观察大体病变;采集所有病例的肝脏样品,分别用星状病毒通用RT-PCR和水禽细小病毒通用PCR进行扩增,对所有扩增产物进行测序和序列分析。剖检结果显示,所有病例均有典型内脏和关节尿酸盐沉积。检测结果显示,所有肝脏样品均为鹅星状病毒(GoAstV)和鹅细小病毒(GPV)阳性。序列同源性分析与遗传演化分析结果显示,所测星状病毒和细小病毒分别属于GoAstV基因2型(GoAstV-2)和GPV 2.2分支。结果表明,该养鹅场的病例均存在GoAstV-2和2.2分支GPV混合感染。

关键词：雏鹅痛风鹅星状病毒鹅细小病毒

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非洲猪瘟病毒感染与致病机制的研究进展

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中国兽医杂志 2024年第7期60卷 77-88页

作者：高鹏叶苗苗张永宁周磊盖新娜郭鑫杨汉春韩军中国农业大学动物医学院兽医公共卫生安全全国重点实验室北京海淀100193 中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室北京海淀100193

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,对家猪致死率可达100%,严重威胁我国及世界养猪业可持续发展,目前尚无确实安全有效的预防用疫苗。本文总结了ASFV的流行历史与态势、生物学特性与复制、感染与致病... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,对家猪致死率可达100%,严重威胁我国及世界养猪业可持续发展,目前尚无确实安全有效的预防用疫苗。本文总结了ASFV的流行历史与态势、生物学特性与复制、感染与致病机制、与靶细胞的相互作用以及适应性免疫应答,并讨论了相关预防与控制措施,以期为我国ASFV研究和防控提供帮助。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) 流行病学病原生物学感染与致病机制预防与控制

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鸡传染性贫血病毒抑制干扰素的研究进展

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中国兽医杂志 2023年第3期59卷 84-90页

作者：郭雨欣李晓齐王永强郑世军高丽中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室北京海淀100193

鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)为目前已知的指环病毒科(Anelloviridae)环病毒属(Gyrovirus)的唯一成员。CIAV直径为19~26.5 nm,无囊膜,由12个五边喇叭状的衣壳体组成二十面体结构的衣壳。CIAV对高温和化学试... 详细信息

鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)为目前已知的指环病毒科(Anelloviridae)环病毒属(Gyrovirus)的唯一成员。CIAV直径为19~26.5 nm,无囊膜,由12个五边喇叭状的衣壳体组成二十面体结构的衣壳。CIAV对高温和化学试剂有较强抵抗力,100℃下处理15 min才能完全失活,对氯仿、乙醚和丙酮等试剂的处理也很不敏感~([1])。CIAV基因组是单链共价环状DNA,全长约2.3 kb,编码3个病毒蛋白;VP1为衣壳蛋白,是病毒颗粒中唯一的蛋白质~([3]);VP2具有多种功能,对病毒颗粒的形成至关重要~([4]);VP3在体内外可引起细胞凋亡~([2])。

关键词：鸡传染性贫血病毒病毒颗粒二十面体病毒蛋白病毒属衣壳蛋白喇叭状化学试剂

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弓形虫和新孢子虫交叉反应抗原MIC7A对小鼠的免疫保护效力分析

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畜牧兽医学报 2022年第7期53卷 2300-2306页

作者：陈慧娴陈雅婕王先梅王丽芳刘群刘晶中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室北京100193 中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室北京100193

弓形虫和新孢子虫是两种亲缘关系接近的顶复亚门原虫,二者之间存在一定程度的交叉免疫保护作用,这种作用可能是基于交叉反应抗原产生的。本研究旨在表达并鉴定弓形虫和新孢子虫的交叉反应抗原TgMIC17A,通过将其应用于小鼠的免疫保护试验... 详细信息

