检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2023年第2期43卷 223-228页

作者：李淑红刘平黄孙慧敏仇华吉李素中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 中国农业大学动物医学院北京100193

本实验室前期制备了1株分泌针对猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞株6E10,并验证其可特异性识别CSFV E2蛋白。由于杂交瘤细胞不稳定且不易储存,本研究将6E10抗体的轻、重链可变区基因和猪源抗体的恒定区基因融合并克隆至... 详细信息

本实验室前期制备了1株分泌针对猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞株6E10,并验证其可特异性识别CSFV E2蛋白。由于杂交瘤细胞不稳定且不易储存,本研究将6E10抗体的轻、重链可变区基因和猪源抗体的恒定区基因融合并克隆至慢病毒表达载体pFUGW,分别构建了携带Strep标签的重组猪源化抗体轻、重链基因的慢病毒质粒pFU-p6E10-LC-Strep和pFU-p6E10-HC-Strep,进一步制备了慢病毒Lenti-p6E10-LC-Strep和Lenti-p6E10-HC-Strep,将二者共转导至HEK293S悬浮细胞,成功表达并纯化了重组猪源单克隆抗体6E10(p6E10)。经ELISA试验及Western blot证实,p6E10抗体能特异性识别E2蛋白。中和试验结果显示,p6E10抗体可以中和CSFV石门株。结果表明,本研究成功获得了针对CSFV E2蛋白的重组猪源化单克隆抗体p6E10,为深入研究CSFV E2蛋白的结构和功能以及开发新型诊断制剂奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白猪源化单克隆抗体悬浮培养

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犬源牛犬细小病毒和犬圆环病毒二联PCR检测方法的建立及应用

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畜牧兽医学报 2022年第3期53卷 978-982页

作者：于永乐姚延珠韩先杰张传美秦志华杨瑞梅张洪亮刘维全单虎青岛农业大学动物医学院山东省预防兽医学重点实验室青岛266109 青岛农业大学植物医学学院青岛266109 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软... 详细信息

本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为170 bp(CBoV)和239 bp(CCV)。分别提取CBoV和CCV重组质粒作为模板,进行二联PCR扩增试验。结果表明,本研究成功建立了可同时检测CBoV和CCV的二联PCR检测方法。并对其重复性、特异性和灵敏度进行验证,二联PCR最低检测限度为3.0 pg总DNA,而对犬细小病毒2型、犬瘟热病毒和犬副流感病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的30份病料进行检测,其中,4份为CBoV阳性,3份为CCV阳性,未检测到混合感染。综上所述,本研究所建立的CBoV和CCV二联PCR诊断方法特异性高,敏感性好,可用于临床犬腹泻病的流行病学调查。

关键词：犬源牛犬细小病毒犬圆环病毒二联PCR

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干扰山羊KLF12促进皮下脂肪细胞分化

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中国农业科学 2022年第1期55卷 184-196页

作者：杜宇王永孟庆勇朱江江林亚秋西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室西南民族大学畜牧兽医学院中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室

【背景】脂肪组织分为皮肤下的皮下脂肪组织（subcutaneous adipose tissue,SAT）和腹部内器官周围的内脏脂肪组织（visceral adipose tissue,VAT）,皮下脂肪作为影响肉类美味与否的重要因素,探究皮下脂肪沉积分子调控机制对于育种改良... 详细信息

