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中国兽医科学 2025年

作者：车丽妍罗金高仙张高峰赵帅阳任巧云胡东生李元飞曹立华林向鑫郑立东常国勤李星王希伟樊亮殷宏罗建勋刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室永州职业技术学院高台县动物疫病预防控制中心高台县新坝镇畜牧兽医工作站高台县南华镇畜牧兽医工作站高台县巷道镇镇畜牧兽医工作站高台县宣化镇畜牧兽医工作站江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)是一种寄生于牛血液中的梨形虫，可引起患畜卵形巴贝斯虫病。长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)是其主要的生物媒介。核糖体蛋白S6激酶(Sp6K)作为一个重要的细胞信号传导分子，在病原侵染蜱的过程中扮演... 详细信息

卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)是一种寄生于牛血液中的梨形虫，可引起患畜卵形巴贝斯虫病。长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)是其主要的生物媒介。核糖体蛋白S6激酶(Sp6K)作为一个重要的细胞信号传导分子，在病原侵染蜱的过程中扮演着关键角色。本研究利用PCR扩增长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因的全长序列，并根据获得的序列设计RpS6K的小干扰RNA(siRNA)。试验中，牛颈静脉接种卵形巴贝斯虫，建立动物感染模型。通过siRNA抑制RpS6K基因表达，应用方差分析方法(ANOVA)对Sp6K在卵形巴贝斯虫侵染长角血蜱过程中的生理指标数据进行分析。结果显示，长角血蜱RpS6K基因全长为2 922 bp。抑制试验使RpS6K基因的表达丰度降低至31.54%(P<0.05**)。动物感染试验表明，相较于对照组，试验组卵中巴贝斯虫的感染率显著下降。干扰长角血蜱RpS6K可以有效阻断卵形巴贝斯虫在蜱体中的垂直传播。因此，本研究为防治巴贝斯虫病提供了新的方向。

关键词：长角血蜱卵形巴贝斯虫核糖体蛋白S6激酶 RNAi

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绦虫基因组学研究进展

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中国人兽共患病学报 2021年第2期37卷 152-158页

作者：李秀荣闫鸿斌李立付宝权薄新文朱兴全贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家动物包虫病专业实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部人畜共患病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832000

绦虫是一类严重危害人类身体健康的寄生虫,每年给人类造成很大的经济负担。绦虫种类众多,生物学特性各异,目前绦虫病的防控和治疗措施尚不完善,对动物和人类的危害严重。随着生物信息学和基因测序技术的发展、绦虫基因组序列的测定和解... 详细信息

绦虫是一类严重危害人类身体健康的寄生虫,每年给人类造成很大的经济负担。绦虫种类众多,生物学特性各异,目前绦虫病的防控和治疗措施尚不完善,对动物和人类的危害严重。随着生物信息学和基因测序技术的发展、绦虫基因组序列的测定和解析,通过对绦虫的生物学特征和调控基因进行深度研究有助于预防和控制绦虫病,特别是人和动物的棘球蚴病和囊虫病等重要的人兽共患寄生虫病。利用绦虫基因组学和蛋白质组学等组学技术,筛选绦虫感染关键的基因和蛋白质,提供绦虫病的诊断参考依据和绦虫病治疗的潜在药物靶标。本文就绦虫基因组测序完成情况和近年来绦虫基因组学研究进展进行综述。

关键词：绦虫基因组学药物靶标

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环境中弓形虫卵囊富集及检测技术的研究进展

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中国兽医科学 2021年第3期51卷 343-348页

作者：马巧妮王萌张海生朱兴全中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 山西农业大学动物医学学院山西太谷030801

弓形虫是一种广泛流行的人兽共患寄生原虫,可感染全球约三分之一的人群和绝大多数温血动物,是引起人兽共患原虫病的重要病原之一。弓形虫的终末宿主为猫科动物,其在弓形虫的流行和传播中发挥着重要作用。猫科动物排泄的粪便中若含有感... 详细信息