弓形虫和新孢子虫是两种亲缘关系接近的顶复亚门原虫,二者之间存在一定程度的交叉免疫保护作用,这种作用可能是基于交叉反应抗原产生的。本研究旨在表达并鉴定弓形虫和新孢子虫的交叉反应抗原TgMIC17A,通过将其应用于小鼠的免疫保护试验,评估该抗原对弓形虫和新孢子虫感染产生的交叉免疫保护作用。对TgMIC17A进行基因克隆和原核表达,通过免疫印迹试验鉴定其反应原性和交叉反应性。重组蛋白免疫小鼠后测定血清特异性IgG抗体水平,评价其免疫原性。二免后,分别用1×10^(3)个弓形虫Pru速殖子、1.5×10^(7)个新孢子虫Nc1速殖子攻虫,对小鼠的体重变化、存活率进行监测,并在攻虫30 d后检测各组存活小鼠的脑荷虫量,评价TgMIC17A重组蛋白免疫小鼠后对弓形虫和新孢子虫的交叉免疫保护效果。结果显示,rTgMIC17A可以被弓形虫和新孢子虫的阳性血清识别,相较于未免疫组小鼠,免疫组小鼠体内可产生高水平特异性IgG抗体(P<0.01),且感染弓形虫或新孢子虫的脑荷虫量均显著降低(P<0.01)。本研究克隆并表达了TgMIC17A,鉴定其为新孢子虫和弓形虫的交叉反应抗原。该抗原可以刺激小鼠产生较好的体液免疫反应,并对弓形虫和新孢子虫的感染产生一定的交叉免疫保护作用,可以为弓形虫和新孢子虫共感染的防治,以及筛选具有交叉免疫保护力的重组疫苗提供可借鉴的研究资料。

关键词： MIC17A 弓形虫新孢子虫交叉反应抗原交叉免疫保护

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动物园动物消化道寄生虫感染情况调查

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中国兽医杂志 2024年第3期60卷 48-53页

作者：安迪娅陈宜军裴艳群祝子伏冯子轩王丽芳刘群贾婷张昌盛刘晶中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室北京海淀100193 北京市畜牧总站北京朝阳100101 中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室北京海淀100193 北京动物园北京西城100044 国家自然博物馆北京东城100050

为了解动物园动物肠道寄生虫感染情况,本试验采集了来自贵阳和北京动物园33种动物,共150份粪便样品。采用饱和盐水漂浮法和离心沉淀法富集虫卵和卵囊进行显微镜检查;基于隐孢子虫、芽囊原虫、毕氏肠微孢子虫和十二指肠贾第虫的特异性基... 详细信息

为了解动物园动物肠道寄生虫感染情况,本试验采集了来自贵阳和北京动物园33种动物,共150份粪便样品。采用饱和盐水漂浮法和离心沉淀法富集虫卵和卵囊进行显微镜检查;基于隐孢子虫、芽囊原虫、毕氏肠微孢子虫和十二指肠贾第虫的特异性基因位点对人兽共患原虫进行PCR检测和序列比对分析。结果显示,动物园动物寄生虫总感染率为64.0%。显微镜检查出的寄生虫包括毛首线虫(20.0%)、细颈线虫(2.7%)、艾美耳球虫(14.7%)和其他线虫(25.3%)。PCR检测4种肠道原虫的感染率分别为:隐孢子虫1.3%、毕氏肠微孢子虫8.7%、十二指肠贾第虫12.0%和芽囊原虫32.0%。序列比对结果显示,存在2种隐孢子虫虫种(安氏隐孢子虫和泛在隐孢子虫);7种毕氏肠微孢子虫基因型(SC02、BEB6、Type IV、PigEBITS 7、Peru8、PtEb IX和D);2种十二指肠贾第虫基因型(B和E);8种芽囊原虫基因亚型(ST1、ST2、ST3、ST5、ST8、ST10、ST13和ST14)。结果表明,贵州和北京动物园动物肠道寄生虫感染非常普遍,并且存在多种人兽共患虫种和基因型。做好动物园寄生虫病的防控不仅是动物园的保护和管理目标,更具有重要的公共卫生意义。

