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中国畜牧兽医 2011年第2期38卷 187-190页

作者：姚蕴珊沈建忠吴聪明程林丽中国农业大学动物医学院药理与毒理研究组北京100193

本研究建立了猪肝组织中3-甲基喹喔啉-2羧酸(3-methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid,MQCA)的高效液相色谱检测方法。采用0.3 mol/L盐酸提取猪肝组织中药物,经MAX柱净化,以乙腈∶甲醇∶0.5%甲酸水(15∶50∶35,V/V/V)为流动相,C18色谱... 详细信息

本研究建立了猪肝组织中3-甲基喹喔啉-2羧酸(3-methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid,MQCA)的高效液相色谱检测方法。采用0.3 mol/L盐酸提取猪肝组织中药物,经MAX柱净化,以乙腈∶甲醇∶0.5%甲酸水(15∶50∶35,V/V/V)为流动相,C18色谱柱进行药物分离,320 nm波长下紫外检测,结果当药物在猪肝组织中添加水平为20～250μg/kg时,平均回收率为72.35%～85.00%,日内测定的相对标准偏差(RSD)(n=5)为5.56%～9.49%,日间RSD(n=3)为5.96%～9.63%。猪肝组织中MQCA的定量限为20μg/kg,检出限为6.65μg/kg,表明该方法灵敏度、准确度和精密度均符合兽药残留分析技术的要求,适用于猪肝组织中MQCA的检测。

关键词：高效液相色谱法猪肝组织 3-甲基喹喔啉-2-羧酸

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慢性氟中毒奶山羊的甲状腺、肾和脑组织的超微结构

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畜牧兽医学报 2003年第6期34卷 588-591页

作者：李术徐世文康世良中国农业大学动物医学院药理毒理教研组北京100094 东北农业大学动物医学院内科教研室哈尔滨150030

以奶山羊为实验动物,按体重灌服氟化钠溶液复制奶山羊慢性氟中毒模型,通过对甲状腺、大脑、肾脏超微结构的观察,证实了氟对机体软组织的损害,并为氟致软组织损害提供了病理组织学依据。从中可看出线粒体损害是氟引起的细胞损害过程中的... 详细信息

以奶山羊为实验动物,按体重灌服氟化钠溶液复制奶山羊慢性氟中毒模型,通过对甲状腺、大脑、肾脏超微结构的观察,证实了氟对机体软组织的损害,并为氟致软组织损害提供了病理组织学依据。从中可看出线粒体损害是氟引起的细胞损害过程中的一个共同现象。此外,能够合成蛋白质而且具有解毒作用的内质网也受到损害,进一步说明氟在体内的毒性作用是以膜系统损害为特征。

关键词：氟中毒奶山羊甲状腺肾脑软组织超微结构病理组织学线粒体细胞损害内质网毒性作用膜系统

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泻康宁对感染大肠杆菌雏鸡抗氧化功能的影响

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黑龙江畜牧兽医 2003年第3期 30-31页

作者：马广鹏李术东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业大学动物医学院药理毒理教研组北京100094

为揭示大肠杆菌感染对雏鸡抗氧化功能的变化影响及泻康宁的保护效应 ,采用人工感染方法 ,建立雏鸡大肠杆菌病损伤模型 ,测定血清和组织中GSH -Px、SOD、MDA的水平。结果感染组和泻康宁组与对照组相比较 ,GSH -Px、SOD的活性明显下降 ,MD... 详细信息

为揭示大肠杆菌感染对雏鸡抗氧化功能的变化影响及泻康宁的保护效应 ,采用人工感染方法 ,建立雏鸡大肠杆菌病损伤模型 ,测定血清和组织中GSH -Px、SOD、MDA的水平。结果感染组和泻康宁组与对照组相比较 ,GSH -Px、SOD的活性明显下降 ,MDA的含量明显升高 (P <0 .0 1或P〈0 .0 5 )。而且泻康宁组与感染组相比较 ,GSH -Px、SOD活性明显升高 ,MDA的含量明显下降 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。提示雏鸡感染大肠杆菌后抗氧化功能的改变可能是发病的因素之一 ,泻康宁对雏鸡大肠杆菌病具有保护作用。

关键词：泻康宁雏鸡大肠杆菌病抗氧化功能中药制剂

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氟病奶山羊血清细胞因子含量的变化

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畜牧与兽医 2003年第3期35卷 9-11页

作者：李术徐世文康世良中国农业大学动物医学院药理毒理教研组北京100094 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