弓形虫是一种广泛流行的人兽共患寄生原虫,可感染全球约三分之一的人群和绝大多数温血动物,是引起人兽共患原虫病的重要病原之一。弓形虫的终末宿主为猫科动物,其在弓形虫的流行和传播中发挥着重要作用。猫科动物排泄的粪便中若含有感染性的弓形虫卵囊,这些卵囊便可在一定条件下分散到自然环境中并污染水体、土壤、瓜果蔬菜等,从而造成危害严重的食源性污染。人群或动物有可能在活动过程中接触被弓形虫卵囊污染的土壤或摄取被卵囊污染的食物或水源而感染。本文系统地综述了环境中弓形虫卵囊的富集和检测技术,以期为进一步建立更快速、灵敏的检测方法提供新的思路。

关键词：弓形虫卵囊环境富集检测技术

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环形泰勒虫ETIF2β蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2021年第10期51卷 1253-1258页

作者：石苗李志曹天行刘爱红马全英关贵全李有全殷宏罗建勋刘军龙中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为研究环形泰勒虫真核翻译起始因子2 beta(Theileria annulata eukaryotic translation initiation factor2 beta,ETIF2β)蛋白的功能,并制备其多克隆抗体,以环形泰勒虫裂殖体cDNA为模板,用PCR扩增ETIF2β基因片段。将ETIF2β基因片段与表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达载体pET30a(+)-ETIF2β,经测序鉴定正确后,在大肠杆菌Rosetta(DE3)表达系统中表达。表达的蛋白纯化后用来免疫小鼠,制备特异性多克隆抗体。结果显示,PCR扩增的ETIF2β基因片段长约为723 bp,重组表达的ETIF2β蛋白的分子质量为38 ku。SDS-PAGE和Western-blot分析显示该蛋白主要以可溶性形式表达,并能与环形泰勒虫阳性血清发生特异性反应。用纯化的ETIF2β蛋白免疫小鼠获得了多克隆抗体,该抗体可与ETIF2β蛋白发生特异性反应。本研究成功表达了环形泰勒虫ETIF2β蛋白并制备了相应的多克隆抗体,为深入研究ETIF2β蛋白的功能奠定了基础。

关键词：环形泰勒虫 ETIF2β蛋白原核表达多克隆抗体

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人兽共患寄生虫病候选疫苗分子筛选方法研究进展

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中国畜牧兽医 2021年第6期48卷 2177-2187页

作者：代国栋闫鸿斌李立付宝权贾万忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家动物包虫病专业实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业农村部人兽共患病重点实验室兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

人兽共患寄生虫种类多、宿主广泛且危害严重。血吸虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病、旋毛虫病、弓形虫病等是常见的重要人兽共患寄生虫病。人类和家畜饱受寄生虫病的危害,这对公共卫生和畜牧业造成了很大的影响。控制传染源、切断传播途径和... 详细信息

人兽共患寄生虫种类多、宿主广泛且危害严重。血吸虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病、旋毛虫病、弓形虫病等是常见的重要人兽共患寄生虫病。人类和家畜饱受寄生虫病的危害,这对公共卫生和畜牧业造成了很大的影响。控制传染源、切断传播途径和保护易感群是控制人兽共患寄生虫病流行的综合防控措施。在综合防控策略中,疫苗的使用是切断循环链、控制乃至消灭人兽共患寄生虫病的理想和有效途径之一。选用高效的抗原筛选方法挖掘潜在的疫苗候选分子是开发疫苗的前提和关键。抗原筛选技术的更新换代使得研究者发掘出了更多新抗原和保护性多肽。现有的抗原筛选方法主要包括传统的粗抗原筛选法、cDNA文库筛选法、蛋白质组学筛选法、生物信息学及多组学技术联合筛选法。很多抗原筛选的方法是伴随寄生虫疫苗研究的发展应运而生的,粗抗原筛选法是基于抗原抗体相互反应的免疫学原理而设计的,此方法筛选的天然抗原可引起机体较强的免疫反应;cDNA文库筛选抗原的优势在于筛选更有针对性,所以候选产物的成分更单一、明确;蛋白质组学筛选法是基于质谱而兴起的一种筛选技术,它既可对未知蛋白组分进行鉴定,还可对鉴定结果进行差异比较,在未知分子的发现和功能特殊的靶分子筛选中发挥着重要作用;随着后基因时代的到来,生物信息学及多组学联合筛选技术使得抗原筛选逐步进入了多维、立体的筛选模式,也使得候选抗原及其表位的功能研究更加深入,这为基因工程疫苗和多肽疫苗候选分子的筛选提供了技术手段。

