检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 219-222页

作者：董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学山东泰安271018 东北农业大学黑龙江哈尔滨150001

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western b... 详细信息

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。

关键词： PRRSV Nsp4 原核表达抗原性

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表达小反刍兽疫病毒F基因重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 253-256页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的... 详细信息

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的重组腺病毒质粒pAdV-F,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-F。经PCR和Dot-ELISA鉴定,F蛋白在AD-293细胞中获得表达。该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低。间接ELISA方法检测显示rHAdV-F可以诱导小鼠产生抗PPRV特异性体液免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 F基因重组腺病毒表达免疫原性

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鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的原核表达及兔抗血清的制备

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中国家禽 2011年第2期34卷 11-14页

作者：康忠惠王永强王琦李久宽秦立廷高玉龙高宏雷祁小乐林欢王笑梅许修宏东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP1基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切处理后与经相同酶切处理的pET-30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及测序鉴定正确的阳性重组子转化BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白His-VP1经IPT... 详细信息

以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP1基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切处理后与经相同酶切处理的pET-30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及测序鉴定正确的阳性重组子转化BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白His-VP1经IPTG诱导表达后主要以包涵体形式存在。Western blot检测到约97ku的目的蛋白能够与特异性的VP1单克隆抗体反应。将纯化的目的蛋白免疫新西兰白兔后获得了抗VP1蛋白的血清。该血清能够与重组杆状病毒rBacGxVP1感染的sf9细胞发生特异性反应,而且其ELISA抗体效价达到1∶25600。鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的表达与兔抗血清的制备为病毒的检测及VP1功能的研究提供了有效工具。

关键词：鸡传染性法氏囊病超强毒 VP1 原核表达兔抗VP1血清

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传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gD基因主要抗原区的表达

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中国兽医科学 2011年第2期41卷 188-192页

作者：魏秀英石星明张晶王玫赵妍胡顺磊崔红玉全炎铭闫帅陈洪岩王云峰东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第25... 详细信息

为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第256～405aa的编码片段设计引物并进行PCR扩增,结果获得截短的gD基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化*** BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为43.5ku的重组蛋白,命名为r-gD。Western-blot分析结果表明,r-gD具有较强的抗原性。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白D 序列分析蛋白质免疫印迹

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J亚群禽白血病病毒gp85基因在重组杆状病毒中的表达及鉴定

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畜牧与兽医 2011年第8期43卷 4-7页

作者：倪伟秦立廷孙美玉高玉龙潘伟王笑梅刘思当中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的gp85蛋白,将ALV-J的gp85基因克隆至pFastBac-HTA供体质粒,将其转入DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞,使gp85基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组穿梭载体Bacmid-gp85。通过脂质体介导,将重组穿梭载体Bacmi... 详细信息

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的gp85蛋白,将ALV-J的gp85基因克隆至pFastBac-HTA供体质粒,将其转入DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞,使gp85基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组穿梭载体Bacmid-gp85。通过脂质体介导,将重组穿梭载体Bacmid-gp85转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacgp85。Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定结果表明ALV-J gp85蛋白在Sf9昆虫细胞中得到正确表达,表达的重组gp85蛋白分子量约为38 ku。ALV-J gp85重组蛋白在Sf9细胞中的正确表达为其功能研究和应用提供了良好的基础。

关键词： J亚群禽白血病病毒 gp85基因杆状病毒

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猪圆环病毒病的流行趋势与防控

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兽药市场指南 2011年第11期 36-36,49页

作者：刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室

我国猪群中猪圆环病毒2型感染十分普遍，流行病学调查表明，猪圆环病毒2型抗体阳性率高达80％以上，被调查的猪场阳性率达100％，尚未发现有抗体阴性猪场存在。猪圆环病毒2型感染途径主要以口为主，病毒先定殖于扁桃体，随血流进入周身... 详细信息