以奶山羊为实验动物 ,按体重灌服氟化钠复制奶山羊氟病模型 ,通过对血清细胞因子的检测 ,进一步探讨氟病的发生机理。结果表明 :氟可引起白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 6 (IL 6)含量降低 ;肿瘤坏死因子 (TNF)含量升高。证明氟引起... 详细信息

以奶山羊为实验动物 ,按体重灌服氟化钠复制奶山羊氟病模型 ,通过对血清细胞因子的检测 ,进一步探讨氟病的发生机理。结果表明 :氟可引起白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 6 (IL 6)含量降低 ;肿瘤坏死因子 (TNF)含量升高。证明氟引起细胞因子含量的变化是氟致机体免疫抑制的机制之一。

关键词：奶山羊血清细胞因子含量变化氟病发生机理免疫抑制

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两种氧氟沙星注射剂在猪体内的代谢规律研究

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黑龙江畜牧兽医 2012年第8期 129-132页

作者：呼秀智肖希龙陈义强薛占永河北工程大学农学院河北邯郸056021 中国农业大学动物医学院兽医药理与毒理教研室北京100094

国内外关于氧氟沙星（ofloxacin，OFL）在鸡、兔、羊、狗等动物体内的药代动力学研究都已报道^[1-6]。在猪体内的药物动力学171仅见静脉给药报道，肌肉注射给药未见报道。本试验以10mg／kg的剂量（以OFL含量计算）给猪耳静脉注射OFL注... 详细信息

国内外关于氧氟沙星（ofloxacin，OFL）在鸡、兔、羊、狗等动物体内的药代动力学研究都已报道^[1-6]。在猪体内的药物动力学171仅见静脉给药报道，肌肉注射给药未见报道。本试验以10mg／kg的剂量（以OFL含量计算）给猪耳静脉注射OFL注射液，肌肉注射OFL注射液和OFL缓释注射液，研究OFL缓释注射液和OFL注射液在猪体内的药物动力学规律和生物利用度，为临床应用OFL注射液提供科学依据。

关键词：动物体内氧氟沙星代谢规律注射剂缓释注射液药物动力学猪肌肉注射

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氟对奶山羊体内自由基和脂质代谢的影响

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中国地方病学杂志 2003年第3期22卷 201-203页

作者：李术徐世文孙刚康世良中国农业大学动物医学院药理毒理教研组北京100094 东北农业大学动物医院内科教研室黑龙江哈尔滨150030

目的　研究氟对奶山羊自由基、脂质代谢的影响。方法　以奶山羊为实验动物 ,按体重灌服氟化钠复制奶山羊氟中毒模型 ,研究氟对奶山羊自由基、脂质代谢的影响。结果　氟离子是呼吸爆发的有效激活剂 ,可促进机体生成氧自由基和一氧化氮自... 详细信息

目的　研究氟对奶山羊自由基、脂质代谢的影响。方法　以奶山羊为实验动物 ,按体重灌服氟化钠复制奶山羊氟中毒模型 ,研究氟对奶山羊自由基、脂质代谢的影响。结果　氟离子是呼吸爆发的有效激活剂 ,可促进机体生成氧自由基和一氧化氮自由基 (NO) ,对机体造成一系列损伤。结论　氟可影响奶山羊自由基、脂质代谢 ,表现出氟中毒的各种症状 ,构成了氟损伤机体的病理学基础。

关键词：氟奶山羊自由基脂质代谢地方性氟中毒

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VDAC1在喹烯酮诱导HepG2细胞线粒体凋亡通路中的作用

VDAC1在喹烯酮诱导HepG2细胞线粒体凋亡通路中的作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：杨夏云周延代重山李道稳赵科娜汤树生肖希龙中国农业大学动物医学院兽医药理与毒理组

【目的】本实验室前期研究发现喹烯酮能引起线粒体结构改变,功能失调,造成线粒体膜电位下降,导致Cytc从线粒体内释放至胞浆,但其确切的分子机制尚不清楚。电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1是位于线粒体外膜上的主要蛋白,起着联接线粒体内... 详细信息

