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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：宁章勇赵德明于博孔小明华南农业大学兽医学院中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室华南农业大学兽医学院华南农业大学兽医学院

神经细胞是传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)的重要靶细胞,PrP106-126是研究TSEs致病机理的理想工具,对PrP106-126作用的培养神经细胞模型进行研究,有利于我们了解朊蛋白的功能和探讨TSEs的分子致病... 详细信息

神经细胞是传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)的重要靶细胞,PrP106-126是研究TSEs致病机理的理想工具,对PrP106-126作用的培养神经细胞模型进行研究,有利于我们了解朊蛋白的功能和探讨TSEs的分子致病机制。本研究利用PrP106-126构建了大脑皮质和小脑颗粒神经元作用模型,对神经细胞的存活和朊蛋白基因的表达进行了研究。结果表明:PrP106-126作用于培养神经细胞导致其存活率的显著下降;大脑皮质神经元经PrP 106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达的量明显下降,处理后的小脑颗粒神经元也有类似的情况出现,两者之间下降的幅度和时间不同。我们的研究结果为研究朊蛋白在TSEs发生中的作用和深入了解TSE的分子致病机制提供了基础数据。

关键词： PrP106-126 培养神经细胞朊蛋白基因表达

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处理重组牛朊蛋白对接种金黄地鼠脑组织朊蛋白的效应

处理重组牛朊蛋白对接种金黄地鼠脑组织朊蛋白的效应

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：宁章勇赵德明于博孔小明华南农业大学兽医学院中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室华南农业大学兽医学院华南农业大学兽医学院

将纯化的重组牛朊蛋白经理化因子处理后,脑内接种金黄地鼠。临床观察200天后, 对大脑、小脑和脑干,进行了蛋白酶抗性朊蛋白的Western Blot检测和朊蛋白基因表达的绝对定量。结果表明,处理的重组牛朊蛋白对金黄地鼠脑组织检测部位的基因... 详细信息

将纯化的重组牛朊蛋白经理化因子处理后,脑内接种金黄地鼠。临床观察200天后, 对大脑、小脑和脑干,进行了蛋白酶抗性朊蛋白的Western Blot检测和朊蛋白基因表达的绝对定量。结果表明,处理的重组牛朊蛋白对金黄地鼠脑组织检测部位的基因表达有一定的影响,但是与对照组相比差异不显著;接种后在检测时间内处理重组牛朊蛋白没有导致金黄地鼠脑内酶抗性朊蛋白的出现。研究结果为重组朊蛋白的生物学提供了基础数据。

关键词：牛朊蛋白金黄地鼠脑基因表达酶抗性朊蛋白

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实时荧光定量PCR检测PrP基因表达标准品质粒和标准曲线的构建

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中国兽医学报 2005年第6期25卷 611-613页

作者：宁章勇赵德明杨建民崔亚利孟丽平吴长德秦秀慧马李颖中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

对金黄地鼠PrP基因序列进行分析,选择其高度保守区域设计引物,对金黄地鼠各组织提取mRNA,经RTPCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明PrP基因... 详细信息

对金黄地鼠PrP基因序列进行分析,选择其高度保守区域设计引物,对金黄地鼠各组织提取mRNA,经RTPCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明PrP基因保守区段已经成功克隆.将107～102拷贝/反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,10次重复Ct值平均分别为17.50±0.5、21.38±0.2、25.29±0.7、29.12±0.7、31.34±0.4、33.89±0.1,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.998.对动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,该标准曲线的灵敏度为102拷贝/反应.荧光PCR PrP基因表达检测标准品质粒和标准曲线的建立,为检测PrP基因的组织特异性表达和动物传染性海绵状脑病发生的分子机理奠定了基础.