【背景】脂肪组织分为皮肤下的皮下脂肪组织（subcutaneous adipose tissue,SAT）和腹部内器官周围的内脏脂肪组织（visceral adipose tissue,VAT）,皮下脂肪作为影响肉类美味与否的重要因素,探究皮下脂肪沉积分子调控机制对于育种改良和畜牧业的发展至关重要。Krüppel-like factors 12 （KLF12）是一个进化保守的转录因子,可以在多种细胞类型中表达并控制着广泛的细胞过程。【目的】研究获得山羊KLF12的分子特征并进行生物信息学分析,同时明确KLF12在山羊组织和细胞中的表达模式以及干扰KLF12对山羊皮下脂肪细胞分化的调控作用,为进一步研究KLF12在脂肪沉积过程中的潜在作用提供理论依据。【方法】利用逆转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）方法克隆山羊KLF12完整编码序列（coding sequence,CDS）区,使用在线生物信息学分析软件对山羊KLF12核苷酸序列和氨基酸序列进行分析。利用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）技术检测KLF12在山羊心脏、肝脏、腹部脂肪、皮下脂肪、臂三头肌、背最长肌等14个组织中的表达水平,以及诱导分化不同时间段KLF12在皮下前体脂肪细胞中的表达水平。随后,试验通过化学合成山羊KLF12小干扰RNA（si-KLF12）,使用Lipofectamine RNAiMAX转染试剂将山羊si-KLF12序列转染到体外培养的山羊皮下前体脂肪细胞中。使用100μmol·L-1油酸导液诱导脂肪细胞分化。利用油红O以及Bodipy染色方法和qRT-PCR技术分别从形态学以及分子生物学的角度阐明干扰KLF12对皮下前体脂肪细胞脂滴积聚和脂肪分化标志基因mRNA表达水平的影响。【结果】试验成功获得包含开放阅读框（open reading frame,ORF）(1 209 bp)的山羊KLF12（1 315 bp,编码402个氨基酸）。亚细胞定位结果显示KLF12主要位于细胞核,此外,KLF12无跨膜结构域和信号肽,且在317—341、347—371及377—399氨基酸处存在3个典型的锌指结构域（ZnFC2H2）。组织表达谱结果显示KLF12在山羊心脏和脾脏的表达水平极显著高于其他组织（P<0.01）。此外,在山羊皮下前体脂肪细胞分化过程中KLF12表达水平在诱导分化60 h时达到峰值。于山羊皮下前体脂肪细胞中转染si-KLF12后利用油红O以及Bodipy染色法从形态学观察发现脂肪细胞脂滴聚积明显增加,同时qRT-PCR结果显示,脂肪分化标志基因脂蛋白脂肪酶（lipoprteinlipase,LPL）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）的表达水平显著升高（P<0.05）而前脂肪细胞生长因子（preadipocyte factor 1,Pref-1）的表达水平极显著降低（P<0.01）。结合形态学观察结果以及脂肪分化标志基因表达水平变化情况,推测KLF12在皮下脂肪细胞分化过程中起到负调控作用。【结论】通过对山羊KLF12的分子生物学特征、组织细胞间的表达规律以及对山羊皮下脂肪细胞分化过程的潜在调控作用的研究表明,KLF12是山羊皮下脂肪细胞分化过程中的负调控因子,并且这种作用可能是通过调控LPL、PPARγ和Pref-1实现的,为进一步探究KLF12在调控脂肪细胞分化过程中的分子机制奠定了基础。

关键词：山羊 KLF12 分子特征干扰皮下脂肪细胞

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过表达山羊APOC3基因促进肌内脂肪细胞分化

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华北农学报 2022年第3期37卷 223-230页

作者：冉黎吕锦诗张浩王永朱江江李艳艳孟庆勇林亚秋青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部四川省重点实验室四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

为了明确APOC3基因在山羊肌内脂肪细胞分化中的作用,采用RT-PCR技术克隆山羊APOC3基因序列,并通过在线软件进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测山羊APOC3基因在各组织和不同分化阶段的肌内脂肪细胞中的表达规律;在利... 详细信息

