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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：周星旋卓涛李源源王颍张宗英张永亮王献兵李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学系农业生物技术国家重点实验室北京 100193

本研究将PLRV PO的野生型及突变体(159A/P60A，L76A/P77A，W140A，F220R，W87A)，序列插入pND108（由PVX改造的）载体中构建重组病毒，通过农杆菌(GV3101)浸润接种本生烟的方法探究影响重组病毒致病性的关键氨基酸位点。对接种叶(6dpi)... 详细信息

本研究将PLRV PO的野生型及突变体(159A/P60A，L76A/P77A，W140A，F220R，W87A)，序列插入pND108（由PVX改造的）载体中构建重组病毒，通过农杆菌(GV3101)浸润接种本生烟的方法探究影响重组病毒致病性的关键氨基酸位点。对接种叶(6dpi)和系统叶（lOdpi）表型的观察结果表明，表达POPL的PVX重组病毒的致病性增强。突变体L59A/P60A、W140A和F220R的PVX重组病毒在接种叶和系统叶均表现出明显的坏死表型并伴有卷叶，而突变体POPLL76A/P77A和POPLW87A的PVX重组病毒并未出现明显的坏死表型。对坏死叶片进行电导率的测定和台盼蓝染色，结果与叶片表型观察结果一致。RT-PCR检测结果显示POPL及其突变体的PVX重组病毒在系统侵染时外源插入片段稳定，并未丢失。对系统叶中PVX CP蛋白的Western blotting检测和ELISA检测结果可知，PVX重组病毒致病性的增强并不是重组病毒复制积累量增加的结果，而应是插入的PO基因表达产生的影响。由突变体L76A/P77A和W87A的PVX重组病毒的致病性未显著增强判断，这两处氨基酸位点应是影响重组病毒致病性的关键位点。

关键词：植物病害马铃薯卷叶病毒 PO蛋白致病性

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芸薹黄化病毒PO末端氨基酸序列对于其生物学功能的影响分析

芸薹黄化病毒PO末端氨基酸序列对于其生物学功能的影响分析

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：孙倩向海英李源源王颖张宗英张永亮王献兵李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学系与农业生物技术国家重点实验室北京 100193

芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)是我们实验室发现的一种新的侵染十字花科作物的病毒,寄主范围比较广泛,在我国大陆广泛分布,能够引起叶片黄化和卷曲的症状.BrYV属于黄症病毒科(Luteovidea)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus).... 详细信息

芸薹黄化病毒(brassica yellows virus,BrYV)是我们实验室发现的一种新的侵染十字花科作物的病毒,寄主范围比较广泛,在我国大陆广泛分布,能够引起叶片黄化和卷曲的症状.BrYV属于黄症病毒科(Luteovidea)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus).基因组序列分析发现BrYV存在三种基因型(BrYV-A、BrYV-B和BrYV-C),主要差异在于5'端ORF序列.由于该属病毒编码的P0蛋白氨基酸序列同源性很低,导致P0的抑制子活性差异也较大,为此我们对BrYVP0功能进行了初步研究.

关键词：芸薹黄化病毒 P0 基因沉默抑制坏死截短突变体

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芸薹黄化病毒(BrYV)与PEMV-2协生互作的初步研究

芸薹黄化病毒(BrYV)与PEMV-2协生互作的初步研究

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：周翠姬张晓艳董书维王颖张宗英张永亮王献兵李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学系/农业生物技术国家重点实验室北京 100193

本文就芸薹黄化病毒与PEMV-2协生互作进行了研究，通过农杆菌浸润接种的方法使BrYV与PEMV-2共同侵染本生烟，18℃下接种两局后BrYV与PEMV-2在本生烟上能产生协生症状，表现为新生叶先发病，叶片向下卷曲，在叶片上产生大片褪绿斑，之后... 详细信息

本文就芸薹黄化病毒与PEMV-2协生互作进行了研究，通过农杆菌浸润接种的方法使BrYV与PEMV-2共同侵染本生烟，18℃下接种两局后BrYV与PEMV-2在本生烟上能产生协生症状，表现为新生叶先发病，叶片向下卷曲，在叶片上产生大片褪绿斑，之后褪绿斑逐渐变成坏死斑，而BrYV或PEMV-2单独侵染本生烟均不产生明显症状。24℃下，BrYV与PEMV-2也能产生协生症状，但与18℃相比，协生症状明显减弱，通过重组马铃薯x病毒(PVX)分别表达PEMV-2的开放阅读框3(ORF3)和ORF4能够增加BrYV在本生烟的病毒积累量，表明PEMV-20RF3编码的长距离运动蛋白与ORF4编码的胞间运动蛋白都参与两病毒的协生互作。