关键词：实时荧光定量PCR PrP基因标准曲线重组质粒动物传染性海绵状脑病

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小脑颗粒神经元细胞模型材料制备

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中国兽医学报 2005年第4期25卷 403-405页

作者：宁章勇赵德明杨建民崔亚利郝永新秦秀慧马李颖中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094

小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑病发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑病细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理,对小... 详细信息

小脑颗粒神经元是动物传染性海绵状脑病发生、发展过程中的主要反应性细胞之一,小脑颗粒神经元的体外分离、纯化和鉴定是建立动物传染性海绵状脑病细胞作用模型的关键步骤。根据大鼠小脑颗粒神经元的生存特性,按照抑制筛选的原理,对小脑颗粒神经元进行了体外分离和培养,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色,表明体外培养的小脑颗粒神经元细胞纯度较高,可以用于细胞作用模型的建立。

关键词：小脑颗粒神经元培养鉴定

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大鼠大脑皮质星形胶质细胞体外分离培养和纯化

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中国兽医杂志 2005年第9期41卷 9-11页

作者：宁章勇赵德明杨建民崔亚利周向梅秦秀慧中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室北京海淀100094

星形胶质细胞是胶质细胞中数量最多、分布最片的细胞亚群，担负着胶质细胞的大部分功能，参与多种神经系统疾病病理过程。研究星形胶质细胞的反应对阐明动物多种神经系统疾病的病理发生和分子作用机制具有重要意义。但星形胶质细胞在体... 详细信息

星形胶质细胞是胶质细胞中数量最多、分布最片的细胞亚群，担负着胶质细胞的大部分功能，参与多种神经系统疾病病理过程。研究星形胶质细胞的反应对阐明动物多种神经系统疾病的病理发生和分子作用机制具有重要意义。但星形胶质细胞在体内与其他细胞混杂在一起，研究其病理性反应，必须对其进行分离和纯化，

关键词：大鼠大脑星形胶质细胞体外分离培养分子作用机制原代培养免疫组织病理性反应体外分离

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金黄地鼠PrP基因组织特异性表达的研究

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中国病毒学 2005年第2期20卷 184-188页

作者：宁章勇赵德明杨建民崔亚利孟丽平吴长德秦秀慧马李颖中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室北京100094 中国农业大学动物医学院

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一,我们利用实时荧光定量RT PCR技术,构建标准重组质粒制备标准曲线,对中枢神经系统的4个不同部位及外周6个组织提取总RNA,反转录后进行PrP基因表达的定量。结果发现,脑的四个检测... 详细信息

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一,我们利用实时荧光定量RT PCR技术,构建标准重组质粒制备标准曲线,对中枢神经系统的4个不同部位及外周6个组织提取总RNA,反转录后进行PrP基因表达的定量。结果发现,脑的四个检测部位都呈现高的表达量;在外周器官中,淋巴结的表达量和全脑相当,脾脏、心脏、肝脏和肺脏呈现中等程度的表达,肾脏的表达量最低。本研究的结果对于探讨朊蛋白的基本功能和不同组织在传染性海绵状病理发生中的作用,提供了基础数据。

关键词：金黄地鼠朊蛋白基因表达

来源：评论

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猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及试剂盒的研究

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及试剂盒的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：杨利峰赵德明中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室

猪瘟(Hog Cholera,HC)广泛流行于全世界各养猪国家,严重危害着养猪业的发展,是世界各国严格检疫防制的重点传染病之一。国际兽疫局将该病列为A类16种法定传染病之一。在我国,多年来猪瘟也一直是危害养猪业最重要的烈性传染病,是猪病防... 详细信息

猪瘟(Hog Cholera,HC)广泛流行于全世界各养猪国家,严重危害着养猪业的发展,是世界各国严格检疫防制的重点传染病之一。国际兽疫局将该病列为A类16种法定传染病之一。在我国,多年来猪瘟也一直是危害养猪业最重要的烈性传染病,是猪病防制的主要对象。《中华人民共和国动物防疫法》将其列为一类传染病。鉴于猪瘟的严重经济危害性,世界各国在对本病的诊断和防制上都投入了巨大的人力、物力和财力,来实施猪瘟根除计划。猪瘟的流行不仅对全球的经济发展、商业贸易影响巨大,而且可能造成多种细菌的继发或并发感染,并由于猪只的转运和人员携带等因素致使细菌到处传播。随着社会的发展,猪瘟流行给全球的生态环境造成的负面影响日渐突出。

关键词：养猪业 RT-PCR ELISA 地高辛标记

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朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的动态表达定量

朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的动态表达定量

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：宁章勇赵德明中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室

