检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农业学报 2011年第1期20卷 1-7页

作者：杨顺利尹双辉尚佑军沈小燕刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcap-ELISA)。将PCV2cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化***,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白。Western blo... 详细信息

利用可溶性重组PCV2-Cap蛋白肽段为抗原,建立PCV2血清抗体间接ELISA诊断方法(rhcap-ELISA)。将PCV2cap基因中含主要表位的片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,转化***,降低诱导温度至18℃诱导,获得大小为34 ku的可溶性融合蛋白。Western blotting试验证实该融合蛋白具有很强的免疫学活性,通过亲和层析柱对可溶性蛋白进行纯化。用融合表达的可溶性蛋白肽段作为抗原,建立猪圆环病毒(PCV2)血清抗体间接ELISA诊断方法。该方法的交叉反应结果表明,重组抗原与PRRSV、CSF、PPV和PRV阳性血清之间不存在交叉反应;用rhcap-ELISA和商品化的同类试剂盒(PCV2-Ab-Kit)检测137送检血清样品,2种试剂盒的阳性检测率分别为79.56%和83.21%。因此,rhcap-ELISA猪圆环病毒抗体检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性,适合于在大规模的PCV2血清抗体的检测工作中使用。

关键词：圆环病毒2型可溶性表达 ELISA 抗体检测

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酶联免疫吸附试验在口蹄疫诊断中的研究进展

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中国农学通报 2011年第29期27卷 27-32页

作者：厍大亮李冬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接... 详细信息

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接ELISA、固相竞争ELISA、间接夹心ELISA。新型ELISA包括单克隆抗体ELISA、PCR-ELISA、生物素-亲和素ELISA及Dot-ELISA。ELISA的发展方向应当是既灵敏稳定,又操作方便、易于实现自动化。随着技术的进步,ELISA在临床诊断和流行病学调查中将会有更加广泛的应用。

关键词：口蹄疫诊断方法酶联免疫吸附试验

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Asia1型口蹄疫病毒含RSD受体识别位点感染性克隆的构建与病毒拯救

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畜牧兽医学报 2011年第2期42卷 210-216页

作者：李平花白兴文孙普卢曾军曹伟军谢宝霞吴润殷宏刘在新甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)具有高的突变率和很强的适应性,在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境,这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不... 详细信息

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)具有高的突变率和很强的适应性,在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境,这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不同宿主传代后产生含RSD和RDD受体识别基序的变异株,为了研究含RDD受体识别基序的FMDV在受体结合位点内1个氨基酸的变化是否影响感染性病毒子的产生,作者利用已构建的含RDD受体结合位点的FMDV Asia1/JS/China/05株的全长感染性cDNA克隆为骨架,采用融合PCR方法,构建了该毒株含RSD受体位点的全长cDNA克隆pFMDV-RSD。线性化的pFMDV-RSD重组质粒和表达T7RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,56 h后可观察到典型的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光试验、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析,结果证实该毒株细胞受体位点1个氨基酸的替换不影响活病毒的拯救。该试验为进一步研究含RSD受体结合位点FMDV的生物学特性奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 RSD受体结合位点感染性cDNA克隆病毒拯救

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蛋白质组学在动物医学中的应用研究进展

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动物医学进展 2011年第6期32卷 139-141页

作者：刘永杰张克山卢国栋尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

利用蛋白质组学技术研究动物疾病,能发现与疾病发生,发展和转归过程密切相关的蛋白质及其变化特征,为相关疫苗和新型药物的开发提供新的途径。论文从蛋白质组在动物病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫病及其他营养代谢病方面的研究进展进... 详细信息

利用蛋白质组学技术研究动物疾病,能发现与疾病发生,发展和转归过程密切相关的蛋白质及其变化特征,为相关疫苗和新型药物的开发提供新的途径。论文从蛋白质组在动物病毒性疾病、细菌性疾病、寄生虫病及其他营养代谢病方面的研究进展进行综述。

关键词：蛋白质组学动物医学应用

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实时荧光定量PCR筛选牛源整联蛋白αv基因的siRNA片段