关键词：植物病害芸薹黄化病毒豌豆耳突花叶病毒2号协生互作机制

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我国部分省市草莓种苗中黄瓜花叶病毒的检测分析

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植物病理学报 2020年第6期50卷 649-656页

作者：王佳周宇祝宁陈柳任俊达杨爱珍韩成贵尚巧霞农业农村部华北都市农业重点实验室北京农学院北京102206 北京市昌平区农业技术推广站北京102200 北京市顺义区牛栏山第二小学北京101301 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室和植物病理学系北京100193

为明确黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)在草莓上的发生和危害情况,利用RT-PCR方法对不同产地的不同品种草莓种苗进行检测,并对CMV草莓分离物的部分核苷酸序列进行了分析。结果表明,CMV侵染草莓后产生的症状主要为植株不同部位... 详细信息

为明确黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)在草莓上的发生和危害情况,利用RT-PCR方法对不同产地的不同品种草莓种苗进行检测,并对CMV草莓分离物的部分核苷酸序列进行了分析。结果表明,CMV侵染草莓后产生的症状主要为植株不同部位的畸形、变色,但有些无明显症状的植株也可以检测出CMV。共检测了我国7个不同省市的220个草莓种苗样品,其中北京、云南、辽宁、河北、四川和陕西的草莓种苗样品中均可检出CMV,内蒙古的种苗中未检出CMV。检测的6个不同草莓品种均含CMV,但北京和内蒙古的‘红颜’种苗未检出CMV,云南的‘圣诞红’种苗CMV检出率仅为2.6%。利用RT-PCR技术扩增草莓种苗中CMV的特异性核苷酸片段并对PCR产物测序,得到包含部分外壳蛋白基因及3′端非编码区共430 bp的2个草莓分离物序列。获得的2个分离物序列的核苷酸序列同源性为90.97%,序列比对分析结果表明2个分离物分属于CMV不同亚组,其中北京草莓分离物Bjcmz归属于亚组IA,河北分离物Hbcmc归属于亚组IB。

关键词：草莓黄瓜花叶病毒病害调查 RT-PCR

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芸薹黄化病毒运动蛋白的原核表达纯化及抗血清制备

芸薹黄化病毒运动蛋白的原核表达纯化及抗血清制备

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：赵航海张晓艳王颖张宗英李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学农业部重点实验室与农业生物技术国家重点实验室

芸薹黄化病毒（Brassica yellows virus,BrYV）属于黄症病毒科（Luteoviridae）马铃薯卷叶病毒属（polerovirus）,该属病毒在全球范围内广泛分布,能够侵染十字花科、茄科、藜科和禾本科等多科植物,造成较为严重的损失。病毒通过蚜虫以... 详细信息

芸薹黄化病毒（Brassica yellows virus,BrYV）属于黄症病毒科（Luteoviridae）马铃薯卷叶病毒属（polerovirus）,该属病毒在全球范围内广泛分布,能够侵染十字花科、茄科、藜科和禾本科等多科植物,造成较为严重的损失。病毒通过蚜虫以持久循回非增殖方式进行传播,属于韧皮部局限病毒,但与一些病毒复合侵染时可以突破韧皮部局限。BrYV是向海英博士等在对我国各省市的9种十字花科作物进行病毒检测和全序列分析后发现的一种在我国分布广泛的马铃薯卷叶病毒属新病毒,并且根据BrYV的序列分析结果,将其分为三种基因型,分别命名为BrYV-A,BrYV-B和BrYV-C,这三种基因型的3′端都非常保守,5′端序列差异较大。BrYV的基因组为正单链RNA。基因组RNA含有7个ORF,其中的ORF4通过渗漏扫描表达,编码运动蛋白（movement protein,MP）,该蛋白应与病毒胞间运动相关。目前的研究表明,有一些病毒的MP蛋白与病毒的致病性及症状表现密切相关,明确其在病毒致病机制中所承担的角色,对深入研究BrYV对于十字花科植物的致病性和症状形成机理有着重要意义。为了研究BrYV的MP蛋白,我们将BrYV-A的MP克隆到pDB-His-MBP表达载体上,通过转化大肠杆菌Rosetta（DH3）菌株,利用0.1mM IPTG在18℃条件下诱导表达12h,通过超声破碎,离心后将上清经过Ni亲和层析柱纯化得到目的蛋白。为了检测BrYV的MP蛋白的表达水平,我们还委托中科院遗传发育研究所制备了该蛋白的多克隆抗体,将纯化得到的总量约3mg的BrYV MP蛋白作为抗原,免疫健康大白兔获得抗血清。之后利用该抗血清对不同样品进行了Western blotting检测,发现抗血清可以有效检测到在本生烟中瞬时表达的BrYV MP蛋白,在接种BrYV病毒的本生烟接种叶和上位叶上也能检测到MP蛋白的表达,并且抗血清的特异性比较好。BrYV的MP蛋白抗血清的制备为芸薹黄化病毒的检测及其运动蛋白的功能研究打下了材料基础。