为了明确APOC3基因在山羊肌内脂肪细胞分化中的作用,采用RT-PCR技术克隆山羊APOC3基因序列,并通过在线软件进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测山羊APOC3基因在各组织和不同分化阶段的肌内脂肪细胞中的表达规律;在利用双酶切法构建山羊APOC3过表达载体的基础上,利用油红O染色确定山羊APOC3基因过表达对肌内脂肪细胞脂滴聚集的影响,同时利用qPCR方法检测成脂分化标志基因mRNA的相对表达水平,进而明确其可能发挥作用的途径。结果表明,获得山羊APOC3的ORF区长294 bp,编码97个氨基酸,功能结构域区在第23—88个氨基酸处。山羊APOC3在心脏、肝脏、脾脏等14个组织中均有表达,且在肝脏中的表达量最高;山羊APOC3在诱导分化48 h表达量最高,极显著高于分化前;过表达山羊APOC3后肌内脂肪细胞中脂滴积聚增多,成脂分化标志基因SREBP1和CEBPβ的相对表达水平极显著上调,PPARγ的相对表达水平显著上调,而Pref-1相对表达水平显著下调。结果表明,山羊APOC3可能通过上调SREBP1、CEBPβ、PPARγ及下调Pref-1来发挥作用促进肌内脂肪细胞的分化。

关键词：山羊 APOC3基因肌内脂肪细胞过表达细胞分化

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犬细小病毒、犬腺病毒Ⅰ型和犬腺病毒Ⅱ型三联PCR诊断方法的建立

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中国兽医学报 2021年第12期41卷 2340-2344页

作者：于永乐王吉贵苏俊杨双双刘莹李沛然李兆达刘维全青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒I型(canine adenovirus typeⅠ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Pr... 详细信息

旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒I型(canine adenovirus typeⅠ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ)。分别提取CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ细胞培养物的DNA,进行三联PCR扩增试验。结果表明,所建立的单项PCR及二联PCR扩增良好,其产物经测序比对与引物扩增序列完全一致。在此基础上,优化三联PCR扩增试验条件,成功建立了可同时检测CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的三联PCR诊断方法。并对其特异性和灵敏度进行检测,三联PCR最低检测限度为0.16 pg总DNA,而对犬副流感病毒和犬瘟热病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的20份病料进行检测,结果显示15份为CPV阳性,5份为CAV-Ⅰ阳性,1份为CAV-Ⅱ阳性。

关键词：犬细小病毒犬腺病毒Ⅰ型犬腺病毒Ⅱ型三联PCR

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山羊KLF6的分子克隆及其时空表达特征分析

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华北农学报 2021年第2期36卷 226-232页

作者：王江林王永孟庆勇朱江江林亚秋西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部、四川省重点实验室四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

旨在获得山羊Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)CDS序列,明确其组织及在皮下脂肪细胞分化过程中的表达模式。利用RT-PCR技术克隆山羊KLF6基因序列,利用生物学软件及在线网站对获得的KLF6基因进行序列分析。利用实时荧光定量PC... 详细信息

旨在获得山羊Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)CDS序列,明确其组织及在皮下脂肪细胞分化过程中的表达模式。利用RT-PCR技术克隆山羊KLF6基因序列,利用生物学软件及在线网站对获得的KLF6基因进行序列分析。利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)技术检测KLF6在山羊各组织中的表达丰度及成脂诱导分化不同阶段皮下脂肪细胞中的表达水平。结果显示,获得山羊KLF6基因全长序列1233 bp,其中包括CDS区957 bp,编码318个氨基酸残基,与牛和绵羊的亲缘关系最近。KLF6基因在山羊各个组织中都有广泛表达,且在脂肪组织中高表达,极显著高于其他组织(P<0.01)。KLF6在诱导分化60 h的山羊皮下脂肪细胞中的表达量极显著高于在前体脂肪细胞中的表达水平(P<0.01)。获得山羊KLF6基因序列并明确其分子特征,发现其在脂肪组织中存在高表达,且在分化后表达水平显著高于分化前的表达水平,为最终揭示KLF6调控山羊脂肪细胞分化提供重要数据。

关键词：山羊 KLF6 组织表达前体脂肪细胞细胞分化

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犬间充质干细胞在兽医临床的应用

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中国兽医杂志 2020年第1期56卷 84-87页

作者：胡瑭琦李秋艳钟友刚中国农业大学动物医学院北京海淀100193 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京海淀100193

