检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2012年第5期45卷 999-1009页

作者：周财源张名岳韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

【目的】从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10(avianβ-defensin 10,AvBD10)基因,通过大肠杆菌进行原核表达,检测重组鹅AvBD10蛋白的生物学特性。【方法】采用RT-PCR方法,从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10基因。根据已发现的禽β-防御素和部分... 详细信息

【目的】从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10(avianβ-defensin 10,AvBD10)基因,通过大肠杆菌进行原核表达,检测重组鹅AvBD10蛋白的生物学特性。【方法】采用RT-PCR方法,从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10基因。根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建系统进化树,进行遗传进化分析;并应用荧光定量的方法对该基因的组织表达水平进行鉴定。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,并对该重组蛋白进行纯化,测定体外生物学活性。【结果】从鹅肾脏组织中克隆出了鹅AvBD10基因,该基因的cDNA大小为207 bp,编码68个氨基酸。经遗传进化分析表明,该基因推导的氨基酸序列与鸭AvBD10的同源性最高,达92.7%。通过对重组蛋白抗菌活性的检测发现,该蛋白对12种致病性细菌均具有较强抑菌作用,但在高盐离子浓度下活性减弱。并且重组蛋白不具有溶血的特性。【结论】成功克隆并表达了鹅AvBD10基因,原核表达产物具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。

关键词：鹅AvBD10 克隆遗传进化分析组织表达抗菌活性

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鸭β-防御素16的分离、鉴定及其抗病毒机制

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中国农业科学 2012年第18期45卷 3873-3882页

作者：张可心张名岳辛胜男韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

【研究目的】旨在克隆与表达鸭β-防御素16(AvBD16)基因及测定其生物学特性,监测了鸭肝炎病毒感染后麻鸭不同组织AvBD16与TLR-7的动态变化。【方法】采用RT-PCR方法,从鸭骨髓组织中扩增到鸭AvBD16,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-... 详细信息

【研究目的】旨在克隆与表达鸭β-防御素16(AvBD16)基因及测定其生物学特性,监测了鸭肝炎病毒感染后麻鸭不同组织AvBD16与TLR-7的动态变化。【方法】采用RT-PCR方法,从鸭骨髓组织中扩增到鸭AvBD16,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对其重组和合成蛋白进行生物学活性测定。采用荧光定量PCR方法,分别检测了鸭肝炎病毒对鸭AvBD16和TLR-7在不同组织中表达量的影响。【结果】鸭AvBD16 cDNA大小为155bp,编码50个氨基酸残基,与鸡AvBD3氨基酸同源性最高,为62%。重组和合成鸭AvBD16蛋白对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响,且溶血活性极低。重组AvBD16蛋白具有体外抗病毒活性。经鸭肝炎病毒诱导后,鸭AvBD16在肝脏及其他组织中被诱导表达或表达量显著上调,且与TLR7的表达量呈正相关。【结论】成功克隆并表达了鸭AvBD16基因,重组和合成AvBD16蛋白具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。重组AvBD16蛋白具有抗鸭肝炎病毒的活性,体内抗病毒作用可能受TLR-7通路调节。

关键词：鸭AvBD16 抗菌活性抗病毒活性信号传导

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猪细环病毒流行病学与遗传变异研究进展

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动物医学进展 2012年第3期33卷 89-93页

作者：刘建波刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪细环病毒(PTTV)是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但... 详细信息

猪细环病毒(PTTV)是近年来发现的一种新病毒,属于指环病毒科、ι指环病毒属成员。该病毒在世界范围内广泛存在,在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中,PTTV的流行率明显高于健康猪群,怀疑该病毒与PCV-2等病原起协同致病作用,但仍没有找到合适的细胞系适于病毒的体外培养。论文主要围绕其流行病学和遗传变异情况进行了综述,简要介绍了该病毒的多种检测方法,这对进一步研究该病毒的分布和致病性及防控有重要意义。

关键词：猪输血传播病毒流行病学遗传变异

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猪流行性腹泻病毒蛋白对Vero E6核蛋白B23.1的影响

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中国兽医杂志 2012年第4期48卷 21-23,I0003页

作者：石达吕茂杰陈建飞时红艳张志榜冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感染对照组,而后利用激光共聚焦显微镜分析感染和转染细胞中B23.1蛋白的变化。结果表明,PEDV N蛋白与Vero E6核蛋白B23.1有共定位特征,在PEDV感染Vero E6细胞12h后,B23.1蛋白开始发生变化,随着时间的延长逐渐碎裂、分散。这个结果提示,病毒可能通过破坏核仁的结构和核仁蛋白的功能,进而为病毒的复制提供便利。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白 VeroE6细胞核蛋白B23.1

