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中国兽医科学 2024年第4期54卷 541-545页

作者：时志琪王玉桂李晓璐王帅郭爱疆中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)是肠道黏膜组织中最丰富的抗体类型,与黏液和抗菌肽组成肠上皮细胞的第一道防线,保护其免受肠道病原的侵害。sIgA不仅可以阻止病原微生物的入侵,中和毒素,而且能够调节肠道菌群的组成比例,维持肠道内微生物群的... 详细信息

分泌型免疫球蛋白A(sIgA)是肠道黏膜组织中最丰富的抗体类型,与黏液和抗菌肽组成肠上皮细胞的第一道防线,保护其免受肠道病原的侵害。sIgA不仅可以阻止病原微生物的入侵,中和毒素,而且能够调节肠道菌群的组成比例,维持肠道内微生物群的稳态。本综述主要介绍肠道sIgA的合成与分泌途径、sIgA与肠道菌群的相互作用。

关键词：分泌型免疫球蛋白A 肠道菌群相互作用

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结核分枝杆菌调控树突状细胞抗原提呈的分子机制研究进展

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微生物学报 2025年第5期65卷 1905-1917页

作者：马慧宋银娟马玲储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州甘肃省疾病预防控制中心甘肃兰州

结核病是一种古老且严重危害全球人类和动物健康的人兽共患病,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是引起结核病的主要病原体。树突状细胞(dendritic cell,DC)作为连接机体固有免疫应答和适应性免疫应答的桥梁,凭借其强大的... 详细信息

结核病是一种古老且严重危害全球人类和动物健康的人兽共患病,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是引起结核病的主要病原体。树突状细胞(dendritic cell,DC)作为连接机体固有免疫应答和适应性免疫应答的桥梁,凭借其强大的抗原提呈功能激活宿主适应性免疫反应,以抵御病原体的进一步感染,在控制Mtb感染中发挥重要作用。近年来,越来越多的研究表明Mtb可通过调控DC分化和成熟、干扰吞噬作用和自噬过程、抑制抗原提呈相关分子的表达等多种策略逃避宿主免疫杀伤,从而引起持续性感染。本文就目前Mtb调控DC抗原提呈分子机制的研究进展进行梳理,以期为进一步深入研究Mtb-DC互作机制及结核病防控策略提供参考。

关键词：结核分枝杆菌树突状细胞抗原提呈分子机制

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非洲猪瘟病毒H108R蛋白的制备及其免疫原性评价

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畜牧兽医学报 2025年第3期56卷 1344-1354页

作者：张越茹毅郝荣增杨锐赵陇和李亚军杨洋张荣蒋成辉郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白,通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性,为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质,选择编码蛋白33~108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体,转化... 详细信息

本研究旨在制备ASFV H108R蛋白,通过免疫小鼠评价该蛋白的免疫原性,为该蛋白作为疫苗候选抗原的研究提供理论依据。利用生物信息学工具分析H108R蛋白的结构及基本理化性质,选择编码蛋白33~108 AA的基因序列串联融合到原核表达载体,转化后经IPTG诱导表达,用镍亲和层析纯化目标蛋白质。免疫小鼠利用流式细胞术检测脾脏活化的CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞,分离小鼠血清测定特异性抗体滴度,利用Western blot和IFA鉴定多克隆抗体的特异性。并用试剂盒检测血清中细胞因子含量,将血清与ASFV-GFP病毒孵育评估抗体是否能抑制病毒的复制。生物信息学分析表明H108R蛋白为亲水性蛋白质,有跨膜区,无信号肽,蛋白二三级结构中存在较多α-螺旋。SDS-PAGE、Western blot显示IPTG诱导后,成功表达纯化H108R蛋白。蛋白免疫小鼠后能够诱导小鼠脾脏T细胞的活化,刺激机体产生更高水平的细胞因子。免疫制备的多克隆抗体效价为1∶128000,能与ASFV-GFP病毒特异性结合,与病毒孵育后能明显抑制病毒的复制。本研究成功表达制备了ASFV H108R蛋白,免疫能够诱导脾脏T淋巴细胞活化,引起细胞因子水平升高,制备的多克隆抗体能够明显抑制病毒的复制,具有较好的免疫原性,为深入研究H108R蛋白的生物学功能及疫苗研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) H108R蛋白多克隆抗体免疫原性