间充质干细胞是一种具有自我更新能力且能分化为其他细胞类型的细胞,因其具有较大的治疗潜力,近年来在宠物疾病诊疗方面逐渐成为研究热点。本文概括了利用犬间充质干细胞治疗犬的几种疾病及其研究进展,包括骨关节炎、心脏病、糖尿病、... 详细信息

间充质干细胞是一种具有自我更新能力且能分化为其他细胞类型的细胞,因其具有较大的治疗潜力,近年来在宠物疾病诊疗方面逐渐成为研究热点。本文概括了利用犬间充质干细胞治疗犬的几种疾病及其研究进展,包括骨关节炎、心脏病、糖尿病、神经损伤等治愈率较低的疾病;同时对干细胞治疗的现状进行总结,为今后开展犬及其他宠物疾病干细胞治疗的研究、应用提供参考依据,促进宠物诊疗行业的发展。

关键词：宠物诊疗干细胞治疗间充质干细胞细胞类型兽医临床疾病诊疗宠物疾病神经损伤

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痤疮丙酸杆菌异构酶在小鼠细胞中异源表达及t10c12-共轭亚油酸的制备

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农业生物技术学报 2021年第12期29卷 2304-2311页

作者：王超王洋洋饶喻李美娟刘宗平李世丽苟克勉扬州大学兽医学院比较医学研究院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心中国农业大学农业生物技术国家重点实验室美国得克萨斯大学西南医学中心分子遗传学系

来源于痤疮丙酸杆菌异构酶(Propionibacterium acnes isomerase, PAI)能够将亚油酸转化成反式10,顺式12-共轭亚油酸(trans 10, cis 12-conjugated linoleic acid, t10c12-CLA),饲喂t10c12-CLA的动物会减少脂肪沉积和乳脂含量,能量的动态平衡受到影响。本研究用密码子优化的pai基因转染小鼠(Mus musculus) 3T3细胞,经高压气相色谱分析证实,PAI将底物亚油酸高效催化成t10c12-CLA,t10c12-CLA含量最高达到了细胞内多不饱和脂肪酸总量的7.09%;与转染pIRES2-AcGFP1的对照细胞株比较,转染pai基因并合成t10c12-CLA的细胞株出现亚油酸积累(12.46%vs 14.38%～15.54%)(P<0.05)和花生四烯酸减少(13.31%vs 9.03%～11.13%)(P<0.05),同时硬脂酸(14.07%vs 11.85%～12.54%)(P<0.05)和油酸(20.29%vs 14.89%～16.87%)(P<0.05)同步减少。qPCR结果显示,pai转染细胞中生成的t10c12-CLA可上调硬脂酰辅酶A去饱和酶1 (stearoyl-CoA desaturase 1, scd1)基因表达(P<0.05),可能是转基因细胞中硬脂酸含量下降的原因;但是,外源t10c12-CLA没有下调脂肪酸去饱和酶1 (fatty acid desaturase 1, fads1)和fads2基因表达。高压气相色谱检测结果显示,外源添加的t10c12-CLA阻滞了亚油酸向下游花生四烯酸的代谢(P<0.05),即t10c12-CLA可能竞争性结合FADS2/FADS1酶系,从而抑制亚油酸向花生四烯酸的正常代谢。本研究证实微生物的pai基因能够在哺乳动物细胞中正常表达并生产t10c12-CLA,可为研制pai转基因动物提供参考依据。

关键词：痤疮丙酸杆菌异构酶共轭亚油酸脂肪酸小鼠3T3细胞

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高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏转录组分析

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中国医药生物技术 2023年第5期18卷 385-392页

作者：王玉全孙烨陶思名陈菁青邱业峰谢实勇刘宁中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国药学微生物菌种保藏管理中心北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所编辑部北京100021 中国农业大学动物营养学国家重点实验室北京100293 军事医学研究院实验动物中心北京100071 北京市畜牧总站 100101

