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Na^＋／H^＋逆向转运蛋白NhaH短的C末端亲水域介导盐抗性和pH感应

科学通报 2008年第19期53卷 2313-2317页

作者：杨礼富张博王磊杨苏声中国农业大学生物学院微生物与免疫学系农业微生物资源与应用农业部重点实验室

Na+/H+逆向转运蛋白在维持细胞质低的Na+浓度和pH稳态等生命活动过程中扮演重要角色,然而,到目前为止,对原核微生物Na+/H+逆向转运蛋白的C末端亲水域的结构和功能还知之甚少.我们曾从达坂喜盐芽孢杆菌(Halobacillus dabanensis)D-8菌株... 详细信息

Na+/H+逆向转运蛋白在维持细胞质低的Na+浓度和pH稳态等生命活动过程中扮演重要角色,然而,到目前为止,对原核微生物Na+/H+逆向转运蛋白的C末端亲水域的结构和功能还知之甚少.我们曾从达坂喜盐芽孢杆菌(Halobacillus dabanensis)D-8菌株中克隆得到第一个中度嗜盐菌来源的Na+/H+逆向转运蛋白基因nhaH.疏水性分析表明,NhaH的C末端亲水域只包含9个氨基酸残基(395PLIKKLGMI403),大大短于与之高度同源的SynNhaP1和ApNhaP的C末端亲水域.本研究采用PCR方法,构建NhaH蛋白的C末端亲水域缺失突变体nhaH-C.耐盐性实验表明,C末端亲水域的缺失显著地抑制大肠杆菌缺陷株KNabc的互补能力.基于荧光强度的翻转膜活性测定结果显示,NhaH?C的Na+/H+和Li+/H+逆向转运蛋白活性显著低于NhaH,而且前者的Na+/H+逆向转运蛋白活性向酸端偏移,表明Na+/H+逆向转运蛋白NhaH短的C末端亲水域在阳离子结合、转运和pH感应上起重要作用.

关键词：达坂喜盐芽孢杆菌 Na^+/H^+逆向转运蛋白 C末端亲水域盐抗性 pH感应

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极端微生物蛋白质组学的研究现状

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微生物学报 2008年第12期48卷 1675-1680页

作者：冯德芹杨苏声中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室北京100101 中国农业大学生物学院微生物与免疫学系农业部农业微生物资源及其应用重点开放实验室北京100094

本文概述了近年来蛋白质组学技术在极端微生物研究领域中存在的关键问题、解决途径和研究现状。迄今为止,虽然蛋白质组学技术快速发展,但极端微生物的蛋白质组学的研究仍然存在很多困难。由于极端微生物的蛋白质-蛋白质复合物解离不彻底... 详细信息

本文概述了近年来蛋白质组学技术在极端微生物研究领域中存在的关键问题、解决途径和研究现状。迄今为止,虽然蛋白质组学技术快速发展,但极端微生物的蛋白质组学的研究仍然存在很多困难。由于极端微生物的蛋白质-蛋白质复合物解离不彻底,而嗜中温微生物的蛋白质解离和变性条件不适用于极端微生物合成的大多数蛋白质等特殊问题,致使蛋白质组学技术还没有广泛应用于嗜盐、嗜热/冷、嗜酸/碱等微生物的研究中。当然,蛋白质组学技术应用的潜能和前景吸引人们积极尝试各种各样的方法。目前,通过研究已经有效地解决了嗜盐蛋白质的分离、嵌合膜蛋白的鉴定和新蛋白质的功能推测,证实了基因组预测的一些结论,并揭示基因组不能充分解析的某些特性和新蛋白质。极端微生物蛋白质组学的研究表明,全面展示蛋白质表达谱需要不止一种蛋白质组学方法。此外,蛋白质组学和基因组学的互相印证和结合,将加速极端微生物的研究进程,深入全面地揭示微生物适应极端环境的特殊机制,进而阐明极端微生物生存的机理,为改善胁迫因素导致的伤害提供新的研究方向。

关键词：极端微生物蛋白质组学双向电泳

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喜盐涅斯捷连科氏菌ectABC基因的克隆及其对苜蓿中华根瘤菌的渗透保护作用

喜盐涅斯捷连科氏菌ectABC基因的克隆及其对苜蓿中华根瘤菌的渗透...