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非洲猪瘟病毒毒力因子MGF360-4L靶向降解RIPK3促进病毒复制的研究

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 995-1001页

作者：曹雪静范许许朱兆宇裴丹诗王一卓张继燕何路李熙忠任青峰郑海学万博李伟伟河南农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

本研究首先利用CellTiter-Glo试剂盒测定MGF360-4L对细胞活力的影响；通过蛋白免疫印迹（Western-blot）检测MGF360-4L及其突变体对细胞坏死通路关键接头分子表达的影响；通过同源重组技术构建MGF360-4L缺失毒株（ASFV-ΔMGF360-4L）；... 详细信息

本研究首先利用CellTiter-Glo试剂盒测定MGF360-4L对细胞活力的影响；通过蛋白免疫印迹（Western-blot）检测MGF360-4L及其突变体对细胞坏死通路关键接头分子表达的影响；通过同源重组技术构建MGF360-4L缺失毒株（ASFV-ΔMGF360-4L）；利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析ASFV野生毒株（ASFV-WT）与其缺失毒株（ASFV-ΔMGF360-4L）复制水平的差异；通过Western-blot检测MGF360-4L缺失对ASFV诱导的细胞坏死的影响。结果表明，MGF360-4L包含1个RHIM，并通过溶酶体途径降解RIPK3，从而抑制细胞坏死通路的活化；MGF360-4L发挥上述功能依赖其RHIM结构域；ASFV-ΔMGF360-4L毒株复制水平低于野生毒株，且该缺失毒株能够诱导更高水平的细胞坏死。本研究证实ASFV毒力因子MGF360-4L依赖其RHIM结构域靶向降解RIPK3，并促进病毒自身复制，为ASFV致病机理的阐明提供了科学数据。

关键词：非洲猪瘟病毒细胞坏死 RHIM RIPK3 MGF360-4L

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抗口蹄疫病毒IgA抗体的构建表达及其抗病毒活性的分析

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畜牧兽医学报 2025年

作者：刘峰李坤章兴赜马雪青孙普李凤娟曹轶梅白兴文付元芳袁红欧阳一凡刘在新卢曾军李平花中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

口蹄疫是口蹄疫病毒引起危害猪、牛和羊等主要家畜的一种烈性传染病，为了发展抗口蹄疫病毒的新策略，进行疾病的综合防控，本研究将O型、A型口蹄疫病毒特异性猪BCR文库中筛选获得的5株O型和A型口蹄疫病毒共有克隆型IgA抗体的重链可变区... 详细信息

口蹄疫是口蹄疫病毒引起危害猪、牛和羊等主要家畜的一种烈性传染病，为了发展抗口蹄疫病毒的新策略，进行疾病的综合防控，本研究将O型、A型口蹄疫病毒特异性猪BCR文库中筛选获得的5株O型和A型口蹄疫病毒共有克隆型IgA抗体的重链可变区（VH）和轻链可变区(VL)序列分别与猪IgA的重链恒定区基因和轻链（Kappa 链）恒定区基因拼接，分别构建5个IgA的重链载体质粒和5个轻链载体质粒，并将其分别共转染CHO-S悬浮细胞，转染7 d后收集上清进行蛋白纯化。纯化后的抗体用SDS-PAGE和Western blot鉴定、并用微量病毒中和试验分析5株IgA抗体中和O型、A型口蹄疫病毒的能力，用间接ELISA方法检测5株IgA抗体与口蹄疫病毒的反应性。结果表明：本研究成功构建质粒并表达了5株抗口蹄疫病毒的IgA抗体，这些抗体对O型和A型口蹄疫病毒均无中和活性，但其中1株抗体（POA-A8）与口蹄疫病毒特异性结合的能力最强，可以用于未来口蹄疫病毒诊断检测方法的建立。本研究为未来非中和的分泌型IgA抗口蹄疫病毒的研究以及病毒诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 IgA抗体构建表达抗病毒活性