关键词：芸薹黄化病毒运动蛋白原核表达抗血清制备

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两个转录因子共同结合一个新的顺式元件调控水稻OsPinA基因的诱导表达

两个转录因子共同结合一个新的顺式元件调控水稻OsPinA基因的诱导...

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中国植物病理学会2010年学术年会

作者：赵文生许欣然李艳萍黄金光张玮范军张世宏彭友良中国农业大学植物病理学系农业生物技术国家重点实验室农业部植物病理学重点开放实验室北京100193

鉴定植物诱导型基因启动子的关键顺式元件及其互作的反式因子,有助于深入揭示植物防卫反应的表达调控机制,并对抗病植物基因工程有指导意义.本实验室在前期研究中克隆了水稻中两个受稻瘟菌侵染诱导的Borman-Birk型蛋白酶抑制剂基因OsPin... 详细信息

鉴定植物诱导型基因启动子的关键顺式元件及其互作的反式因子,有助于深入揭示植物防卫反应的表达调控机制,并对抗病植物基因工程有指导意义.本实验室在前期研究中克隆了水稻中两个受稻瘟菌侵染诱导的Borman-Birk型蛋白酶抑制剂基因OsPinA和OsPinB.特异性RT-PCR分析显示,OsPinA除受稻瘟菌侵染诱导外,还受SA、MeJA和机械伤害诱导.为鉴定OsPinA基因启动子中的稻瘟菌诱导性关键顺式元件，作者克隆了其翻译起始位点上游5'端进行了系列缺失，分别与GusA报告基因融合并转化水稻。本研究鉴定了水稻OsPinA基因中应答稻瘟菌侵染的一个尚未报道的顺式元件，并确定了其核心序列;同时分离了与此顺式元件互作的两个蛋白因子OsJAZ和OsbHLH，并证明OsJAZ和OsbHLH之间在细胞核内存在蛋白一蛋白互作。根据上述结果，作者推测:OsJAZ和OsbHLH可能通过互作并共同结合同一顺式元件来控制OsPinA基因诱导表达的“开关”，并调控防卫反应的表达水平。

关键词：稻瘟菌转录因子顺式元件基因表达

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稻瘟病菌效应因子Avr1-CO39和相应抗性蛋白RGA5AS的重组表达、纯化和晶体生长

稻瘟病菌效应因子Avr1-CO39和相应抗性蛋白RGA5AS的重组表达、纯...

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：黄丹张延安林子丽张轶琨赵彦翔刘俊峰彭友良中国农业大学植物病理学系/农业部植物病理学重点开放实验室北京 100193 中国农业大学植物病理学系/农业部植物病理学重点开放实验室北京 100193 农业生物技术国家重点实验室北京 100193

水稻稻瘟病是严重危害水稻生产的病害之一。水稻与稻瘟病菌之间的特异互作符合"基因对基因"假说。在稻瘟病菌与水稻互作过程中，水稻抗性蛋白对稻瘟病菌效应因子的识别对激活下游防御反应至关重要。针对水稻抗性蛋白和稻瘟菌... 详细信息

水稻稻瘟病是严重危害水稻生产的病害之一。水稻与稻瘟病菌之间的特异互作符合"基因对基因"假说。在稻瘟病菌与水稻互作过程中，水稻抗性蛋白对稻瘟病菌效应因子的识别对激活下游防御反应至关重要。针对水稻抗性蛋白和稻瘟菌效应因子的功能及二者相互作用机理的研究，有助于阐明稻瘟菌与水稻互作的分子机制，并将为水稻抗病遗传改良和病害防治提供新的理论基础。

关键词：稻瘟菌效应因子抗性蛋白纯化蛋白晶体

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芸薹黄化病毒三种基因型的生物学特性比较研究

芸薹黄化病毒三种基因型的生物学特性比较研究

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：张晓艳王颖张宗英李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学农业部重点实验室与农业生物技术国家重点实验室

