检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 448-453页

作者：袁婧刘长明魏萍危艳武张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊... 详细信息

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h可检测到抗原阳性细胞,接种后60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。IFA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征直接免疫荧光诊断

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抗鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 654-656页

作者：于丹韩宗玺邵昱昊李慧昕金鑫孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院吉林延边134000

为建立抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单克隆抗体(MAb),利用浓缩的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA和有限稀释法,经筛选和克隆后获得了一株抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞系(2D2)。经鉴定,其MAb... 详细信息

为建立抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单克隆抗体(MAb),利用浓缩的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA和有限稀释法,经筛选和克隆后获得了一株抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞系(2D2)。经鉴定,其MAb的重链为IgG1亚型,轻链为κ链。ELISA和western blot试验结果表明,所获得的这株2D2 MAb可特异性识别IBV N蛋白。2D2 MAb可与多种血清型IBV发生反应,表明该MAb识别的表位可能位于N蛋白的保守区域。为进一步鉴定IBV的表位及诊断试剂的研究奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 N蛋白单克隆抗体

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同时检测猪瘟病毒和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定量RT-PCR方法的建立

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畜牧兽医学报 2009年第1期40卷 72-77页

作者：成丹赵建军李娜孙元周艳君朱妍田志军涂长春童光志仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院乌鲁木齐830052 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针,建立一种同时检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2 TCID50的CSFV和1.8TCID50的北美洲型PRRSV,比常规PCR方法敏感性高5... 详细信息

应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针,建立一种同时检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2 TCID50的CSFV和1.8TCID50的北美洲型PRRSV,比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测,结果73份为PRRSV阳性,16份为CSFV阳性,13份为CSFV和PRRSV混合感染,与常规RT-PCR的符合率高达99.4%。该复合荧光定量RT-PCR方法敏感、特异、重复性好。

关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒复合荧光定量RT—PCR

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猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 168-172页

作者：韦天超田志军周艳君安同庆肖燕彭金美姜一峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定... 详细信息

为建立一种检测猪γ-干扰素（IFN-γ）的荧光定量RT—PCR方法，针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A（CyPA）的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针，以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18T-CyPA为标准品，进行实时荧光定量RT-PCR检测，并构建猪IFN-γ mRNA和CyPA的荧光定量RT—PCR标准曲线。结果表明，建立的方法在1×10^1～1×10^7copies／μL模板范围内具有良好的线性关系，相关系数产均高达0．999，扩增效率均高于99．0％；可检测至少为100 copies的阳性标准品。该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点，可应用于临床样品的检测。

关键词：猪 IFN-γ 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针

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表达高致病性猪蓝耳病病毒GP5重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 20-23页

作者：陈瑾田志军彭金美王瑜周艳君安同庆童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 华中农业大学动物医学学院湖北武汉430075 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

将PCR扩增的高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)HuN4株GP5基因与含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达盒插入到伪狂犬病毒通用转移载体pgG-uni中,构建了转移载体pgG-HPGP5-EGFP。通过磷酸钙法将转移载体pgG-HPGP5-EGFP和PRV Bartha-K61株的基因... 详细信息

将PCR扩增的高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)HuN4株GP5基因与含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达盒插入到伪狂犬病毒通用转移载体pgG-uni中,构建了转移载体pgG-HPGP5-EGFP。通过磷酸钙法将转移载体pgG-HPGP5-EGFP和PRV Bartha-K61株的基因组共转染Vero细胞,经过8轮荧光蚀斑筛选和PCR鉴定获得了稳定表达EGFP的重组病毒,命名为rPRV-HPGP5。IFA和western blot结果证实HP-PRRSV HuN4株GP5在重组病毒中得到了有效表达。该重组病毒的获得为高致病性猪蓝耳病基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：高致病性蓝耳病病毒 HuN4 GP5 伪狂犬病病毒重组

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基因修饰的鸡新城疫病毒HN基因DNA疫苗免疫效力评价

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畜牧兽医学报 2009年第10期40卷 1526-1531页

作者：石星明贺笋王玫杨桂花曾伟伟崔红玉童光志王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院动物医学系张家口075131 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了评价基因修饰对提高DNA疫苗免疫效果的影响,将NDV F48E9株HN基因进行密码子优化和信号肽替换,修饰后的基因命名为SoptiHN,将HN和SoptiHN基因分别克隆至pVAX 1和含CpG-ODN刺激序列的载体pVAX 1-CpG中,共获得pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN... 详细信息

为了评价基因修饰对提高DNA疫苗免疫效果的影响,将NDV F48E9株HN基因进行密码子优化和信号肽替换,修饰后的基因命名为SoptiHN,将HN和SoptiHN基因分别克隆至pVAX 1和含CpG-ODN刺激序列的载体pVAX 1-CpG中,共获得pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-HN和pVC-HN 4种质粒。将4种质粒股四头肌多点注射3周龄SPF鸡,每只鸡200μg,以PBS为非免疫对照;一免后3周以相同的剂量加强免疫,二免后2周以103EID50NDV的F48E9强毒株进行攻毒,计算发病率、死亡率以及排毒情况。试验期间每周采集血清进行HI抗体的检测,同时采集抗凝血分离外周血淋巴细胞,分析免疫后各试验组IFN-γ和IL-18的变化情况。结果表明,疫苗免疫1周后,所有免疫组均能产生抗NDV的HI抗体,pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN组最高,与其他组差异显著;pVC-SoptiHN和pVC-HN质粒免疫组IFN-γ和IL-18表达水平要略高于pV-SoptiHN和pV-HN质粒免疫组。攻毒结果显示,pV-SoptiHN与pVC-SoptiHN免疫组的死亡保护率均为71%,排毒检出率均为25%,而pV-HN和pVC-HN免疫组的保护率均为50%,排毒检出率分别为50%和44%,pVAX1、pVAX1-CpG和PBS对照组攻毒后的死亡率均为100%,排毒检出率均为100%,pV-SoptiHN与pVC-SoptiHN免疫组的排毒时间与其他5组相比有所缩短。以上结果表明,修饰后的HN基因可以诱导鸡产生更强烈的免疫反应,获得更好的保护效率。

