检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业大学学报 2009年第4期14卷 21-27页

作者：王伊琴秦贞奎包勇敢乔俊文赵德明中国农业大学动物医学院/国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100193 内蒙古二连浩特出入境检验检疫局内蒙古二连浩特011100 中国检验检疫科学研究院北京100123

构建了绵羊朊蛋白的原核表达载体,获得了高纯度的融合表达蛋白。并在热力学因素的作用下,研究了重组绵羊朊蛋白的构象转化。以基因型为ARQ/ARQ蒙古绵羊的血液DNA为模板,利用DNA重组技术,将绵羊朊蛋白正常成熟蛋白基因OvPrP插入表达载体p... 详细信息

构建了绵羊朊蛋白的原核表达载体,获得了高纯度的融合表达蛋白。并在热力学因素的作用下,研究了重组绵羊朊蛋白的构象转化。以基因型为ARQ/ARQ蒙古绵羊的血液DNA为模板,利用DNA重组技术,将绵羊朊蛋白正常成熟蛋白基因OvPrP插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL2l(DE3)中高效表达,获得的表达产物以包涵体形式存在,并对其进行纯化和复性。超滤浓缩后浓度约为0.5 mg/mL的OvPrP97-234,进行热力学处理,利用远紫外线圆二色谱(CD)分析热力学处理前、后蛋白的二级结构的变化,同时,对热力学处理前、后的蛋白进行了蛋白酶K抗性的检测,并对其高级结构进行了预测。结果表明:获得的表达产物经SDS-PAGE分析可见分子量为16kD的蛋白条带,Western-blotting的鉴定证实了所获得的蛋白是特异性的朊蛋白。经Jascow32软件分析,测得天然构象的OvPrP97-234的二级结构含量为:α螺旋为28.8%、β折叠为0%、转角和无规卷曲为71.1%,无蛋白酶K的抗性。经过热力学处理之后,OvPrP97-234的二级结构含量为:α螺旋为19.3%,β折叠为36.9%,转角和无规卷曲为43.8%,有一定的蛋白酶K抗性。绵羊重组朊蛋白的体外构象转化的分析为朊蛋白的体外构象转化机制和致病机理的研究提供科学依据。

关键词：绵羊重组朊蛋白原核表达构象转化圆二色谱热力学因素

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长期服用珍田胶囊对大鼠血液生化及血细胞成分的影响

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实验动物科学 2009年第2期26卷 10-16页

作者：王婷宋怀燕赵德明中国医学科学院实验动物研究所北京100021 中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

目的观察珍田胶囊长期服用对机体血细胞成分、肝肾功能的影响。方法珍田胶囊以1.315,2.63,5.26g(生药)/kg(分别相当于人临床剂量的13、26.1、52.2倍),对照组给予相同体积蒸馏水;连续给大鼠灌胃180d,逐日观察动物行为、外观及大小便。停... 详细信息

目的观察珍田胶囊长期服用对机体血细胞成分、肝肾功能的影响。方法珍田胶囊以1.315,2.63,5.26g(生药)/kg(分别相当于人临床剂量的13、26.1、52.2倍),对照组给予相同体积蒸馏水;连续给大鼠灌胃180d,逐日观察动物行为、外观及大小便。停药后继续观察4周,测量大鼠血常规和血生化指标。结果各给药组大鼠一般状况未见明显异常,各种血常规和血液生化指标均与对照组无显著差异。结论珍田胶囊长期服用对机体血液成分及肝肾功能无不良影响。

关键词：珍田胶囊长期毒性血液学指标血生化

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RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

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畜牧兽医学报 2008年第3期39卷 337-342页

作者：李玉荣周向梅尹晓敏杨建民乔俊文赵德明中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing ... 详细信息

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。

关键词： RNAi C6细胞朊蛋白表达超氧化物歧化酶

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PrP106-126对大脑皮质神经元和星形胶质细胞朊蛋白基因表达的影响

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中国兽医学报 2008年第1期28卷 58-62页

作者：宁章勇赵德明杨建民周向梅于博孔小明尹晓敏华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

采用实时荧光定量RT-PCR的方法,对PrP106-126处理的大脑皮质神经元和星形胶质细胞模型进行了朊蛋白基因表达相对定量的研究。大脑皮质神经元经PrP106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达量明显下降。PrP106-126处理的星形胶质... 详细信息

