检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2013年第9期46卷 1932-1938页

作者：付永瑶师福山王继宏杨利峰周向梅尹晓敏赵德明中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室

【目的】研究细胞型朊蛋白对小神经胶质细胞不同激活方式的影响。【方法】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激BV2细胞,RT-PCR方法检测PrPC的mRNA表达量。SiRNA干扰将PrPC沉默,用上述因子刺激细胞,用RT-PCR和Western-blot检测相关参数。【结... 详细信息

【目的】研究细胞型朊蛋白对小神经胶质细胞不同激活方式的影响。【方法】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激BV2细胞,RT-PCR方法检测PrPC的mRNA表达量。SiRNA干扰将PrPC沉默,用上述因子刺激细胞,用RT-PCR和Western-blot检测相关参数。【结果】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激小神经胶质细胞后可导致PrPC的mRNA表达量下降;PrPC沉默后的小神经胶质细胞对IFN-γ刺激的反应应答减弱;PrPC沉默可以显著地改变由IL-4诱导的神经胶质细胞的激活表型;但是对IL-10诱导的小神经胶质细胞激活却没有影响。【结论】PrPC既能影响小神经胶质细胞从静止状态到激活状态的转换,也在小神经胶质细胞的经典激活和替代激活途径中发挥调节作用。

关键词：小干扰RNA 朊蛋白小神经胶质细胞激活

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛结核分支杆菌MB1916c基因的克隆和原核表达

引用

中国农业大学学报 2006年第6期11卷 1-6页

作者：郝俊峰赵德明中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室北京100094

构建牛结核分支杆菌MB1916 c的原核表达载体,获得了高纯度的融和表达蛋白。以牛结核分支杆菌DNA为模板,利用PCR方法扩增出牛结核分支杆菌MB1916 c基因片段,将回收纯化后的产物克隆到pGEM-T载体,测序分析鉴定为阳性的质粒,经SacⅠ/KpnⅠ... 详细信息

构建牛结核分支杆菌MB1916 c的原核表达载体,获得了高纯度的融和表达蛋白。以牛结核分支杆菌DNA为模板,利用PCR方法扩增出牛结核分支杆菌MB1916 c基因片段,将回收纯化后的产物克隆到pGEM-T载体,测序分析鉴定为阳性的质粒,经SacⅠ/KpnⅠ双酶切后与同样条件下双酶切后的pET-30a(+)载体连接,再转化到***21(DE3)表达菌株中,经菌落PCR快速筛选克隆,以SacⅠ/KpnⅠ双酶切和测序分析鉴定。确定正确的阳性菌株IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果显示:以牛结核分支杆菌DNA为模板,PCR后得到了MB1916 c目的基因片段,经克隆、亚克隆、序列分析和SacⅠ/KpnⅠ双酶切鉴定,获得了牛结核分支杆菌MB1916 c原核表达菌株,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约26 ku蛋白表达条带,West-ern-blotting分析证实所获得的蛋白具有牛结核分支杆菌的抗原性。本实验构建了pET-30a(+)-MB1916 c原核表达载体,得到融合6个组氨酸残基的MB1916c蛋白纯度大于95%,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

关键词：牛结核分支杆菌促复苏因子c MB1916c基因原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛结核分枝杆菌Mce4E蛋白对牛肺泡巨噬细胞iNOs、TNF-α、IL-6和IL-12表达的影响

引用

中国农业大学学报 2007年第1期12卷 1-6页

作者：徐广贤赵德明周向梅尹晓敏杨建民中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室北京100094

探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P0.05)。Mce4蛋白能够促使肺泡巨噬细胞分泌炎性细胞因子,并对肺泡巨噬细胞有抑... 详细信息