关键词：动物园动物寄生虫显微镜检查分子生物学检测公共卫生

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鸡源CD40L基因克隆、蛋白表达及生物活性检测

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生物工程学报 2021年第8期37卷 2786-2793页

作者：马萌郑孟加李晓齐高丽曹红王永强郑世军中国农业大学动物医学院农业动物流行病学重点实验室北京100193

为获得鸡源CD40L(chCD40L)蛋白,以鸡脾细胞制备cDNA并以之为模板扩增chCD40L基因,构建pFastBac-chCD40L供体重组质粒,转化感受态细胞DH10Bac,通过筛选及鉴定获得Bacmid-chCD40L重组质粒,转入真核表达系统sf9昆虫细胞进行蛋白表达与纯化... 详细信息

为获得鸡源CD40L(chCD40L)蛋白,以鸡脾细胞制备cDNA并以之为模板扩增chCD40L基因,构建pFastBac-chCD40L供体重组质粒,转化感受态细胞DH10Bac,通过筛选及鉴定获得Bacmid-chCD40L重组质粒,转入真核表达系统sf9昆虫细胞进行蛋白表达与纯化,获得His-chCD40L蛋白。此外,构建pQM01-chCD40L质粒,转染HEK293T细胞进行蛋白表达与纯化,获得Strep-chCD40L蛋白。亲和层析纯化的chCD40L蛋白浓度为0.01 mg/mL。为检测chCD40L蛋白的生物活性,分离和培养3周龄SPF雏鸡的法氏囊组织原代细胞,将chCD40L加入细胞培养液刺激细胞增殖,通过Western blotting试验、间接免疫荧光试验、流式细胞术检测,发现该蛋白能够与法氏囊B淋巴细胞表面的CD40结合,说明chCD40L具有生物活性。成功获得chCD40L蛋白,为原代B淋巴细胞体外培养及IBDV野毒分离与诊断奠定了基础。

关键词：鸡 CD40L 法氏囊原代细胞培养真核表达生物活性检测杆状病毒表达系统

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一步法构建鸡传染性贫血病毒感染性克隆

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中国兽医杂志 2022年第8期58卷 32-37,42页

作者：陈俊成袁栩马子月李晓齐曹红王永强郑世军高丽中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室北京海淀100193

鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染鸡引起免疫抑制性疾病,严重危害养禽业。为了构建CIAV Cux-1株的感染性克隆,本试验通过PCR扩增CIAV全基因组序列,与pcDNA3.1载体同源重组,得到重组质粒pcDNA3.1-Cux-1。进一步通过对pcDNA3.1-Cux-1酶切、环... 详细信息

鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染鸡引起免疫抑制性疾病,严重危害养禽业。为了构建CIAV Cux-1株的感染性克隆,本试验通过PCR扩增CIAV全基因组序列,与pcDNA3.1载体同源重组,得到重组质粒pcDNA3.1-Cux-1。进一步通过对pcDNA3.1-Cux-1酶切、环化得到CIAV Cux-1环状DNA。将环状DNA电转染导入MSB1细胞并连续传代,用Western blot和间接免疫荧光进行重组病毒的鉴定。结果显示,本试验成功拯救出CIAV重组病毒rCux-1(recombinant Cux-1),重组病毒rCux-1携带有特定的遗传标记,并且与亲本株复制能力和蛋白表达水平基本一致。本试验成功构建的CIAV Cux-1株感染性克隆为进一步研究CIAV的致病机理和研制新型疫苗提供了试验基础。

关键词：鸡传染性贫血病毒同源重组感染性克隆病毒拯救

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利用二代测序技术对柔嫩艾美耳球虫T-DNA整合位点的分析及鉴定

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中国农业大学学报 2023年第8期28卷 183-190页