我国猪群中猪圆环病毒2型感染十分普遍，流行病学调查表明，猪圆环病毒2型抗体阳性率高达80％以上，被调查的猪场阳性率达100％，尚未发现有抗体阴性猪场存在。猪圆环病毒2型感染途径主要以口为主，病毒先定殖于扁桃体，随血流进入周身淋巴结，在淋巴细胞中大量繁殖扩增，形成了不同程度的病毒血症。当病毒滴度高时，血清抗体滴度较低，临床上就会呈现明显的发病症状。大部分猪只在病毒感染后几周内会刺激机体产生高水平的抗体，抗体能够将病毒抗原中和，临床上表现为耐过康复。

关键词：猪圆环病毒病流行趋势猪圆环病毒2型抗体滴度防控感染途径流行病学淋巴细胞

来源：评论

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表达小反刍兽疫病毒H基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫原性的试验

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中国兽医杂志 2011年第7期47卷 20-22页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达... 详细信息

人工合成密码子优化的小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,电转化BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdV-H,转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-H。用PCR和Dot-ELISA鉴定H基因在AD-293细胞中的表达,同时用一步生长曲线,测定该重组腺病毒的复制能力。接种小鼠评价免疫效力,用间接ELISA试验检测抗体水平,结果表明,PPRV H基因在AD-293细胞中获得了表达,子代重组腺病毒在感染细胞后60 h滴度最高,为3×108PFU/mL。rHAdV-H免疫小鼠产生针对PPRV特异性抗体,表明该重组腺病毒可以诱导抗PPRV的特异性免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 H基因重组腺病毒表达免疫原性

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猪圆环病毒病流行趋势与防控对策

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畜牧兽医科技信息 2011年第10期27卷 16-17页

作者：陆月华郭龙军危艳武刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等，统称为猪圆环病毒病。

关键词：猪圆环病毒病断奶仔猪多系统衰竭综合征防控对策流行趋势猪呼吸道疾病综合征猪圆环病毒2型淋巴结肿大母猪繁殖障碍

来源：评论

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现代生物技术在猪病诊断和防治中的应用

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猪业科学 2011年第8期28卷 32-37页

作者：崔宇超崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

生物技术是指应用生命科学研究成果,以人们意志设计,对生物或生物的成分进行改造和利用的技术。现在,多种猪病混合感染严重威胁着我国的养猪业。本文简述了生物技术在猪病的诊断和防治中的部分应用。生物技术在猪病诊断中的应用主要包... 详细信息

生物技术是指应用生命科学研究成果,以人们意志设计,对生物或生物的成分进行改造和利用的技术。现在,多种猪病混合感染严重威胁着我国的养猪业。本文简述了生物技术在猪病的诊断和防治中的部分应用。生物技术在猪病诊断中的应用主要包括蛋白的克隆表达与纯化技术,从而做成敏感性、特异性高的试剂盒;生物技术在猪病防治中的应用主要包括研单位疫苗、(非复制性及)活载体疫苗和干扰素等。生物技术在猪病的诊断和防治中还有很多其他应用,本文只是抛砖引玉。

关键词：生物技术猪病诊断防治

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Sf9细胞PHB2蛋白的原核表达及其抗血清的制备

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中国预防兽医学报 2011年第7期33卷 562-564页

作者：马国达王茜于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学生命科学与技术学院黑龙江大庆163319

为了研究Sf9细胞PHB2蛋白(Sf-PHB2)的功能及其对虾白斑综合症病毒(WSSV)极早期基因ie1的转录调控作用,本研究从昆虫细胞Sf9中扩增sf-phb2基因编码区,克隆至表达载体pET30a中,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达6His-Sf-PHB2重组蛋白。SDS-... 详细信息

为了研究Sf9细胞PHB2蛋白(Sf-PHB2)的功能及其对虾白斑综合症病毒(WSSV)极早期基因ie1的转录调控作用,本研究从昆虫细胞Sf9中扩增sf-phb2基因编码区,克隆至表达载体pET30a中,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达6His-Sf-PHB2重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白以包涵体形式存在。在变性条件下,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化Sf-PHB2重组蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体,并用western blot方法检测抗体的反应性。本研究制备了Sf-PHB2抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。

关键词： Sf9细胞PHB2蛋白原核表达抗体制备

来源：评论

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