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中国人兽共患病学报 2013年第10期29卷 951-954页

作者：张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21)... 详细信息

目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过间接免疫荧光试验(IFA)验证B2L基因表达。结果扩增出目的片段经序列测定和分析证明为ORFV B2L基因,经双酶切鉴定和序列测定分析证明了pVAX1-B2L质粒的正确性,IFA证实目的基因在BHK-21细胞中能够瞬时表达。结论为进一步研制基于羊口疮病毒B2L基因的DNA疫苗奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒 B2L基因真核表达 DNA疫苗

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牛狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析

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畜牧兽医学报 2013年第4期44卷 598-601页

为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗... 详细信息

为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗传进化关系。内基氏小体检测、荧光抗体试验、乳鼠脑内接种试验和特异性目的基因扩增结果显示狂犬病毒阳性,建立了基于狂犬病毒N基因的遗传进化关系树。结合临床症状确诊该病例为牛狂犬病,遗传进化分析表明本研究鉴定的狂犬病毒和2006年及2007年国内狗源狂犬病毒(DQ666306、DQ866121)、猪源狂犬病毒(DQ496219)及人源狂犬病毒(EF556197)的遗传关系较近。本文为研究牛狂犬病毒分子流行病学积累了资料。

关键词：牛狂犬病毒分离鉴定分子特征分析

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TLR-7／8激动剂作为疫苗佐剂的最新研究进展

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免疫学杂志 2013年第6期29卷 527-530页

作者：周春雪李冬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

小分子TLR-7和TLR-8激动剂(agonist)具有很强的抗病毒与抗肿瘤性能,引起了科研人员的极大关注。最为重要的当属咪唑喹啉衍生物家族(imidazoquinoline),包括咪喹莫特(imiquimod),瑞喹莫特(resiquimod)等。通过对不同种类的咪唑喹啉衍生... 详细信息

小分子TLR-7和TLR-8激动剂(agonist)具有很强的抗病毒与抗肿瘤性能,引起了科研人员的极大关注。最为重要的当属咪唑喹啉衍生物家族(imidazoquinoline),包括咪喹莫特(imiquimod),瑞喹莫特(resiquimod)等。通过对不同种类的咪唑喹啉衍生物的研究,TLR-7和TLR-8的多种新功能被揭示了出来。TLR-7/8介导对中心转录因子的调节,可以诱发炎性细胞因子和其他调节成分的产生,从而在抗病毒与抗肿瘤的免疫反应中起到重要作用。试验证实,咪唑喹啉衍生物与蛋白质疫苗、多肽疫苗和DNA疫苗协同作用后,诱发的免疫反应倾向Th1,同时产生大量的细胞因子及趋化因子,这使得其有可能成为一种新型的疫苗佐剂。越来越多的咪唑喹啉衍生物(imidazoquinoline)被研发出来,并且应用于试验及临床当中,为寻找一种新的、简单而安全的疫苗佐剂开辟了新思路。

关键词：咪唑喹啉衍生物咪喹莫特瑞奎莫特佐剂

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绵羊伪狂犬病病毒的鉴定及序列分析

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中国兽医科学 2013年第3期43卷 221-224页

作者：张克山刘永杰孔汉金尚佑军逯忠新田宏尹双辉刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为确诊疑似绵羊伪狂犬病、分析其病原gC基因序列特征,以山东某羊场疑似伪狂犬病病料为对象,经负染后进行电镜观察,PCR扩增特异性gC基因并对其进行序列测定及遗传进化关系分析。电镜下观察可见病毒样粒子,病料中扩增出特异性目的基因片段... 详细信息