作者：郝振凯汤新明张媛媛谢福杰陈君敏索静霞索勋刘贤勇中国农业大学动物医学院/兽医公共卫生安全全国重点实验室/农业农村部动物流行病学重点实验室北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业大学生物学院北京100193

为建立一种适用于转基因球虫的快速且准确的分析T-DNA整合位点的方法,本研究利用二代测序技术对转基因柔嫩艾美耳球虫EtM2e虫株进行基因组重测序分析,基于嵌合体reads比对分析T-DNA的插入位点,通过T-DNA特有序列以及外源基因与球虫同源... 详细信息

为建立一种适用于转基因球虫的快速且准确的分析T-DNA整合位点的方法,本研究利用二代测序技术对转基因柔嫩艾美耳球虫EtM2e虫株进行基因组重测序分析,基于嵌合体reads比对分析T-DNA的插入位点,通过T-DNA特有序列以及外源基因与球虫同源序列的测序深度进而分析T-DNA拷贝数,最后利用PCR扩增验证分析位点。结果表明:(1)二代测序下机数据过滤后获得数据7.2 Gb,Q20为96.1%,Q30为89.2%,能够比对至柔嫩艾美耳球虫参考基因组的reads数为23992361×2,平均测序深度为80×,reads全基因覆盖结果表明整个染色体被覆盖的较为均匀,测序的随机性比较好,可以进行后续分析;(2)比对至T-DNA序列的reads数为3106和3036,平均测序深度为140×,嵌合体reads序列信息表明T-DNA只存在一个插入位点,位于HG994969.1:2704213~2705255;(3)T载体骨架特有序列卡那抗性基因的平均测序深度为67×,T-DNA特有序列EYFP基因的平均测序深度为85×,而T-DNA与球虫同源序列His4基因的5′调控区序列的平均测序深度为154×,Actin基因的3′调控区序列的平均测序深度为164×,同源序列的平均测序约为特有序列平均测序深度的2倍,这表明T-DNA为单拷贝,与发现一个插入位点的结果相符合;(4)经PCR验证分析成功鉴定了该整合位点。转基因艾美耳球虫EtM2e虫株T-DNA整合位点的鉴定为后续转基因球虫鉴定提供了技术平台,也为球虫活载体疫苗的研发提供了一个潜在的靶位点。

关键词： T-DNA整合位点柔嫩艾美耳球虫二代测序技术转基因

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鸡白细胞介素18单克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医杂志 2022年第9期58卷 29-33页

作者：郑孟加马萌王永强高丽曹红李淑芹李晓齐郑世军中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室北京海淀100193

为制备鸡白细胞介素18(chIL-18)单克隆抗体,本试验从被沙门菌感染过的鸡脾脏DNA提取物中扩增chIL-18基因,并将其插入至原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1中,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化重组蛋白;继而将纯化后的His-chIL-18蛋白免疫BALB/... 详细信息

为制备鸡白细胞介素18(chIL-18)单克隆抗体,本试验从被沙门菌感染过的鸡脾脏DNA提取物中扩增chIL-18基因,并将其插入至原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1中,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化重组蛋白;继而将纯化后的His-chIL-18蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,以GST-chIL-18作为筛选蛋白通过间接ELISA方法对阳性杂交瘤细胞进行筛选,经3次亚克隆后,最后获得2株能稳定分泌IL-18抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2A7和2G5。对抗体纯化后进行鉴定,结果显示,2株抗体亚型均为IgG1,亲和力解离常数(Kd)分别为4.4×10^(-12)和2.06×10^(-10),与chIL-1、chIL-10和chIFN-β无交叉反应,可分别识别chIL-18第58~113位和第114~169位氨基酸区域。本试验制备的单抗为深入研究chIL-18的生物学功能及先天性免疫应答提供了有价值的手段。

关键词：鸡IL-18 原核表达单克隆抗体

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