芸薹黄化病毒（Brassica yellows virus,BrYV）是一种侵染十字花科作物的马铃薯卷叶病毒属的病毒,该病毒在我国的发生分布比较广泛,自然条件下由蚜虫以持久循回非增殖的方式传播。病毒基因组5′端的序列差异比较大,根据其5′端序列特点... 详细信息

芸薹黄化病毒（Brassica yellows virus,BrYV）是一种侵染十字花科作物的马铃薯卷叶病毒属的病毒,该病毒在我国的发生分布比较广泛,自然条件下由蚜虫以持久循回非增殖的方式传播。病毒基因组5′端的序列差异比较大,根据其5′端序列特点可分为A、B、C三种基因型。本实验室已获得BrYV三种基因型的侵染性cDNA克隆,能够通过农杆菌浸润接种的方法系统侵染本生烟。马铃薯卷叶病毒属多个成员P0被鉴定具有RNA沉默抑制活性,由于各个P0蛋白之间的氨基酸序列差异比较大,表现出来的抑制子活性强弱也存在差异。本实验室前期的研究工作中发现p0是一个很强的基因沉默抑制子,不仅能够引起局部沉默,在接种GFP转基因本生烟16c上能够抑制由单链GFP所诱发的系统沉默。BrYV三种基因型P0的氨基酸序列同源性为86.7%0.8%。通过将各P0与单链GFP共注射实验表明,BrYlV三种基因型P0都具有很强的抑制局部沉默和抑制系统沉默的能力。P0除了具有抑制RNA沉默能力以外还能够在本生烟叶片上引起细胞坏死反应。通过在本生烟叶片上瞬时表达P0比较由其产生的坏死症状发现,p0和p0比p0要延迟坏死症状的出现。并且发现将P0第228位的氨基酸F突变为L后不影响其抑制子功能,但是能够延迟坏死症状的出现。马铃薯卷叶病毒（PLRV）能够与豌豆耳突病毒2（PEMV 2）发生协生互作,我们的研究结果表明BrYV三种基因型分别与PEMV 2复合侵染本生烟同样能够发生协生互作,将BrYV和PEMV 2混合接种本生烟2周以后能够在上部叶片观察到叶片扭曲和坏死的症状,检测结果表明在PEMV 2的辅助下BrYV的积累量增加。通过比较发现BrYV三种基因型P0都是很强的基因沉默抑制子,但是,在本生烟上产生的坏死症状存在差异,并且找到一些影响症状的关键氨基酸位点,为进一步研究病毒致病性的分子机理提供了基础。

关键词：芸薹黄化病毒基因沉默

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小麦黄花叶病毒河南驻马店分离物核苷酸全序列的测定与分析

小麦黄花叶病毒河南驻马店分离物核苷酸全序列的测定与分析

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中国植物病理学会2009年学术年会

作者：张宗英徐建美韩成贵李大伟于嘉林中国农业大学植物病理学农业部重点实验室与农业生物技术国家重点实验室

＜正＞小麦黄花叶病是冬小麦上的一种严重病毒病害,其病原为由禾谷多粘菌（Polymyxa graminis）传播的小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）。在我国,小麦黄色花叶病毒分布

关键词：小麦黄花叶病病原鉴定核苷酸序列基因测定同源性分析

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侵染瓜类作物的三种马铃薯卷叶病毒属病毒的多重RT-PCR检测技术

侵染瓜类作物的三种马铃薯卷叶病毒属病毒的多重RT-PCR检测技术

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：尚巧霞向海英李大伟于嘉林韩成贵北京农学院植物科学技术学院农业应用新技术实验室中国农业大学植物病理学系农业生物技术国家重点实验室中国农业大学植物病理学系农业生物技术国家重点实验室

病毒病害的发生严重影响了瓜类作物的产量和品质。在我国存在3种侵染瓜类的马铃薯卷叶病毒属病毒,分别是南瓜蚜传黄化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)、甜瓜蚜传黄化病毒(Melon aphid-borne yellows virus,MABYV)和丝... 详细信息

病毒病害的发生严重影响了瓜类作物的产量和品质。在我国存在3种侵染瓜类的马铃薯卷叶病毒属病毒,分别是南瓜蚜传黄化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)、甜瓜蚜传黄化病毒(Melon aphid-borne yellows virus,MABYV)和丝瓜蚜传黄化病毒(Suakwa aphid-borne yellows virus,SABYV)。CABYV能够引起西瓜、黄瓜和甜瓜的大幅度减产,侵染植株后的主要为害是减少单株果实数量。SABYV和MABYV是在我国瓜类作物上新报道的两种病毒。在以往的研究中3

关键词：马铃薯卷叶病毒属瓜类作物 RT-PCR

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