检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2008年第10期28卷 1115-1117页

作者：司兴奎郭鑫杨汉春中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094 佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231

根据猪圆环病毒2型(PCV2)BF的序列设计引物,扩增472bp的ORF2部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建含PCV2-ORF2部分基因片段的重组质粒。利用XbaⅠ限制性内切酶消化后获得共用同1对引物但缺失196bp的竞争重组子。通过重组质粒与竞争... 详细信息

根据猪圆环病毒2型(PCV2)BF的序列设计引物,扩增472bp的ORF2部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建含PCV2-ORF2部分基因片段的重组质粒。利用XbaⅠ限制性内切酶消化后获得共用同1对引物但缺失196bp的竞争重组子。通过重组质粒与竞争重组子间的竞争定量PCR方法(qc-PCR),建立猪PCV2-ORF2的标准竞争曲线和直线回归方程,并对PCV2试验感染猪血清中PCV2核酸的动态变化进行了研究。

关键词：猪圆环病毒2型竞争定量PCR 病毒含量

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鸡传染性贫血病毒VP2基因在真核细胞中的表达以及对宿主细胞增殖的影响

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中国兽医杂志 2007年第6期43卷 3-5页

作者：黄超华杨汉春郑世军中国农业大学动物医学院农业部预防医学系重点开放实验室北京海淀100094

鸡传染性贫血是危害养禽业的重要疫病之一,其病原体是鸡传染性贫血病毒(CIAV)。该病原广泛存在于世界各地,是危害养禽业的主要病原。VP2是该病毒的重要非结构蛋白,其对宿主细胞的确切作用还不十分清楚。本文通过PCR从病毒DNA中扩增出VP... 详细信息

鸡传染性贫血是危害养禽业的重要疫病之一,其病原体是鸡传染性贫血病毒(CIAV)。该病原广泛存在于世界各地,是危害养禽业的主要病原。VP2是该病毒的重要非结构蛋白,其对宿主细胞的确切作用还不十分清楚。本文通过PCR从病毒DNA中扩增出VP2基因并将VP2基因亚克隆到真核表达载体pcDNA4.0。将重组质粒转染至BHK细胞,经Western-blotting证实,转染的真核细胞能表达VP2蛋白并具有良好的抗原性。pcDNA4.0-VP2转染293T或BHK细胞后,与对照组(空载体转染细胞以及未转染的细胞)相比,VP2超表达对这两种细胞的增殖没有影响。该结果表明鸡传染性贫血病毒的VP2基因不影响宿主细胞的增殖。

关键词：鸡传染性贫血病毒 VP2基因克隆真核表达

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猪瘟病毒E0基因在CHO细胞中的表达

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中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 483-485页

作者：陈振海范学政夏春王琴宋立王在时宁宜宝中国农业大学动物医学院北京100094 中国兽医药品监察所农业部兽药创新与生物安全评价重点开放实验室北京100081 中国农业大学动物医学院北京 100094

将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,... 详细信息

将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达。高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础。

关键词：猪瘟病毒 EO蛋白增强型水母绿色荧光蛋白 CHO细胞

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禽源沙门菌gyrA基因多态性的检测与分析

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中国兽医杂志 2008年第10期44卷 31-32页

作者：王建舫吕艳丽吴清民苏敬良王忠田陈艳红杨汉春中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京海淀100193 中国兽医药品监察所北京海淀100084

沙门菌是常见的人畜共患病原菌,不仅能导致鸡白痢、禽伤寒和禽类副伤寒等疾病,而且是人类伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎等疾病的病原菌[1].抗生素的应用,对预防和控制沙门菌病发挥了巨大的作用,但是随之产生了耐药性的问题.

关键词： gyrA基因基因多态性沙门菌检测禽源喹诺酮类药物副伤寒耐药性

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猪圆环病毒研究进展

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中国兽医杂志 2004年第3期40卷 33-35页

作者：王忠田杨汉春郭鑫中国兽医药品监察所北京海淀100081 中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京海淀100094

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒.PCV具有PCV1和PCV2两种基因型.PCV1无致病性,但广泛存在猪体内及猪源传代细胞系;PCV2具有致病性,可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic was... 详细信息

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒.PCV具有PCV1和PCV2两种基因型.PCV1无致病性,但广泛存在猪体内及猪源传代细胞系;PCV2具有致病性,可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS),它是一种新的传染病.1991年加拿大首次暴发该病,随后世界上许多国家和地区都有该病的报道,给养猪业造成严重的经济损失.我国是养猪大国,对该病及其病原有一个全面的了解,意义重大.

关键词：猪圆环病毒生物学特征分子生物学诊断治疗

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禽源沙门菌Ⅰ型整合子多态性的检测与分析

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中国兽医杂志 2008年第12期44卷 17-19页

作者：王建舫郭鑫吕艳丽任慧英高崧孙艳争杨汉春中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京海淀100193 青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

沙门菌是常见的人畜共患病原菌,不仅能导致鸡白痢、禽伤寒和禽类副伤寒等疾病,而且是人类伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎等疾病的病原菌[1-2].