为确诊疑似绵羊伪狂犬病、分析其病原gC基因序列特征,以山东某羊场疑似伪狂犬病病料为对象,经负染后进行电镜观察,PCR扩增特异性gC基因并对其进行序列测定及遗传进化关系分析。电镜下观察可见病毒样粒子,病料中扩增出特异性目的基因片段,序列测定结果显示扩增的目的基因为伪狂犬病病毒(PRV)gC基因片段。遗传进化分析表明该病毒和1998年分离于南美洲阿根廷的猪伪狂犬病病毒遗传关系最近,同属于一个进化分支。流行病学及临床症状和实验室检测结果表明该病例为绵羊伪狂犬病病毒引起,为国内进行羊PRV分子流行病学研究积累了资料。

关键词：绵羊伪狂犬病病毒鉴定序列分析

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绵羊呼吸道病原菌分离及药敏试验

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中国兽医杂志 2013年第9期49卷 38-39页

作者：张克山刘永杰孔汉金尚佑军逯忠新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

近年来迫于环境和资源的双重压力，我国肉羊饲养由牧区向农区和南方草山草坡地区扩展转移已成必然之势。由于饲养环境和养殖方式的改变，羊病发生的风险将会大增，呼吸系统疾病上升并已成为制约肉羊规模化饲养进程的主要因素之一。

关键词：药敏试验呼吸道分离病原绵羊饲养环境呼吸系统疾病规模化饲养

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羊传染性脓疱诊断技术研究进展

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动物医学进展 2013年第2期34卷 96-99页

作者：刘永杰张克山孔汉金尚佑军逯忠新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

羊传染性脓疱皮炎(也称羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒)引起的绵羊、山羊的一种急性、接触性传染病,可给羊的生产带来巨大的经济损失,并威胁人类健康。及时准确的诊断是防控羊口疮的重要环节,羊口疮的诊断方法包括临床诊断、... 详细信息

羊传染性脓疱皮炎(也称羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒)引起的绵羊、山羊的一种急性、接触性传染病,可给羊的生产带来巨大的经济损失,并威胁人类健康。及时准确的诊断是防控羊口疮的重要环节,羊口疮的诊断方法包括临床诊断、病原学诊断、血清学诊断、分子生物学检测技术等,每种技术体系中又包括多个诊断方法。论文对国内外羊口疮诊断技术研究现状进行概述,并展望了今后的相关研究重点和方向。

关键词：羊传染性脓疱(羊口疮) 诊断技术

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羊传染性脓疱诊断技术研究进展

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中国畜牧兽医文摘 2014年第9期30卷 152-152页

作者：刘永杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730070

羊传染性脓疱皮炎（也称羊口疮）是由羊传染性脓疱病毒（羊口疮病毒）引起的绵羊、山羊的一种急性、接触性传染病，可给羊的生产带来巨大的经济损失，并威胁人类健康。及时准确的诊断是防控羊口疮的重要环节，羊口疮的诊断方法包括临床... 详细信息

羊传染性脓疱皮炎（也称羊口疮）是由羊传染性脓疱病毒（羊口疮病毒）引起的绵羊、山羊的一种急性、接触性传染病，可给羊的生产带来巨大的经济损失，并威胁人类健康。及时准确的诊断是防控羊口疮的重要环节，羊口疮的诊断方法包括临床诊断、病原学诊断、血清学诊断、分子生物学检测技术等，每种技术体系中又包括多个诊断方法。论文对国内外羊口疮诊断技术研究现状进行概述，并展望了今后的相关研究重点和方向。

关键词：羊传染性脓疱病毒诊断技术传染性脓疱皮炎接触性传染病诊断方法羊口疮病原学诊断血清学诊断

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猪圆环病毒2型ORF3基因的表达及其表达产物免疫小鼠后致细胞因子变化的研究

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 583-587页

作者：王亚军杨顺利才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中国动物疫病预防控制中心北京100125

为掌握猪圆环病毒2型(PCV2)ORF3蛋白免疫小鼠后引起其细胞因子变化的特征,设计了特异性引物,以PCV2FJ948167毒株的基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF3基因,并将其克隆到pSMK-sumo原核表达载体。把构建成功的重组质粒转化至BL21(DE3RIL str... 详细信息