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动物医学进展 2011年第3期32卷 56-60页

作者：张国峰独军政常惠芸薛霜骆继怀中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

设计并合成三条针对牛口蹄疫病毒(FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因的特异性干扰小RNA(SiRNA)片段,将其转染至本身表达整联蛋白受体αv亚基基因的MDBK细胞。分别在转染后36 h和48 h收集细胞,提取细胞总RNA并反转录为cDNA。应用SYBR Green... 详细信息

设计并合成三条针对牛口蹄疫病毒(FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因的特异性干扰小RNA(SiRNA)片段,将其转染至本身表达整联蛋白受体αv亚基基因的MDBK细胞。分别在转染后36 h和48 h收集细胞,提取细胞总RNA并反转录为cDNA。应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR的方法检测3个siRNA片段的干扰效果,筛选出对整联蛋白αv基因具有高效干扰效果的小RNA片段。为建立抗口蹄疫病毒牛新品种培育的RNA干扰转基因技术平台奠定了基础。

关键词：实时荧光定量PCR 整联蛋白 RNA干扰 SYBR GreenⅠ

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口蹄疫病毒免疫逃避机制研究进展

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畜牧与兽医 2011年第7期43卷 96-99页

作者：马延滨高闪电丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细... 详细信息

口蹄疫(FMD)是偶蹄动物的一种剧烈的接触传染性疾病。病毒可以进化出不同的方法逃避机体免疫系统的清除,处于一种潜在感染状态,这种现象叫做免疫逃避。免疫逃避可以阻断机体的先天性免疫应答以及获得性免疫应答,这主要是通过诱导免疫细胞凋亡、抑制免疫效应分子功能、抑制抗原呈递实现的。全面深入地研究口蹄疫发病及免疫机制将有助于高保护力疫苗的研制,同时为口蹄疫的生物疗法提供可能。

关键词： FMDV 免疫抑制细胞凋亡免疫逃避

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沙门菌载体重组疫苗的研究进展

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中国兽医杂志 2011年第6期47卷 54-56页

作者：马延滨高闪电丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个... 详细信息

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个体问的人为传播而引发疾病。

关键词：重组疫苗沙门菌载体肌肉注射免疫操作病原微生物应激反应生长繁殖

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Asia 1型口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))亚细胞定位

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中国兽医学报 2011年第5期31卷 687-691页

作者：刘永杰张克山尚佑军杨顺利卢国栋刘湘涛吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染B... 详细信息

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒前导蛋白亚细胞定位

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PRRSV-GSLZ-1/2009细胞毒和组织毒致病特征的比较

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微生物学通报 2011年第1期38卷 63-69页

作者：杜平尚佑军刘学荣董文教贺延玉黄银君牟克斌中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室围家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学研究测试中心甘肃兰州730070

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株在细胞适应中的遗传变异与其致病性的关系。在进行遗传变异分析后,将GSLZ-1/2009细胞适应毒和组织毒同时接种36日龄健康仔猪,对感染... 详细信息

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株在细胞适应中的遗传变异与其致病性的关系。在进行遗传变异分析后,将GSLZ-1/2009细胞适应毒和组织毒同时接种36日龄健康仔猪,对感染后的临床症状、体征变化、抗体及炎性因子水平进行了实时监测和动力学分析,并对组织病变进行了显微观察。结果显示:在细胞适应过程中致病相关基因并未发生任何突变,但细胞适应株所诱发的抗体及炎症因子反应均明显较组织毒弱,且所造成的病理损伤也比较轻微。表明PRRSV野毒株在细胞适应过程中毒力会减弱,而毒株的弱化可能由遗传变异之外的因素决定。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒特性致病特征

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口蹄疫灭活疫苗的生产工艺概述

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中国兽药杂志 2011年第1期45卷 41-44页

作者：厍大亮李冬中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点实验室国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

灭活疫苗仍然是当前防控口蹄疫使用的主要疫苗,因此研究灭活疫苗生产工艺具有非常重要的现实意义。详细论述了口蹄疫灭活疫苗生产过程,并对近年来生产工艺方面的一些研究进展做了简要介绍。

关键词：口蹄疫灭活疫苗生产工艺质量控制

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