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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用生物制品中非动物替代方法的应用及研究进展,并从兽用疫苗效力检验、安全检验方面介绍了部分兽用疫苗的非动物替代方法.同时对适合建立替代方法的兽用疫苗进行分析,以期为兽用疫苗替代方法研究提供参考.

关键词：兽用疫苗效力检验安全检验非动物实验

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Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：赵丽丽刘海燕徐丽晶王怡平陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏... 详细信息

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏感性高,最低能检出5.3pg Ⅰ型鸭肝炎病毒和2.7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA模板。其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和流感病毒(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒检测结果为阳性。用建立的方法检测了江苏徐州采集的100份样品,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的阳性率分别为1.2%和26%。结论建立了Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭瘟病毒一步法PCR 应用

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原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

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实验动物科学 2017年第3期34卷 1-5页

作者：王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 详细信息

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词：鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：徐丽晶陆涛峰王怡平陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病... 详细信息

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴度(TCID50).第一代DPV即在鸭胚脐带间充质干细胞上产生了明显的CPE,并且在连续传代的过程中CPE能够稳定出现.电镜观察显示,初步提纯的病毒悬浮液在电镜下可见到结构清晰的子代病毒.PCR检测结果显示,F1～F10代DPV均能扩增出大小为416bp的UL6基因片段.间接免疫荧光又进一步证实DPV的阳性血清能够对染毒病灶产生特异性荧光染色.而且连续测定10代的病毒滴度(TCID50)均不低于10-6.43.说明DPV能在鸭胚脐带间充质干细胞上稳定增殖.本研究有望为获得高纯度鸭瘟病毒及细胞源疫苗研究提供理论基础.

关键词：鸭瘟病毒鸭胚脐带间充质干细胞适应性病毒增殖

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 249-251页

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只出现CHD1-Z。结论本文建立的方法可作为禽类性别的有效鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 244-248页

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件... 详细信息

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同。结论尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关。

关键词： miR-200b 马立克氏病(MD) 抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室东北农业大学生命科学学院

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只扩增出CHD1-Z。结论这种PCR方法可作为SPF动物育种过程中有效的鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：李思琪尹海畅陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室牡丹江师范学院生命科学与技术学院

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别... 详细信息

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF细胞总RNA,进行反转录后,采用荧光定量PCR的方法,检测鸭IFNγ及干扰素刺激因子的表达量变化情况。结果显示:鸭IFNγ及干扰素刺激因子Mx、DDX50、OASI在mRNA水平上调。实验表明,DEV感染DEF细胞能够诱导鸭IFNγ产生及其相关信号通路的激活。本研究为进一步探索DEV感染DEF细胞激活Ⅱ型干扰素的机制提供理论基础,进而为水禽病的防控、净化提供思路。

关键词：鸭肠炎病毒鸭胚成纤维细胞干扰素干扰素刺激因子上调表达

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多... 详细信息

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析。结果:四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度，物种多样性无显著差异（P＞0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门（Bacteroidetes)丰度占95％以上;乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属（Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属，不同时期丰度差异达显著水平（P＜0.05)。结论:四个生长阶段菌群组成多样，且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词：实验用鸡肠道菌群物种多样性品质评定健康监测安全性

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 231-239页

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

目的提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用Illumina HiSeq 2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了α-多样性指数、β-多样... 详细信息

目的提供SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便,利用Illumina HiSeq 2500高通量测序方法,对样品16S rRNA的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析。结果四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度,物种多样性无显著差异(P>0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度占95%以上;乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属,不同时期丰度差异达显著水平(P<0.05)。结论四个生长阶段菌群组成多样,且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词： SPF鸡不同生长阶段粪便菌群 16s rRNA Illumina HiSeq 2500高通量测序

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