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抗口蹄疫病毒分泌型IgA抗体的构建表达及特性研究

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微生物学报 2025年

作者：刘锋李坤马雪青欧阳一凡孙普章兴赜曹轶梅白兴文袁红李凤娟刘在新卢曾军李平花中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

【目的】制备抗口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus， FMDV)分泌性IgA (secretory IgA， sIgA)抗体，为口蹄疫(foot-and-mouth disease， FMD)的综合防控提供新思路和前期基础。【方法】以实验室前期筛选的一株抗O型和A型FMDV的Ig... 详细信息

【目的】制备抗口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus， FMDV)分泌性IgA (secretory IgA， sIgA)抗体，为口蹄疫(foot-and-mouth disease， FMD)的综合防控提供新思路和前期基础。【方法】以实验室前期筛选的一株抗O型和A型FMDV的IgG型中和抗体POA-8为模板，用猪IgA重链的恒定区基因(经密码子优化)替换IgG重链的相应区域，构建抗FMDV IgA抗体的重链真核表达质粒；同时分别构建含猪源J链和分泌片(secretory component， SC)的真核表达质粒，以及同时含IgA抗体的重链、轻链和J链基因的真核表达质粒。采用4质粒(重、轻、J和SC)或2质粒(重+轻+J+SC)分别瞬时共转染CHO-S悬浮细胞，进行抗FMDV sIgA抗体的组装表达。表达的sIgA抗体经纯化后，通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定，并利用间接ELISA和微量病毒中和实验评价sIgA抗体与FMDV的结合活性和中和活性。【结果】四质粒或2质粒共转染CHO-S细胞后，均能成功组装表达抗FMDV的sIgA抗体，且sIgA抗体对O型和A型FMDV的结合能力及中和能力均强于IgG抗体。【结论】本研究成功构建了抗FMDV sIgA抗体的表达系统，为未来FMD黏膜疫苗和抗病毒药物的开发奠定了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒分泌性IgA抗体构建表达特性研究

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三株荆州市猫细小病毒的分离鉴定及其进化分析

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中国兽医科学 2024年

作者：吕熙王运航邱实郭慧琛孙世琪白满元杨丰利长江大学动物科学技术学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

为了解我国湖北省荆州市猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus，FPV)的流行状况、遗传变异和演化方向。本研究采集荆州市4例疑似FPV病死猫肠道样本、1例FPV阳性粪便样本。经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞，连续盲传至... 详细信息

为了解我国湖北省荆州市猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus，FPV)的流行状况、遗传变异和演化方向。本研究采集荆州市4例疑似FPV病死猫肠道样本、1例FPV阳性粪便样本。经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞，连续盲传至出现显著细胞病变(cytopathic effect，CPE)，利用PCR、间接免疫荧光实验(IFA)、电子显微镜等技术对其进行鉴定。经鉴定，共分离出3株FPV，分别命名为FPV-JZ202201、FPV-JZ202202和FPV-JZ202203。经VP2基因测序并构建进化树。结果显示，此3株FPV的VP2序列与国内外参考毒株的核苷酸同源性为97.9%～99.9%，氨基酸序列同源性为97.6%～99.9%；其中FPV-JZ202203与2023年河北省保定市分离毒株OR727316处于同一分支，与国内疫苗株的距离较远，处于不同的拓朴亚群，FPV-JZ202201和FPV-JZ202202与国内当前流行的其他FPV毒株以及现有的疫苗株在遗传上表现出较高的相似性，且它们均归属于同一遗传拓扑群。本研究结果对于了解FPV的流行病学特征具有重要意义。它不仅增加了我们对FPV流行毒株遗传背景的认识，还为未来FPV疫苗的研发和优化提供了宝贵的基础数据。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 VP2 分离鉴定序列分析