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家禽病毒性免疫抑制病流行特点与防控对策

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中国家禽 2012年第15期34卷 5-11页

作者：高玉龙秦立廷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

免疫抑制病是一类危害养禽业健康发展的重要疾病,本文着重探讨病毒性免疫抑制病(如鸡传染性法氏囊病、鸡传染性贫血、禽网状内皮组织增殖症和禽白血病)的流行状况与防控对策。

关键词：免疫抑制病鸡传染性法氏囊病鸡传染性贫血禽网状内皮组织增殖症禽白血病防控

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TLR-4介导的鹅β-防御素1抗肠炎沙门菌感染的信号传导机制初探

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畜牧兽医学报 2012年第12期43卷 1938-1948页

作者：张名岳张可心辛胜男韩宗玺邵昱昊刘晓丽刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-g... 详细信息

为研究鹅β-防御素1(AvBD1)的生物学特性以及初步尝试探寻其抗肠炎沙门菌的作用机理,利用RT-PCR方法从鹅骨髓组织中扩增到鹅AvBD1基因片段,并将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-goose AvBD1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鹅AvBD1蛋白在原核高效表达(相对分子质量约31ku)。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性。结果显示,鹅AvBD1基因cDNA片段大小为198bp,编码65个氨基酸残基。经相似性分析发现鹅AvBD1氨基酸序列与鸵鸟AvBD1氨基酸序列相似性最高,为77.1%,而且重组鹅AvBD1蛋白具有广谱的抗菌活性,对12种细菌(包括革兰阳性菌和革兰阴性菌)均具有抑菌作用。高盐离子浓度显著降低重组鹅AvBD1蛋白的抗菌活性,且该重组蛋白的溶血活性极低。试验表明,肠炎沙门菌确实会诱导鹅AvBD1基因在鹅骨髓组织中的表达,说明鹅AvBD1起到了抗肠炎沙门菌感染的作用,而这种作用有可能与TLR4介导的信号转导有关。

关键词：鹅β-防御素1 重组蛋白抗菌活性 Toll样受体4 诱导表达

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非洲猪瘟病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 807-809页

作者：崔尚金胡泉博刘业兵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国兽医药品监察所北京100081

为将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测,本研究建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法,该方法采用纳米金颗粒作为热导介子,提高了PCR反应效率,采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与... 详细信息

为将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测,本研究建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法,该方法采用纳米金颗粒作为热导介子,提高了PCR反应效率,采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪捷申病毒、猪脑心肌炎病毒等,结果只有ASFV能够扩增出552 bp的目的片段。敏感性试验表明纳米PCR检测技术是常规PCR检测技术敏感性的1 000倍以上,最低核酸拷贝数检出量可以达到10个拷贝。采用该方法对黑龙江、吉林和河南3个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测,检测结果显示均为阴性,在以上3个地区均未发现ASFV感染情况。

关键词：纳米PCR 非洲猪瘟病毒 P54基因

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马流感病毒血凝素基因甲病毒复制子重组表达质粒的构建及其免疫效力评价

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 568-572页

作者：仇铮郭巍孙元戚亭仇华吉相文华东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001

为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/... 详细信息

为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/c鼠能够检测到特异性抗体产生,而且HI抗体水平持续升高,同时小鼠体内IFN-γ、IL-4分泌水平也有所升高。攻毒后小鼠表现轻度临床症状,但病毒分离和RT-PCR均未检测到病毒。上述结果表明,该重组质粒pSFV1CS-EIV-HA具有良好的免疫原性并且可以诱导免疫动物产生较高免疫应答的能力。

关键词：马流感病毒甲病毒复制子载体

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J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达

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中国畜牧兽医 2012年第4期39卷 42-46页

作者：徐延伟高宏雷高玉龙李凯高立秦立廷祁小乐王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得... 详细信息

为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。

关键词： J亚群禽白血病 gp85基因毕赤酵母分泌表达

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我国部分地区种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

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中国家禽 2012年第12期34卷 64-65页

作者：贠炳岭刘在斯吴关李久宽秦立廷祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒（Turky rhinotracheitis virus,TRTV）[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是... 详细信息

禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒（Turky rhinotracheitis virus,TRTV）[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是鸡肿头综合征的因素之一。

关键词：禽肺病毒感染血清学调查种鸡鼻气管炎病毒鸡呼吸道疾病鸡肿头综合征 virus 产蛋量下降

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