1 引言和目的传染性海绵状脑病(TSE)的发生的关键环节是机体正常编码的细胞型朊蛋白发生构象的变化而形成致病性的朊蛋白。TSE的病理改变主要发生在中枢神经系统,在TSE的亚临床阶段,外周器官特别是淋巴器官在疾病的发生过程中起着重要... 详细信息

1 引言和目的传染性海绵状脑病(TSE)的发生的关键环节是机体正常编码的细胞型朊蛋白发生构象的变化而形成致病性的朊蛋白。TSE的病理改变主要发生在中枢神经系统,在TSE的亚临床阶段,外周器官特别是淋巴器官在疾病的发生过程中起着重要作用。参与TSE发生和发展的神经性和非神经组织自身朊病毒的表达,已经成为了研究的焦点;朊蛋白基因表达的定量是研究动物传染性海绵状脑病发生的出发点,对探索动物传染性海绵状脑病的发生机理具有重要的意义。同时,组织特异性的表达模式也是对PrPC在组织器官内的基本功能认识的有效途径。目前,国际上对基因表达的检测采用实时荧光定量PCR方法对未知样品进行基因表达的定量。金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想实验动物,对于实验性传播海绵状脑病的研究具有重要意义。

关键词：朊蛋白基因金黄地鼠淋巴器官外周组织动态表达

来源：评论

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牛结核杆菌侵袭蛋白4E(mce4E)原核表达载体的构建与表达

牛结核杆菌侵袭蛋白4E(mce4E)原核表达载体的构建与表达

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：徐广贤赵德明中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室

结核杆菌是世界范围内造成最多死亡和最大范围疾病的病原体。据世界卫生组织(WHO)的统计表明,结核病在世界范围内呈上升趋势。目前全世界有20亿的人口受结核杆菌感染,每年约300万人死于肺结核,它是导致成人死亡最主要的传染病,艾滋病与... 详细信息

结核杆菌是世界范围内造成最多死亡和最大范围疾病的病原体。据世界卫生组织(WHO)的统计表明,结核病在世界范围内呈上升趋势。目前全世界有20亿的人口受结核杆菌感染,每年约300万人死于肺结核,它是导致成人死亡最主要的传染病,艾滋病与结核病的联合协同作用和结核杆菌的多重耐药性增强,使结核病对全球健康问题构成严重的威胁。2005年我国的结核病防治调查结果显示:我国目前有近半数人口感染过结核菌,现有肺结核病人450万,还有新发肺结核病人145万人,其中约有15%的结核病人是饮用了患牛结核病的奶而发病。

关键词：侵袭蛋白结核杆菌牛结核病 mce4E 原核表达载体

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中国两种猪朊病毒基因序列的多态性分析

中国两种猪朊病毒基因序列的多态性分析

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：孟丽平赵德明中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室中国农业大学国家动物传染性海绵状脑病实验室

朊病毒病(又称为传染性海绵状脑病,简称TSE)是一类能够感染多种哺乳动物的致死性神经退行性疾病,主要包括牛海绵状脑病(俗称疯牛病),羊痒病,鹿慢性海绵状脑病以及人的克雅氏病等。上个世纪八十年代疯牛病首先在英国发生,随后在全世界范... 详细信息

朊病毒病(又称为传染性海绵状脑病,简称TSE)是一类能够感染多种哺乳动物的致死性神经退行性疾病,主要包括牛海绵状脑病(俗称疯牛病),羊痒病,鹿慢性海绵状脑病以及人的克雅氏病等。上个世纪八十年代疯牛病首先在英国发生,随后在全世界范围内的暴发对全世界的政治经济都造成了不小的影响,这也促使科学家们开始重视有关朊病毒病的研究。虽然目前为止自然界尚无猪患朊病毒病的报道,但已经有试验证明猪可以通过三种非肠道途径(脑内、静脉、和腹腔)感染疯牛病,这一研究成果引起了人们的广泛关注。近年来由于人类器官的短缺,使得许多病人在等待器官移植的过程中死去。由于生理和伦理学等多方面原因,灵长类动物对人的异种器官移植研究受到广泛的反对。猪因其生理学等方面与人类有许多相似之处,且在SPF环境条件下

关键词：基因序列序列多态性朊病毒病异种器官移植多态性分析

来源：评论

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