探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P<0.05);用重组表达的Mce4E蛋白、人分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of ***,MtbPPD)、牛结核分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of ***,MbPPD)、卡介苗(Bacille Calmette Guerin,BCG)和刀豆蛋白A(con-canavalin A,ConA)分别刺激肺泡巨噬细胞48h后,real-time PCR方法检测显示,Mce4E蛋白能够促使牛肺泡巨噬细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达上调(P<0.05)、抑制肺泡巨噬细胞iNO的mRNA表达(P<0.05)而对IL-12表达没有影响(P>0.05)。Mce4蛋白能够促使肺泡巨噬细胞分泌炎性细胞因子,并对肺泡巨噬细胞有抑制作用,证实Mce4蛋白在分枝杆菌中具有重要的作用。

关键词：牛结核分枝杆菌 Mce4E蛋白牛肺泡巨噬细胞 real—time PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

犬猫牙源性肿瘤的回顾性病理学分析

引用

畜牧兽医学报 2023年第10期54卷 4372-4378页

作者：戴悦欣杨利峰赵德明周向梅中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100193

犬猫牙源性肿瘤的发病率逐渐增加。该类肿瘤的发生与牙齿发育密切相关,诊断有一定的难度。通过回顾性病理学方法对2007—2022年收集的犬猫牙源性肿瘤的发病情况进行统计及每类常见牙源性肿瘤的病理学表现进行分析,为牙源性肿瘤的病理学... 详细信息

犬猫牙源性肿瘤的发病率逐渐增加。该类肿瘤的发生与牙齿发育密切相关,诊断有一定的难度。通过回顾性病理学方法对2007—2022年收集的犬猫牙源性肿瘤的发病情况进行统计及每类常见牙源性肿瘤的病理学表现进行分析,为牙源性肿瘤的病理学诊断提供可靠依据,并对临床治疗及预后的判断提供有意义的指导。中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室收集来自全国多家宠物医院的犬猫口腔肿瘤组织样品或切片371例,对病例信息进行统计。对典型病例进行HE染色以观察其特征性病理学表现,辅助以CK14及vimentin免疫组织化学染色分别对牙源性上皮成分与牙源性外间质成分进行鉴别。结果显示:在371例犬猫口腔肿瘤组织样品或切片中,有117例为牙源性肿瘤,其中犬93例,猫24例。在犬中,外周牙源性纤维瘤的发病率最高,雄性发病率高于雌性,其他常见肿瘤包括犬棘细胞型成釉细胞瘤,牙龈增生,成釉细胞瘤,成釉细胞纤维瘤与纤维牙瘤以及混合型牙瘤。在猫中,牙龈增生最常见,没有性别倾向,其他常见肿瘤包括外周牙源性纤维瘤与成釉细胞瘤。牙源性肿瘤在犬猫中有较高发病率,该类肿瘤的精准诊断值得更多的关注。对牙源性肿瘤的诊断来说,确定牙源性上皮的存在至关重要,CK14可以作为牙源性上皮良好的标志物,为准确的组织病理学诊断提供辅助,并对临床治疗及预后的判断提供有意义的指导。

关键词：犬猫牙源性肿瘤病理学诊断

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

引用

中国农业大学学报 2009年第2期14卷 5-10页

作者：苏晓鸥乔俊文赵德明杨利峰周向梅尹晓敏杨建民中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室北京100193

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构... 详细信息

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应。本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白 ORF7基因 EUSA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用SYBR Green检测衣原体Real-Time PCR方法的建立

引用

畜牧兽医学报 2006年第1期37卷 84-90页

作者：杨建民郝永新赵德明何诚中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100094

利用SYBR Green建立了检测种特异性衣原体的Real-Time PCR方法。本方法应用衣原体种特异性的高度保守特异引物，能够扩增627bp特异片段；使用定量标准基因组DNA，本方法能准确检测最少250fg衣原体DNA。Real-TimePCR方法与免疫荧光方法... 详细信息