【目的】本实验室前期研究发现喹烯酮能引起线粒体结构改变,功能失调,造成线粒体膜电位下降,导致Cytc从线粒体内释放至胞浆,但其确切的分子机制尚不清楚。电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1是位于线粒体外膜上的主要蛋白,起着联接线粒体内外物质与信息交换的桥梁作用。因此,本实验旨在以人HepG2细胞为模型,探讨VDAC1在喹烯酮所致线粒体毒性中的作用。【方法】通过体外培养HepG2细胞,给予不同浓度的喹烯酮(2.5、5、7.5、10μg/mL)作用24 h后,Western Blot检测VDAC1单体和多聚体的变化情况。并进一步使用VDAC抑制剂DIDS(500mM)检测VDAC1在喹烯酮所致HepG2细胞毒性(MTT法)中的作用,流式细胞术检测线粒体膜电位、细胞内ROS生成水平的变化,WesternBlot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的变化。通过DIDS及高表达VDAC1,进一步检测喹烯酮对VDAC1多聚体形成的影响。【结果】与对照组相比,喹烯酮可诱导HepG2细胞线粒体外膜蛋白VDAC1单体和多聚体的表达量呈剂量依赖性增加,同时可导致细胞线粒体膜电位下降、ROS生成增多及线粒体凋亡通路相关蛋白Cytc释放至胞浆,caspase-9、caspase-3及PARP显著激活(p<0.05)。与喹烯酮模型组相比,DIDS可明显抑制喹烯酮所致VDAC1单体的表达和多聚体的形成及其引起的线粒体膜电位下降及ROS生成,并进一步抑制Cytc释放至胞浆及caspase-9、caspase-3、PARP的激活,可显著提高细胞存活率(p<0.05)。与此相对应的是,高表达VDAC1后给药组与喹烯酮模型组相比,前者VDAC1多聚体的生成显著高于后者(p<0.05),同时Cytc从线粒体释放到胞浆的量增加。【结论】喹烯酮能使HepG2细胞的线粒体外膜蛋白VDAC1形成多聚体通道,可能促进线粒体内物质Cytc、ROS释放至胞浆,导致细胞线粒体途径凋亡。

关键词：喹烯酮 VDAC1多聚体线粒体凋亡

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毒胡萝卜素诱导内质网应激介导的肝癌HepG2细胞自噬的实验研究

毒胡萝卜素诱导内质网应激介导的肝癌HepG2细胞自噬的实验研究

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中国毒理学会兽医毒理学与饲料毒理学学术讨论会暨兽医毒理专业委员会第4次全国代表大会会议

作者：王丛丛张燊张朝明赵东旭冯聪聪汤树生肖希龙中国农业大学动物医学院兽医药理与毒理组

【目的】自噬是一种与自体吞噬过程有关的新的细胞死亡形式,不同于凋亡和坏死。很多生物学家将自噬称为Ⅱ型程序性细胞死亡,并且发现自噬在细胞的生长、发育和疾病发生过程中起着重要作用。自噬在调控癌症细胞生存中扮演一把双刃剑的角... 详细信息

【目的】自噬是一种与自体吞噬过程有关的新的细胞死亡形式,不同于凋亡和坏死。很多生物学家将自噬称为Ⅱ型程序性细胞死亡,并且发现自噬在细胞的生长、发育和疾病发生过程中起着重要作用。自噬在调控癌症细胞生存中扮演一把双刃剑的角色,它不仅是癌症细胞的一种生存机制,同时在机体清除癌症细胞的过程中也发挥了重要的作用。现已证明营养饥饿、内质网应激等多种因素都可以引起细胞自噬。内质网应激能够调节机体完整的蛋白合成过程,它还可以通过诱导LC3Ⅱ和Beclin-1的表达而引起自噬小体的形成。毒胡萝卜素是一种不可逆性内质网钙ATP酶抑制剂,在多种细胞能够引起内质网应激介导的细胞自噬。因此,本实验旨在探讨毒胡萝卜素诱导的内质网应激对肝癌HepG2细胞自噬的影响及其作用机制。【方法】体外培养肝癌HepG2细胞,经不同浓度TG干预24小时和同一浓度TG作用不同的时间,MTT检测细胞存活率。在生长对数期用0.5μM的TG分别处理0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h和不同浓度TG(0.5μM、1μM、2μM、4μM、8μM)处理24小时诱导HepG2细胞,MDC自噬特异性染料进行荧光染色检测自噬泡,了解TG诱导细胞自噬的作用,同时应用免疫印迹法检测ATF6和IRE1的蛋白表达以确定内质网应激的发生。应用免疫印迹法检测Beclin-1,LC3-Ⅱ和p38 MAPK的蛋白表达情况。【结果】TG对HepG2细胞系的生存活性有抑制作用,并且随给药时间和给药浓度的增加,抑制作用越显著。经不同浓度TG作用24小时和同一浓度不同时间处理的HepG2癌细胞可见明显聚集的点状MDC阳性荧光颗粒聚集在细胞质相应的自噬发生区且MDC阳性细胞数的增加呈浓度和时间依赖性。免疫印迹法结果显示,TG诱导HepG2细胞内质网应激介导自噬的过程中出现了ATF6、IRE1、Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达,且蛋白水平在一定的条件下,随着处理时间和浓度的增加,表达量也增加。但p38 MAPK的蛋白表达量却随着处理时间和浓度的增加而减少。【结论】TG可以诱导内质网应激介导的肝癌HepG2细胞的自噬,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关。