采用实时荧光定量RT-PCR的方法,对PrP106-126处理的大脑皮质神经元和星形胶质细胞模型进行了朊蛋白基因表达相对定量的研究。大脑皮质神经元经PrP106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达量明显下降。PrP106-126处理的星形胶质细胞与对照组和SCR处理组相比,朊蛋白基因的表达量显著升高。该试验结果为深入了解TSEs的分子致病机制和正常朊蛋白的功能提供了基础数据。

关键词： PrP106-126 大脑皮质神经细胞星形胶质细胞基因表达传染性海绵状脑病

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金黄地鼠Dpl基因克隆及其组织特异性表达的研究

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中国兽医杂志 2008年第11期44卷 3-6页

作者：李玉荣周向梅尹晓敏杨建民赵德明中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室北京海淀100193 河北农业大学动物科技学院河北保定071001

本文成功克隆了金黄地鼠Dpl(PrP-like protein doppel,Doppel)基因,并采用实时荧光定量PCR法对其组织特异性表达进行了研究。根据已发表家鼠Dpl基因序列设计引物,采用PCR直接扩增金黄地鼠(Hamster)的Dpl基因CDs区,序列测定和分析表明金... 详细信息

本文成功克隆了金黄地鼠Dpl(PrP-like protein doppel,Doppel)基因,并采用实时荧光定量PCR法对其组织特异性表达进行了研究。根据已发表家鼠Dpl基因序列设计引物,采用PCR直接扩增金黄地鼠(Hamster)的Dpl基因CDs区,序列测定和分析表明金黄地鼠的Dpl基因CDs区全长537 bp,编码178个氨基酸的前体蛋白,不存在基因多态性。经基因序列对比分析,金黄地鼠与其他10种属哺乳动物Dpl基因有较高同源性,均为70.8%以上,且与鼠科Dpl序列的同源性最高(86%)。实时定量PCR结果表明,在所检测组织中,Dpl mRNA在睾丸表达量最高,其次为脾脏、心脏、骨髓和脑,其在肝脏、肺脏、肾脏和肌肉中的表达低于检测水平;成年动物与未成年动物相比,在睾丸组织的表达量,成年鼠显著高于未成年鼠;在成年鼠脑组织检测不到Dpl mRNA的表达。本研究对金黄地鼠Dpl基因序列进行分析测定,并对其在不同组织的生理表达进行了定量,以期为其功能的进一步研究提供基础数据。

关键词：金黄地鼠 Dpl 克隆实时荧光定量PCR mRNA表达

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大鼠睾丸支持细胞体外培养及FSH对其增殖的影响

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河北农业大学学报 2008年第3期31卷 73-76页

作者：李玉荣白瑜尹晓敏周向梅韩利方赵德明国家动物传染海绵状脑病实验室中国农业大学动物医学院北京100094 河北农业大学动物科技学院河北保定071000

为探索睾丸支持细胞体外纯化培养的方法,并观察不同水平FSH对支持细胞增殖能力的影响,本研究采用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶序贯两步消化法和低渗处理法分离、纯化睾丸支持细胞,Fas-L免疫荧光法对纯化后的支持细胞进行鉴定。取培养第2代第2天... 详细信息

为探索睾丸支持细胞体外纯化培养的方法,并观察不同水平FSH对支持细胞增殖能力的影响,本研究采用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶序贯两步消化法和低渗处理法分离、纯化睾丸支持细胞,Fas-L免疫荧光法对纯化后的支持细胞进行鉴定。取培养第2代第2天已完全贴壁的支持细胞,在其培养液中添加不同浓度FSH,培养16 h后,MTT法检测FSH对支持细胞增殖能力的影响。结果表明,该方法培养的支持细胞纯度高,且FSH的添加可显著促进支持细胞的增殖(P<0.01),为支持细胞高效制备提供可行性。

关键词：大鼠睾丸支持细胞培养卵泡刺激素(FSH) 增殖

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牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E的原核表达、纯化及其圆二色谱分析