目的对长期高脂饮食饲喂构建的肥胖小鼠肝脏组织进行转录组分析,探讨肝脏功能对肥胖发生的作用机制。方法利用长期高脂饮食饲喂构建小鼠肥胖模型,通过形态观察,体重、体脂及血糖检测进行模型评价。建模成功后对小鼠脂肪组织和肝脏组织进... 详细信息

目的对长期高脂饮食饲喂构建的肥胖小鼠肝脏组织进行转录组分析,探讨肝脏功能对肥胖发生的作用机制。方法利用长期高脂饮食饲喂构建小鼠肥胖模型,通过形态观察,体重、体脂及血糖检测进行模型评价。建模成功后对小鼠脂肪组织和肝脏组织进行HE染色,观察组织病理改变,并通过转录组检测小鼠肝脏组织基因表达变化。结果高脂饮食饲喂小鼠8周后小鼠体重及血糖水平明显增加,脂肪组织脂质累积,脂肪细胞肥大,呈现肥胖表型。对肝脏组织进行转录组测序分析发现肥胖小鼠肝脏组织基因表达存在明显改变,基于P_adjust≤0.05和log2FC值筛选获得一些关键差异表达基因供后续深入研究。结论肝脏功能在肥胖及其相关疾病发生发展中发挥重要作用。

关键词：高脂饮食小鼠肥胖肝脏转录组学

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噬菌体裂解酶专家共识——齐鲁公共卫生云讲堂

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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1451-1457页

作者：顾敬敏杨航李锦铨严亚贤卢雪梅张炜胡永飞王冉童贻刚胡福泉危宏平刘玉庆韩文瑜吉林大学动物医学学院吉林长春130062 中国科学院武汉病毒研究所湖北武汉430071 华中农业大学食品科学技术学院湖北武汉430070 上海交通大学农业与生物学院上海200240 山东大学微生物技术国家重点实验室山东青岛250100 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业大学动物营养学国家重点实验室北京100083 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014 北京化工大学北京100029 陆军军医大学微生物学教研室重庆400038 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250100

随着抗生素持续、不合理应用乃至滥用,使得细菌对抗生素的耐药性日益严重。特别是抗多黏菌素mcr-1基因以及耐万古霉素"超级细菌"的发现,标志着"后抗生素时代"的来临。为了应对细菌的耐药性、抗生素残留所导致的机... 详细信息

随着抗生素持续、不合理应用乃至滥用,使得细菌对抗生素的耐药性日益严重。特别是抗多黏菌素mcr-1基因以及耐万古霉素"超级细菌"的发现,标志着"后抗生素时代"的来临。为了应对细菌的耐药性、抗生素残留所导致的机体免疫力下降以及环境污染等问题,我国正在全力推进"减抗、限抗、禁抗"战略的实施,这是破解抗生素长期应用引发系列问题的根本之策,是事关畜禽健康养殖、公共卫生安全和人类健康的一件大事。这一战略的实施也对"安全、有效、质量可控,无残留、无污染"的绿色新型替抗剂的研发提出新的需求,亟需在这些方面寻求新的突破口,其中噬菌体裂解酶是一个重要的突破方向。噬菌体裂解酶作为一类新型抗菌蛋白,在应对细菌耐药性方面具有独特优势,在减抗、降抗中具有公共卫生战略价值。为推动噬菌体裂解酶的研究与应用,现汇聚全国十多位从事噬菌体裂解酶研究的专家和相关企业,联合齐鲁公共卫生云讲堂、噬菌体国际研讨会和《中国兽医学报》,专题研讨国内外关于噬菌体裂解酶的基础研究成果和实际应用案例,对噬菌体裂解酶的发展趋势进行分析、研判,形成一系列共识。

关键词：噬菌体裂解酶专家共识齐鲁公共卫生云讲堂

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