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中国微生物学会《第二届全国农业微生物研究及产业化研讨会》和《第十一届全国杀虫微生物学术研讨会》暨《湖北省暨武汉市微生物学会和内蒙古微生物学会2008年会》

作者：张博杨苏声中国农业大学生物学院微生物与免疫学系农业部农业微生物资源及其应用重点开放实验室

喜盐涅斯捷连科氏菌(Nesterenkonia halobia)DSM 20541是一种革兰氏阳性中度嗜盐菌,在4 mol/L NaCl条件下生长良好。四氢嘧啶和羟化四氢嘧啶是其适应高盐的主要的相溶性溶质。首先根据革兰氏阳性菌中保守性高的EctB的氨基酸序列,

关键词：中华根瘤菌 ectABC 保护作用

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阿维链霉菌adpA-a调控形态分化和黑色素形成

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科学通报 2007年第2期52卷 170-176页

作者：赵金雷文莹陈芝宋渊李季伦中国农业大学生物学院微生物学与免疫学系农业微生物资源及其应用农业部重点实验室北京100094

灰色链霉菌(Streptomyces griseus)中的AdpA是A-因子调控网络中的一个中心转录调控因子,控制形态分化和次级代谢.在阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)的基因组上,也存在着与adpA高度同源的基因adpA-a.为了研究其功能,通过同源双交换... 详细信息

灰色链霉菌(Streptomyces griseus)中的AdpA是A-因子调控网络中的一个中心转录调控因子,控制形态分化和次级代谢.在阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)的基因组上,也存在着与adpA高度同源的基因adpA-a.为了研究其功能,通过同源双交换将adpA-a基因破坏,得到的adpA-a突变株不能进行正常的形态分化,同时不再产生黑色素,但产阿维菌素(avermectin)的能力不受影响.对该破坏菌株进行基因互补,互补突变株的表型得到恢复,证实了突变株表型变化是由adpA-a破坏引起的.以上结果表明,在阿维链霉菌中,adpA-a不仅参与形态分化的调控,同时也参与黑色素生物合成的调控.

关键词：阿维链霉菌 adpA-a 阿维菌素黑色素形态分化次级代谢

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细菌钠离子输出系统的类型及其可能机制

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微生物学报 2007年第6期47卷 1110-1114页

作者：杨礼富赵百锁杨苏声中国热带农业科学院橡胶研究所农业部热带作物栽培生理学重点开放实验室儋州571737 清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室北京100084 中国农业大学生物学院微生物与免疫学系农业部农业微生物资源与应用重点实验室北京100094

在高盐条件下,绝大多数微生物通过拒盐策略适应其生存环境,其中,钠离子输出系统在维持细胞正常的盐浓度和pH稳态等生命活动过程中扮演十分重要的角色。细菌的钠离子输出系统包括初级钠泵和次级钠泵两种类型,前者所介导的钠离子输出与呼... 详细信息

在高盐条件下,绝大多数微生物通过拒盐策略适应其生存环境,其中,钠离子输出系统在维持细胞正常的盐浓度和pH稳态等生命活动过程中扮演十分重要的角色。细菌的钠离子输出系统包括初级钠泵和次级钠泵两种类型,前者所介导的钠离子输出与呼吸相偶联,后者又分为单亚基和多亚基两种类型。到目前为止,有关初级钠泵和次级钠泵转运钠离子的分子机制还停留在推测阶段。对细菌Na+输出系统的类型和Na+外排的可能机制进行综述,并对有待深入研究的问题进行探讨。

关键词：细菌钠离子输出初级钠泵次级钠泵

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中度嗜盐菌相容性溶质机制的研究进展

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微生物学报 2007年第5期47卷 937-941页

作者：赵百锁杨礼富王磊卢伟东杨苏声清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室北京100084 中国热带农业科学院橡胶研究所农业部热带作物栽培生理学重点开放实验室儋州571737 中国农业大学微生物学与免疫学系农业部农业微生物资源与应用重点实验室北京100094

生活在高盐环境中的中度嗜盐菌不仅能抗衡外界的高渗透压胁迫,而且还能迅速适应短时间内的渗透冲击。为适应该环境,中度嗜盐菌依赖于一种被称为相容性溶质的物质,以执行渗透保护功能。这类物质属于极性的、易溶的和低分子量的有机化合物... 详细信息

生活在高盐环境中的中度嗜盐菌不仅能抗衡外界的高渗透压胁迫,而且还能迅速适应短时间内的渗透冲击。为适应该环境,中度嗜盐菌依赖于一种被称为相容性溶质的物质,以执行渗透保护功能。这类物质属于极性的、易溶的和低分子量的有机化合物,其中包括糖类、氨基酸类、甜菜碱类和四氢嘧啶类等。中度嗜盐菌主要采用相容性溶质机制来适应盐环境。在此,就中度嗜盐菌的盐适应机理、相容性溶质的种类和特点,以及其作用的分子机制进行了阐述和讨论。