关键词：寄生虫疫苗抗原筛选 cDNA文库蛋白质组学生物信息学多组学

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胞内劳森菌0710蛋白的表达及免疫活性分析

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中国兽医科学 2021年第9期51卷 1148-1154页

作者：张昆杨顺利许笑熊铃曲自刚汪靖蔡建平中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了评价胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis)鞭毛相关蛋白LI0710的免疫原性,将LI0710基因插入到pET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET-32a-LI0710,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导目的蛋白表达,获得重组目... 详细信息

为了评价胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis)鞭毛相关蛋白LI0710的免疫原性,将LI0710基因插入到pET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET-32a-LI0710,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导目的蛋白表达,获得重组目的蛋白(rLI0710),通过Western-blot验证rLI0710的反应原性,同时用rLI0710免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,用间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)方法验证rLI0710的免疫原性。结果显示,重组LI0710蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达;Western-blot揭示rLI-0710能够与LI试验感染小鼠血清反应,表明rLI0710具有反应原性;ELISA检测表明,rLI0710能诱导家兔产生高效价抗体,且IFA分析表明此抗体能与培养细胞中的LI反应,证明rLI0710具有良好的反应原性和免疫原性。本试验为基于LI0710蛋白的猪增生性回肠炎免疫学诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：胞内劳森菌重组LI0710蛋白原核表达免疫活性

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羊巴贝斯虫SBP3基因序列分析和诊断标识潜力评价

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中国兽医科学 2021年第7期51卷 840-847页

作者：吕照勇王锦明王晓星孙浩李余彬刘军龙刘爱红李有全殷宏罗建勋关贵全中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

以GenBank中公布的巴贝斯虫球状体蛋白3(spherical body protein3,SBP3)基因序列为模板,设计合成特异性引物,从我国分离的6株羊巴贝斯虫基因组DNA和cDNA中扩增SBP3基因全长序列;利用生物信息学分析软件,进行基因序列比对、结构特征分析... 详细信息

以GenBank中公布的巴贝斯虫球状体蛋白3(spherical body protein3,SBP3)基因序列为模板,设计合成特异性引物,从我国分离的6株羊巴贝斯虫基因组DNA和cDNA中扩增SBP3基因全长序列;利用生物信息学分析软件,进行基因序列比对、结构特征分析和遗传进化分析,以阐明我国羊巴贝斯虫SBP3基因特性和各虫株间的分类关系;以SBP3基因作为靶标基因,建立巢式PCR检测方法,评价其作为诊断标识基因的潜力。结果显示,羊巴贝斯虫SBP3基因无内含子,其中羊巴贝斯虫未定种新疆株/敦煌株、莫氏巴贝斯虫宁县株/河北株和莫氏巴贝斯虫临潭株/天祝株的SBP3基因全长分别为3195 bp、3351 bp和3348 bp;遗传进化分析结果显示,我国分离的6株羊巴贝斯虫可分为2个种,其中莫氏巴贝斯虫可能存在2个亚种;以SBP3为靶标分子建立的巢式PCR可特异性鉴别检测羊巴贝斯虫未定种和莫氏巴贝斯虫,且与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫和绵羊无浆体无交叉反应,检测羊巴贝斯虫未定种最低检测限为5 pg,检测莫氏巴贝斯虫最低检测限为0.5 pg。本试验将为进一步探究羊巴贝斯虫SBP3蛋白功能及羊巴贝斯虫流行病学调查提供数据和技术支持。

关键词：羊巴贝斯虫 SBP3基因诊断标识巢式PCR

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环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端(128aa-458aa)多克隆抗体的制备与反应原性分析

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1540-1547页

作者：曹天行李志史康妍石苗刘爱红马全英关贵全李有全殷宏罗建勋刘军龙中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为获取DnaJ蛋白多克隆抗体,将截短的环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端核酸序列构建在pET-30a(+)质粒并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,经终浓度1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,蛋白可溶性分析结果显示,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE... 详细信息