关键词：毒胡萝卜素内质网应激自噬 HepG2细胞

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VDAC1多聚体参与Bak过表达诱导的细胞线粒体凋亡

VDAC1多聚体参与Bak过表达诱导的细胞线粒体凋亡

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中国毒理学会兽医毒理学委员会与中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会联合学术研讨会暨中国毒理学会兽医毒理学委员会第5次全国会员代表大会

作者：杨夏云汤树生李道稳于晓红王福云肖希龙中国农业大学动物医学院兽医药理与毒理组

【目的】喹烯酮具有良好的抗菌、止泻和促生长作用,在我国作为畜禽饲料添加剂被广泛使用。然而,其同类药物,卡巴氧和喹乙醇,由于具有潜在的毒性已被禁用。现有结果表明,喹烯酮分别促进VDAC1和Bak多聚体的形成来诱导线粒体凋亡。但VDAC1... 详细信息

【目的】喹烯酮具有良好的抗菌、止泻和促生长作用,在我国作为畜禽饲料添加剂被广泛使用。然而,其同类药物,卡巴氧和喹乙醇,由于具有潜在的毒性已被禁用。现有结果表明,喹烯酮分别促进VDAC1和Bak多聚体的形成来诱导线粒体凋亡。但VDAC1和Bak在调控线粒体凋亡中的相互作用关系尚不明确。本实验旨在阐明VDAC1和Bak在线粒体凋亡中的相互作用机制,为喹烯酮诱导线粒体凋亡的分子毒理机制提供理论依据。【方法】体外培养HEK293T细胞,过表达Bak后,通过流式细胞术检测凋亡发生率,同时,通过western blot方法检测caspase9,caspase3和PARP剪切体的表达情况。接着,我们通过蛋白交联和western blot方法检测过表达Bak后VDAC1单体和多聚体的形成情况。最后,我们检测VDAC1抑制剂DIDS对过表达Bak引起的线粒体凋亡以及对过表达Bak引起的VDAC1单体和多聚体形成情况的影响。【结果】流式细胞术检测结果表明,过表达Bak后诱导HEK293T细胞发生凋亡;Westem blot结果显示,过表达Bak后,与对照组相比,caspase9,caspase3和PARP的剪切体表达量升高。同时,过表达Bak引起VDAC1单体和多聚体表达量上升。当加入VDAC1抑制剂DIDS后,与单独过表达Bak组相比,DIDS降低过表达Bak后引起的细胞凋亡率上升,降低caspase9,caspase3和PARP剪切体的表达水平,同时抑制过表达Bak引起的VDAC1单体和多聚体的形成。【结论】Bak过表达诱导HEK293T细胞发生线粒体凋亡。VDAC1多聚体参与Bak过表达诱导的细胞线粒体凋亡。

关键词： VDAC1 Bak 线粒体凋亡

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牛奶中氟喹诺酮的单链抗体化学发光免疫检测技术

牛奶中氟喹诺酮的单链抗体化学发光免疫检测技术

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：陶晓奇温凯陈敏江海洋王战辉沈建忠中国农业大学动物医学院兽医药理与毒理组北京100193

目的：研究建立了基于单链抗体的牛奶中氟喹诺酮(FQs)残留的间接竞争化学发光免疫检测方法(CL-ciELISA).方法：对CL-ciELISA进行优化,包括包被条件,离子强度,反应条件等进行优化.同时采用乙酸乙酯提取牛奶中的FQs。结果：方法的检测限为... 详细信息

目的：研究建立了基于单链抗体的牛奶中氟喹诺酮(FQs)残留的间接竞争化学发光免疫检测方法(CL-ciELISA).方法：对CL-ciELISA进行优化,包括包被条件,离子强度,反应条件等进行优化.同时采用乙酸乙酯提取牛奶中的FQs。结果：方法的检测限为0.01mg L-1(诺氟沙星,NOR),检测范围为0.03～0.44mg L-1;空白牛奶中添加浓度为0.04、0.1和0.4mgL-1NOR时,回收率为75.3％～110.6％,批内变异系数为7.2％～9.6％,批间变异系数为10.1％～12.3％.结论：基于单链抗体建立的CL-ciELSIA方法的准确度和可靠性较好,可用于牛奶中痕量FQs残留的检测.

关键词：牛奶氟喹诺酮单链抗体化学发光免疫检测技术

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