关键词：沙门菌多态性整合子检测 Ⅰ型禽源耐药机理副伤寒

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猪圆环病毒2型感染后血清抗体及组织中病毒含量的动态变化

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中国兽医杂志 2009年第7期45卷 24-26页

作者：司兴奎郭鑫杨汉春中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京海淀100193 佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231

猪圆环病毒(PCV)为目前发现最小的动物病毒之一。病毒粒子平均大小为17nm,二十面体对称的无囊膜DNA病毒,其核酸为单股双义共价闭合环状DNA。按照PCV致病性的有无分为1型和2型,PCV1被认为不具备致病性;具有致病性的PCV2被认为同猪断奶后... 详细信息

猪圆环病毒(PCV)为目前发现最小的动物病毒之一。病毒粒子平均大小为17nm,二十面体对称的无囊膜DNA病毒,其核酸为单股双义共价闭合环状DNA。按照PCV致病性的有无分为1型和2型,PCV1被认为不具备致病性;具有致病性的PCV2被认为同猪断奶后多系统衰竭综合征(PM-WS)等疫病有关。自1997年,在美国养猪工作者协会年会上提出PMWS以来,该病已传遍世界各养猪国家和地区。我国学者对规模化猪场的流行病学调查结果表明PCV2的抗体或病毒核酸检出率均在40%以上,[第一段]

关键词：猪圆环病毒2型血清抗体动态变化病毒含量猪断奶后多系统衰竭综合征 DNA病毒组织感染

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大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究

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畜牧兽医学报 2010年第12期41卷 1550-1555页

作者：鞠辉明白立景牟玉莲杨述林刘宗平李奎扬州大学兽医学院扬州225009 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 中国农业大学动物医学院北京100193

本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段... 详细信息

本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段,通过MluI酶切位点连接到pcDNA-MxA载体中,构建重组载体pcDNA-appA-MxA(下称AMP),分别将pcDNA3.1(+)、pcDNA-MxA、pcDNA-appA2及AMP质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,取细胞通过实时荧光定量PCR测定细胞内appA2及MxA的表达,同时部分细胞通过Westernblot测定细胞内MxA蛋白表达量,采用改进的钼酸铵显色法测定细胞内植酸酶活性;酶切及测序结果表明成功构建了AMP载体;QRT-PCR结果表明,转AMP细胞组MxA表达水平是转pcDNA-MxA组的1.118倍,转AMP细胞组appA2表达水平是转pcDNA-appA2组的1.134倍,上述各组间差异显著(P<0.05)。灰度分析结果表明,AMP细胞组细胞内MxA表达量是转染pcDNA-MxA细胞组的1.07倍;植酸酶活性测定试验结果表明,转AMP、pcDNA-appA2细胞组及对照组细胞内植酸酶酶活和对照组平均酶活分别为0.294、0.235及0.082FTU·μL-1,2个试验组间差异不显著,试验组和对照组间差异极显著(P<0.01);试验结果表明本研究构建双基因表达载体中外源基因的表达效率比相应单基因表达载体表达效率高,本研究为以后多基因共表达及制备多基因转基因动物奠定了基础。

关键词：人抗黏液病毒基因A 植酸酶 appA2 真核表达载体多顺反子

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体内A型精原细胞介导转MxA基因小鼠的制备

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畜牧兽医学报 2010年第9期41卷 1102-1108页

作者：鞠辉明白立景王怡彭大新张伟胡艳欣刘宗平李奎扬州大学兽医学院扬州225009 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 中国农业大学动物医学院北京100193

本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gen... 详细信息

本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gene transfer,TGT)鼠在性成熟后的不同阶段(6、12及24周龄)与正常母鼠交配,检测后代外源基因整合及表达情况,选取表达MxA基因的小鼠进行H5N1亚型禽流感病毒攻毒试验,观察小鼠的健康状况并观察肺及气管的组织病变情况。结果表明,TGT鼠和正常母鼠交配后能稳定产生转基因后代小鼠,2只TGT鼠在6、12及24周龄交配后代整合率分别为11.11%(2/18)、11.76%(2/17)、11.54%(3/26)及13.64%(3/22)、13.33%(2/15)、11.76%(2/17)。2只TGT鼠后代外源基因平均整合率分别为11.47%及12.91%,之间差异不显著(P>0.05)。RT-PCR检测表明,MxA基因整合小鼠中有21.43%(3/22)测到MxA的表达;所制备的MxA表达鼠H5N1亚型禽流感病毒攻毒后全身症状、肺及气管病变程度明显比正常鼠轻。试验结果表明体内精原干细胞介导的转基因方法是一种可行的、具有很大应用前景的转基因方法,制备的转MxA基因小鼠对H5N1亚型禽流感病毒具有一定的抵抗力。

关键词： A型精原干细胞转基因 MxA

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2006～2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查

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中国动物传染病学报 2009年第1期17卷 67-72页

作者：程晶陈艳红荫硕焱盖新娜查振林郭鑫杨汉春中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室北京100193

为了监测现有的防疫控制体系下我国规模化猪场PRV野毒感染情况,本研究应用IDEXX(PRV gE-ELISA试剂盒对2006年9月～2008年9月送检的14个省(直辖市)89个规模化猪场的5312份样品血清进行PRV野毒抗体检测。结果显示,PRV野毒抗体阳性猪场有65... 详细信息

为了监测现有的防疫控制体系下我国规模化猪场PRV野毒感染情况,本研究应用IDEXX(PRV gE-ELISA试剂盒对2006年9月～2008年9月送检的14个省(直辖市)89个规模化猪场的5312份样品血清进行PRV野毒抗体检测。结果显示,PRV野毒抗体阳性猪场有65个,占检测猪场总数的73.03%;各猪场血清样品中伪狂犬野毒抗体平均阳性率为23.40%。对不同生长阶段的猪群检测结果分析表明,PRV野毒抗体阳性率随猪龄的增长而升高,且不同生长阶段猪群PRV野毒抗体阳性率差异极显著,而不同季度送检的血清PRV野毒抗体阳性率没有显著差异。本次调查表明,我国免疫猪伪狂犬病毒基因缺失疫苗的规模化猪场仍存在猪伪狂犬野毒感染。

关键词：猪伪狂犬病血清学调查 ELISA

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