为掌握猪圆环病毒2型(PCV2)ORF3蛋白免疫小鼠后引起其细胞因子变化的特征,设计了特异性引物,以PCV2FJ948167毒株的基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF3基因,并将其克隆到pSMK-sumo原核表达载体。把构建成功的重组质粒转化至BL21(DE3RIL strain)表达菌株,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western-blot分析显示,ORF3基因已在大肠杆菌中表达,表达产物的分子质量约为32ku。将分离纯化后的ORF3蛋白免疫小鼠,检测免疫后不同时间点IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12在血清中的质量浓度。结果显示,免疫后小鼠血清中IL-4的质量浓度显著升高(P<0.05),而IL-10、IL-12和INF-γ的质量浓度没有明显的变化。结果表明,ORF3蛋白在PCV2诱发的体液免疫中发挥一定的作用。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF3基因 γ-干扰素白细胞介素4 白细胞介素10 白细胞介素12

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牛、羊新发病毒性传染病——施马伦贝格病毒

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中国动物保健 2013年第1期15卷 28-29页

作者：张克山刘永杰付志成尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

2011年11月在德国西部城镇施马伦贝格检测出一种新型病毒,以其首次阳性病毒标本检出的地名命名为"施马伦贝格病毒"。该病毒能够感染牛、山羊、绵羊等家畜并引起发热、腹泻、乏力等症状,导致动物早产或难产。继德国之后,荷兰... 详细信息

2011年11月在德国西部城镇施马伦贝格检测出一种新型病毒,以其首次阳性病毒标本检出的地名命名为"施马伦贝格病毒"。该病毒能够感染牛、山羊、绵羊等家畜并引起发热、腹泻、乏力等症状,导致动物早产或难产。继德国之后,荷兰、比利时、法国、卢森堡、意大利、西班牙等欧盟8个国家的牛羊等家畜中证实出现疫情。由于现阶段缺乏有效疫苗,被感染牛、羊数量仍在继续上升,引起世界范围内对此病毒的关注,本文就施马伦贝格病毒的危害及在欧洲的传播情况作如下简述,以期为进出口检疫部门和动物引种工作者提供参考。

关键词：施马伦贝格病毒新发病牛羊

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A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列的测定及其基因特征分析

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安徽农业科学 2013年第2期41卷 640-641,700页

作者：谢毅牟一娇朱琳刘强赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]测定A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列并分析其基因特征,为研究我国最近发生的A型口蹄疫病毒的致病性、流行规律以及筛选适用的疫情防控疫苗株奠定分子基础。[方法]应用RT-PCR方法,分段扩增、克隆A/HeN/1/2009株基因,并... 详细信息

[目的]测定A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列并分析其基因特征,为研究我国最近发生的A型口蹄疫病毒的致病性、流行规律以及筛选适用的疫情防控疫苗株奠定分子基础。[方法]应用RT-PCR方法,分段扩增、克隆A/HeN/1/2009株基因,并进行基因测序;借助DNAStar分子生物学软件,从分子流行病学角度分析A/HeN/1/2009株与参考毒株之间可能的遗传衍化关系。[结果]该毒株基因组全长8 171 nts[不包括poly(C)区段和poly(A)尾巴],其中5'-UTR和3'-UTR分别为1 080、92 nts,蛋白编码区为6 999 nts。分析A/HeN/1/2009株遗传衍化关系显示,该毒株划为东南亚拓扑型Laos03系的VN09亚系,同源性依次为87.3%～91.8%、93.7%～94.5%和96.9%～98.4%。[结论]VP1中A24V、N85R、S196T,3A中I61V、T128S、E147G和A134V在该毒群的进化过程中扮演重要角色;A/SH/1/2009株VP1 140-160基序为RSD。

关键词：口蹄疫病毒 A HeN 1 2009株全基因组东南亚拓扑型

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