关键词：基因修饰 NDV DNA疫苗免疫保护

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表达传染性支气管炎S1基因和IFN-γ基因重组鸡痘病毒安全性与最适免疫剂量分析

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畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 712-716页

作者：石星明王云峰王玫兰德松任刚李继松曾伟伟孙妍刘胜旺童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001 东莞出入境检验检疫局东莞523071 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

对共表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因和II型干扰素基因的重组鸡痘病毒（rFPV-IFNγS1）冻干疫苗进行安全性和最适免疫剂量的研究。取冻干疫苗，加生理盐水恢复至冻干前体积，分别取0.1 mL经翅内侧无血管处皮下接种1周龄SPF鸡，接种剂量... 详细信息

对共表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因和II型干扰素基因的重组鸡痘病毒（rFPV-IFNγS1）冻干疫苗进行安全性和最适免疫剂量的研究。取冻干疫苗，加生理盐水恢复至冻干前体积，分别取0.1 mL经翅内侧无血管处皮下接种1周龄SPF鸡，接种剂量为1.0×10^5PFU，接种后3 d出现局部反应，5 d局部肿胀达到最大，接种鸡无其它全身反应，精神、食欲以及发育等均不受影响，说明重组病毒对实验鸡是安全的。将重组疫苗用生理盐水作倍比稀释后翅内侧无血管处皮下接种4周龄SPF鸡，接种剂量为1.0×10^1-1.0×10^4PFU，免疫后3周攻击传染性支气管炎病毒LX4株。结果表明，在接种剂量为1.0×10^2-1.0×10^4PFU的剂量范围内均可以使全部实验鸡产生局部反应，并对IBV的攻击形成保护，降低免疫鸡的发病率和死亡率，发病保护率达到73%以上；1.0×10^1PFU接种实验鸡后，仅有5/11的鸡出现局部反应，对IBV攻击的发病保护率为64%，与对照组差异不显著（P〉0.05）。以上结果说明，疫苗接种后的局部反应与重组疫苗的免疫效力之间具有相关性，根据疫苗生产使用实际情况确定传染性支气管炎重组鸡痘病毒疫苗的最适免疫剂量为10^3PFU。

关键词：传染性支气管炎重组鸡痘病毒 S1基因最适免疫剂量

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PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR GreenⅠ实时荧光PCR鉴别方法的建立

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中国兽医科学 2009年第2期39卷 140-144页

作者：柴政李曦王小武符芳张永欣肖晶蔡雪辉周艳君宋淑萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 北京资源亚太药品公司北京102600 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方... 详细信息

根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性。应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、142、1 d分别采集全血,检测结果均为阳性。证实,本试验所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR 高致病性毒株经典毒株

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不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

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中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 99-103,109页

作者：刘怀然孙敏华葛鑫刘胜旺刘培欣孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为阐明不同宿主及不同基因型新城疫病毒(NDV)对SPF鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的基因Ⅶd亚型NDV6株,鸡源基因Ⅲ型和鸽源基因Ⅵb型毒株各1株,以及基因Ⅸ型强毒F48E9,共9株NDV毒株进行致病性试验。在对各毒株的EID50及主... 详细信息

为阐明不同宿主及不同基因型新城疫病毒(NDV)对SPF鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的基因Ⅶd亚型NDV6株,鸡源基因Ⅲ型和鸽源基因Ⅵb型毒株各1株,以及基因Ⅸ型强毒F48E9,共9株NDV毒株进行致病性试验。在对各毒株的EID50及主要致病指数MDT、ICPI测定基础之上,以相同剂量感染15日龄SPF鸡,观察临床症状及剖检病变,计算发病率和死亡率,并在攻毒后不同时间采集主要组织样品,以SYBR GreenI Real-timePCR检测病毒最早出现时间及病毒载量。结果表明,6株基因Ⅶd亚型NDV毒株导致SPF鸡100%发病,死亡率90%以上,属于高致病性毒株;基因Ⅲ、Ⅵb型毒株导致SPF鸡发病但不死亡,属于中等毒力毒株。Ⅶd亚型毒株与F48E9株攻毒后SPF鸡在病理变化、组织嗜性及病毒载量上没有显著差异。根据毒株的MDT、ICPI指数及攻毒鸡病程综合判断,Ⅶd亚型毒株在致病性上与F48E9株差异不显著。健康野鸟携带基因Ⅶd亚型高致病性NDV,在NDV的自然生态传播过程中起重要作用,提示应该加强对野鸟的流行病学监测及相关研究。

关键词：新城疫病毒基因型致病性病毒载量

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O型FMDV VP1基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 568-571页

作者：任宪刚薛飞朱远茂冯军科史鸿飞高欲燃中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大... 详细信息

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示重组蛋白的分子量约为38ku,以包涵体的形式存在。Westernblot与间接ELISA结果显示重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。进一步将纯化的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶1600。本研究为FMDV的其他研究工作提供了基础材料。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因表达鉴定多克隆抗体制备

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