为获取DnaJ蛋白多克隆抗体,将截短的环形泰勒虫DnaJ蛋白C末端核酸序列构建在pET-30a(+)质粒并转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,经终浓度1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,蛋白可溶性分析结果显示,该重组蛋白主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE结果显示,纯化后的蛋白分为2条,其中一条蛋白大小约为41.65 ku,与预期结果相符,另外一条蛋白可能因为翻译提前终止比预期条带位置偏低。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化后,皮下分点注射BALB/c小鼠,制备小鼠源DnaJ蛋白多克隆抗体。通过Western-blot验证,发现截短后的环形泰勒虫DnaJ蛋白与抗His单克隆抗体、环形泰勒虫阳性血清和抗DnaJ多克隆抗体均能反应,表明该蛋白产物具有良好的反应原性。获得的多克隆抗体可用于研究环形泰勒虫DnaJ蛋白的功能。

关键词：环形泰勒虫 DnaJ蛋白原核表达多克隆抗体反应原性分析

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非洲猪瘟病毒pNP419L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2021年第11期51卷 1392-1397页

作者：吕欣倩牛庆丽樊洁杨吉飞赵亚茹张忠辉杨赛霞敬梦瑶耿抒贤关贵全刘志杰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了评估原核表达的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pNP419L蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,将PCR扩增的NP419L基因片段插入载体pET-28a中,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达,以金属离子层析法纯化蛋白后... 详细信息

为了评估原核表达的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pNP419L蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,将PCR扩增的NP419L基因片段插入载体pET-28a中,然后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达,以金属离子层析法纯化蛋白后,免疫新西兰大白兔制备家兔抗pNP419L多克隆抗体。结果显示,用PCR成功地扩增了NP419L基因序列,NP419L基因转入表达载体后被成功表达;纯化后的重组pNP419L蛋白的分子质量为42 ku;用间接ELISA检测家兔源多克隆抗体的效价达到1∶512000,IFA试验及Western-blot检测表明该多克隆抗体具有良好的反应性及特异性。本研究为pNP419L蛋白生物学功能的研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 NP419L基因原核表达多克隆抗体

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甘肃省河西区域牛羊梨形虫病病原及媒介蜱分子流行病学调查

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中国动物检疫 2023年第10期40卷 14-20页

作者：孙明任巧云聂英仲富萍董伟民勤县畜牧兽医工作站甘肃民勤733999 甘肃陇沁现代农牧产业有限公司甘肃古浪733100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 武威市畜牧兽医科学研究院甘肃武威733000

巴贝斯虫(Babesia spp.)和泰勒虫(Theileria spp.)是世界范围内流行的蜱传播梨形虫病病原体。为评价梨形虫病传播情况,为甘肃省河西区域梨形虫病防治提供流行病学资料,采集该区域部分县区的牛羊抗凝血样品和环境游离蜱虫进行梨形虫病病... 详细信息

巴贝斯虫(Babesia spp.)和泰勒虫(Theileria spp.)是世界范围内流行的蜱传播梨形虫病病原体。为评价梨形虫病传播情况,为甘肃省河西区域梨形虫病防治提供流行病学资料,采集该区域部分县区的牛羊抗凝血样品和环境游离蜱虫进行梨形虫病病原检测,分析样品中病原体的存在和分布情况,利用MEGA 6.06软件和NCBI GenBank数据库的BLASTn工具,对阳性样品中的巴贝斯虫和泰勒虫18S rRNA基因进行序列分析和遗传进化树构建。通过基于18S rRNA的巢氏PCR方法,检出梨形虫病病原1目2科9种,包括莫氏巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫和隐藏巴贝斯虫3种巴贝斯虫,东方泰勒虫、中华泰勒虫、分离泰勒虫、吕氏泰勒虫、狍泰勒虫和环形泰勒虫6种泰勒虫。牛羊抗凝血样品梨形虫病病原总感染率为8.84%(16/181),阳性样品分布于武威市(感染率14.94%)和张掖市(感染率3.45%);检出携带梨形虫病病原的蜱9只,蜱病原携带率为2.52%(9/357)。检出的梨形虫病病原分属泰勒虫属和巴贝斯虫属2大类,每种病原跟国内外检出虫株的同源性均较高,处于各虫株相应分支上,提交序列相似率达99%~100%。调查表明,梨形虫病病原在河西走廊区域的感染仍以牧区较为严重,且呈现病原种属多样性特征。建议河西区域各畜牧兽医主管部门加强蜱传播梨形虫病的防治工作,降低梨形虫病对养羊、养牛业造成的危害。

关键词：梨形虫病分子流行病学蜱媒病甘肃省

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