利用SYBR Green建立了检测种特异性衣原体的Real-Time PCR方法。本方法应用衣原体种特异性的高度保守特异引物，能够扩增627bp特异片段；使用定量标准基因组DNA，本方法能准确检测最少250fg衣原体DNA。Real-TimePCR方法与免疫荧光方法的检测结果表明：检测4种衣原体临床样本，Real-TimePCR敏感性均在96％～98%；特异性均为100％；这两种方法符合率达97％以上（n=60）；批内和批间重复性试验结果表明，本方法具有良好的准确性。本方法的建立对于快速、准确检测临床样本种特异性衣原体提供了一种切实有效的方法。

关键词： SYBR Green 衣原体 Real-Time PCR 检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

引用

畜牧兽医学报 2008年第3期39卷 337-342页

作者：李玉荣周向梅尹晓敏杨建民乔俊文赵德明中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing ... 详细信息

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。

关键词： RNAi C6细胞朊蛋白表达超氧化物歧化酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

梅花鹿朊蛋白基因(PRNP)的克隆及序列分析

引用

中国兽医学报 2006年第6期26卷 637-638,641页

作者：孟丽平赵德明杨建民徐广贤马李颖中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100094

根据GenBank中鹿朊蛋白基因序列设计特异性扩增引物,采用PCR方法从中国梅花鹿基因组中扩增得到梅花鹿的朊蛋白基因,采用PCR产物直接测序,并将其克隆到pGEM-TEasy载体中测序进行进一步确认,通过分析表明所克隆的梅花鹿朊蛋白基因的ORF基... 详细信息

根据GenBank中鹿朊蛋白基因序列设计特异性扩增引物,采用PCR方法从中国梅花鹿基因组中扩增得到梅花鹿的朊蛋白基因,采用PCR产物直接测序,并将其克隆到pGEM-TEasy载体中测序进行进一步确认,通过分析表明所克隆的梅花鹿朊蛋白基因的ORF基因片段包含771bp,编码256个氨基酸的前体蛋白,相对分子质量约为28200。与已报道的其他品种鹿朊蛋白基因序列进行对比分析,核苷酸及氨基酸序列的同源性均在98%以上。本试验为进一步研究中国梅花鹿朊蛋白的多态性提供了数据。

关键词：梅花鹿朊蛋白朊蛋白基因序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

引用

中国农业大学学报 2006年第6期11卷 19-22页

作者：李晶晶赵德明徐广贤周向梅尹晓敏中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室北京100094

为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进... 详细信息

为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。

关键词：牛分枝杆菌 MPB83基因克隆原核表达免疫印迹蛋白纯化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PrP106-126诱导的小鼠成神经瘤N2a细胞NF-κB激活及神经毒性研究

引用

畜牧兽医学报 2009年第4期40卷 544-547页

作者：白瑜周向梅尹晓敏杨建民赵德明中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室北京100193

PrP106-126诱导的神经毒性机制仍不清楚。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用WesternBlot方法首次发现PrP106-126导致核转录因子NF-κB的亚单位p65蛋白转移到细胞核内,激活了NF-κB细胞信号分子。转核抑制剂NF-κB SN50预处理细... 详细信息

PrP106-126诱导的神经毒性机制仍不清楚。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用WesternBlot方法首次发现PrP106-126导致核转录因子NF-κB的亚单位p65蛋白转移到细胞核内,激活了NF-κB细胞信号分子。转核抑制剂NF-κB SN50预处理细胞减弱了PrP106-126诱导的NF-κB激活程度;并且DNA Ladder凋亡检测及Annexin V-FITC和PI双染流式细胞凋亡检测发现,NF-κB SN50能够抑制p65蛋白转核,在一定程度上也抑制了PrP106-126对N2a细胞的神经毒性效果。结果表明NF-κB信号分子参与了PrP106-126的神经毒性,且NF-κB信号分子的激活对N2a细胞具有促凋亡作用。PrP106-126激活N2a细胞NF-κB信号分子以及NF-κB促凋亡功能的体外研究对于阐明朊病毒病致病机理具有重要意义。

关键词：朊病毒 PrP106-126 NF-κB 神经毒性小鼠成神经瘤细胞N2a

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：