关键词：中度嗜盐菌相容性溶质盐适应

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费氏中华根瘤菌RT19中pha2基因簇的克隆和功能研究

费氏中华根瘤菌RT19中pha2基因簇的克隆和功能研究

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：杨礼富姜巨全魏巍张博王磊杨苏声中国农业大学生物学院微生物与免疫学系侬业部农业微生物资源与应用重点实验室中国农业大学生物学院微生物与免疫学系侬业部农业微生物资源与应用重点实验室中国农业大学生物学院微生物与免疫学系侬业部农业微生物资源与应用重点实验室中国农业大学生物学院微生物与免疫学系侬业部农业微生物资源与应用重点实验室中国农业大学生物学院微生物与免疫学系侬业部农业微生物资源与应用重点实验室中国农业大学生物学院微生物与免疫学系侬业部农业微生物资源与应用重点实验室

费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)RTl9分离自天津盐碱地,能够耐受0．6 M NaCl。通过Tn5转座子诱变,获得了21株在含0．1M NaCI的FY培养基上不能生长的盐敏感突变株。其中,19株的突变位点发生在pha2基因簇,由4个基因突变所致,它们包... 详细信息

费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)RTl9分离自天津盐碱地,能够耐受0．6 M NaCl。通过Tn5转座子诱变,获得了21株在含0．1M NaCI的FY培养基上不能生长的盐敏感突变株。其中,19株的突变位点发生在pha2基因簇,由4个基因突变所致,它们包括phaA2、 phaD2、phaF2和phaG2。pha2基因簇能完全恢复费氏中华根瘤菌RT19的pha2突变株在 0．6 MNaCl条件下的生长。生长实验表明,所有pha2突变株对Na+和Li+的敏感性没有明

关键词：中华根瘤菌基因簇功能研究

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中度嗜盐菌的盐适应机制

中度嗜盐菌的盐适应机制

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第十届全国土壤微生物学术讨论会暨第三届全国微生物肥料生产技术研讨会

作者：杨苏声杨礼富赵百锁卢伟东中国农业大学生物学院微生物学与免疫学系农业部农业微生物资源与应用重点实验室北京100094

在有盐存在的条件下才能够生长的微生物称为嗜盐微生物.科学工作者对各种地域条件下的高盐环境进行了广泛的调查研究,从中分离并命名了大量的嗜盐微生物.本文论述了相容性溶质的种类及其功能以及钠离子输出系统的类型和功能。

关键词：中度嗜盐菌盐适应机制土壤微生物

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苜蓿中华根瘤菌042BM noeAB基因的转录调控

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微生物学报 2005年第3期45卷 339-343,i001页

作者：杜秉海王磊李小红亓苏伟杨苏声中国农业大学生物学院微生物学系农业部微生物资源及其应用重点实验室北京100094

对苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BMnoeAB基因的表达调控进行研究。结果发现,葫芦巴碱不能使noeAB的表达水平提高,证明它们的转录不受nodD2的调控。当nodD3和syrM同时存在时,noeAB的表达水平没有明显的变化,表明它们也不... 详细信息

对苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BMnoeAB基因的表达调控进行研究。结果发现,葫芦巴碱不能使noeAB的表达水平提高,证明它们的转录不受nodD2的调控。当nodD3和syrM同时存在时,noeAB的表达水平没有明显的变化,表明它们也不受nodD3 syrM系统的调控。在FY基本培养基上,毛地黄黄酮的诱导使noeAB基因的表达水平提高16倍,而在不添加该诱导物的TY培养基上,noeAB基因的表达水平也能够提高30倍以上,说明noeAB是受nodD1控制的,但除受毛地黄黄酮诱导外。

关键词：苜蓿中华根瘤菌 noeAB 转录调控

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苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关基因rstA在大肠杆菌中的高效表达及其产物的纯化

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微生物学报 2005年第3期45卷 455-458页

作者：葛世超王磊李小红亓苏伟杨苏声中国农业大学生物学院微生物学系农业部微生物资源及其应用重点实验室北京100094

苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BM与耐盐有关的1 9kbDNA片段含有两个开放阅读框,采用PCR方法分别将它们扩增,连接到穿梭质粒上,并进行了耐盐功能检测,证明其中的ORF2具有耐盐性,定名为rstA基因。将它分别克隆到表达载体pT... 详细信息

苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BM与耐盐有关的1 9kbDNA片段含有两个开放阅读框,采用PCR方法分别将它们扩增,连接到穿梭质粒上,并进行了耐盐功能检测,证明其中的ORF2具有耐盐性,定名为rstA基因。将它分别克隆到表达载体pThio HisA、B和C上,构建成重组质粒pGSA、pGSB和pGSC ,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)Top10后,经IPTG诱导,pGSA获得高效表达。表达蛋白占菌体总蛋白的36 % ,但大多数以包涵体形式存在。对表达产物依次进行ProBondTM树脂亲和纯化、饱和硫酸铵盐析,最后得到纯度为95 %的融合蛋白。SDS PAGE显示纯化的蛋白质为分子量4 3kD的单一蛋白带。

关键词：苜蓿中华根瘤菌耐盐表达纯化

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