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猪流行性腹泻病毒S蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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中国兽医科学 2025年

作者：林圣宇高梦玲汤娇蒙奎洋赵隆陈佳宁朱婷福建农林大学动物科学学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院山西农业大学动物医学学院

为了进一步探究猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染的机制，利用CHO真核表达系统表达并纯化了PEDV S1蛋白，然后将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合后筛选获得了1株抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光和Western-blot等试验证... 详细信息

为了进一步探究猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染的机制，利用CHO真核表达系统表达并纯化了PEDV S1蛋白，然后将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合后筛选获得了1株抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光和Western-blot等试验证明所制备的单克隆抗体可特异性地识别PEDV S蛋白。综上，成功制备了PEDV S1蛋白单克隆抗体，为PEDV的检测和后续研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白单克隆抗体

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基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定

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畜牧兽医学报 2024年第10期55卷 4571-4578页

作者：王运航景伟穆素雨孙世琪郭慧琛白满元中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 榆林学院生命科学学院榆林719000

脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病... 详细信息

脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病。采用P1、3CD共表达的构建策略,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得EMCV病毒样颗粒(virus-like particals,VLPs)并将其免疫小鼠,初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果显示,免疫组小鼠特异性抗体滴度达到1∶192以上,中和抗体滴度达到1∶64以上,且与ISA206佐剂混合使用可诱导机体产生更高的抗体水平。IL-4、IFN-γ、IL-5、TNF-α细胞因子水平均可达到20 pg·mL^(-1),且明显高于PBS组。综上,本研究获得的EMCV病毒样颗粒疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答,还能诱导炎症细胞因子的产生,有助于激发机体的免疫反应,增强疫苗的保护效果,为EMCV的防控提供了理论依据和技术储备。

关键词：杆状病毒-昆虫细胞表达系统脑心肌炎病毒病毒样颗粒

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非洲猪瘟病毒M1249L基因编码蛋白的序列分析和结构预测及亚细胞定位

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中国兽医科学 2023年第5期53卷 578-587页

作者：王悦亢伟芳任静静彭江玲张敬李丹杨文萍郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学与生物安全学院甘肃兰州730046

为了解非洲猪瘟病毒(ASFV)M1249L基因及其编码蛋白pM1249L的结构和功能,本研究从NCBI数据库中采集100个ASFV毒株基因序列,对这些毒株的M1249L基因序列及氨基酸序列进行比对并构建分子进化树;进一步分析M1249L基因及p M1249L蛋白的理化性... 详细信息

为了解非洲猪瘟病毒(ASFV)M1249L基因及其编码蛋白pM1249L的结构和功能,本研究从NCBI数据库中采集100个ASFV毒株基因序列,对这些毒株的M1249L基因序列及氨基酸序列进行比对并构建分子进化树;进一步分析M1249L基因及p M1249L蛋白的理化性质,预测pM1249L蛋白的二级结构,预测并验证pM1249L蛋白在胞内的分布,验证p M1249L蛋白的泛素化修饰。结果表明,本实验室所使用毒株CN/GS/2018的M1249L基因与ASFV II型毒株同源性最高,相似度为99.87%;氨基酸序列比对结果表明,pM1249L蛋白较为保守;物理性质分析显示,p M1249L蛋白较为稳定,无跨膜区,无核定位序列及信号肽;化学性质分析显示,pM1249L蛋白具有磷酸化、泛素化、糖基化修饰位点;p M1249L蛋白以α-螺旋为主;激光共聚焦试验证实pM1249L蛋白分布于胞质;免疫共沉淀试验表明,pM1249L蛋白能够发生泛素化修饰。通过网站预测及试验验证,本研究全面分析了p M1249L蛋白的理化特性,为阐明其发挥功能的结构基础提供了相关数据。

关键词：非洲猪瘟病毒 pM1249L蛋白序列分析泛素化亚细胞定位

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