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畜牧兽医学报 2007年第1期38卷 84-88页

作者：徐广贤赵德明周向梅尹晓敏杨建民中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

为了阐明牛分枝杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理,本研究以牛分枝杆菌的DNA为模板,通过PCR的方法扩增克隆牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E(Mammalian cell-entry protein 4E,mce4 E)基因,将所扩增基因克隆于原核表达载... 详细信息

为了阐明牛分枝杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理,本研究以牛分枝杆菌的DNA为模板,通过PCR的方法扩增克隆牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E(Mammalian cell-entry protein 4E,mce4 E)基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分枝杆菌和人分枝杆菌mce4 E基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌BL21进行诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析和Western-blotting免疫印迹鉴定,结果证明目的蛋白获得高效表达,表达量占菌体总量的53.3%,分子量约为45 ku;利用Ni-NTA琼脂糖柱对表达蛋白进行纯化,纯化率大于95%;纯化的蛋白经过透析复性、圆二色谱(CD)测定,结果表明重组蛋白为典型的α螺旋型结构,经Jascow32软件分析计算,mce4E蛋白含有39.1%的α螺旋,60.9%的无规卷曲,无β-折叠和转角,为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。

关键词：牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白原核表达圆二色谱(CD)

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牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mce4A)的原核表达、纯化及其圆二色谱分析

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中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 381-384页

作者：徐广贤杨建民周向梅尹晓敏赵德明中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-... 详细信息

将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-NTA琼脂糖亲和层析获得Mce4A重组蛋白;圆二色谱(CD)测定结果表明,Mce4A重组蛋白α螺旋含量为31.1%,β-折叠含量为0%,无规卷曲含量为61.0%,转角含量为7.9%。为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。

关键词：牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白原核表达圆二色谱(CD)

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实时荧光定量PCR检测PrP基因在金黄地鼠脑组织的动态表达

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中国兽医杂志 2007年第9期43卷 3-6页

作者：宁章勇赵德明杨建民周向梅于博孔小明尹晓敏中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京海淀100094 华南农业大学兽医学院广东广州510642

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一,其脑组织内朊蛋白基因动态表达数据的测定对探讨该类疾病的发生、发展和分子致病机理具有重要意义。我们利用实时荧光定量RT-PCR技术,对不同年龄金黄地鼠大脑、小脑、丘脑和脑干... 详细信息

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一,其脑组织内朊蛋白基因动态表达数据的测定对探讨该类疾病的发生、发展和分子致病机理具有重要意义。我们利用实时荧光定量RT-PCR技术,对不同年龄金黄地鼠大脑、小脑、丘脑和脑干PrP基因的表达进行了定量。结果发现,脑的四个检测部位都呈现高的表达量,但是同一年龄段不同组织每纳克总RNA中朊蛋白基因的表达量和每毫克组织中朊蛋白基因的表达量有显著的差别,不同组织在不同年龄出现表达高峰。本研究的结果对于探讨朊蛋白的基本功能和脑组织在传染性海绵状脑病病理发生中的作用,提供了基础数据。

关键词：金黄地鼠脑朊蛋白基因表达

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北京地区规模化猪场中禽流感和猪流感流行病学调查报告

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中国兽医杂志 2007年第7期43卷 38-39页

作者：王金秀赵德明祝俊杰赵景义李秀敏中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室北京海淀100094 北京市畜牧兽医总站北京西城100029

为了解北京地区猪群(种猪、商品猪和小型猪)在春、夏、秋、冬四季中是否携带禽流感H5、H7、H9亚型和猪流感H1、H3、H9亚型病毒以及血清中是否具有禽流感病毒和猪流感病毒相应亚型的抗体,摸清猪群中流感病毒与相应血清抗体的本底情况,为... 详细信息

为了解北京地区猪群(种猪、商品猪和小型猪)在春、夏、秋、冬四季中是否携带禽流感H5、H7、H9亚型和猪流感H1、H3、H9亚型病毒以及血清中是否具有禽流感病毒和猪流感病毒相应亚型的抗体,摸清猪群中流感病毒与相应血清抗体的本底情况,为北京市防控高致病性禽流感提供试验依据,我们于2004年3月至2005年3月进行了北京地区猪群禽流感和猪流感的流行病学调查.报告如下.

关键词：猪流感病毒禽流感病毒流行病学调查北京地区规模化猪场调查报告高致病性禽流感 H9亚型

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