检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 861-865页

作者：徐灵龙石星明王云峰史春林王玫孙妍童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

根据抗菌肽CAP18活性片段的氨基酸序列,采用SOE技术,设计合成了CAP18的编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行序列测定后亚克隆至pET-32a(+)表达载体中,在*** BL21(DE3)中表达融合蛋白CAP18。经Ni2+亲和层析后回收CAP18融合蛋白,纯度达到... 详细信息

根据抗菌肽CAP18活性片段的氨基酸序列,采用SOE技术,设计合成了CAP18的编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行序列测定后亚克隆至pET-32a(+)表达载体中,在*** BL21(DE3)中表达融合蛋白CAP18。经Ni2+亲和层析后回收CAP18融合蛋白,纯度达到了85%以上。对纯化的融合蛋白进行酶切,用液体生长抑制方法检测切割后样品的活性,结果表明重组抗菌肽CAP18对大肠杆菌具有抑制活性。

关键词：兔抗菌肽CAP18 融合基因重组表达抑菌活性

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鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LSD/05Ⅰ的分离、鉴定及弱毒疫苗对气管的保护

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农业生物技术学报 2008年第6期16卷 911-919页

作者：王钰李成仁张晓楠韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室东北农业大学黑龙江八一农垦大学

从2005~2006年中国部分地区鸡场疑似鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus)感染鸡分离到12株鸡传染性支气管炎病毒,并对其部分生物学特性及基因型进行了研究。发现其中11株病毒分属于LX4和CK/CH/LSC/99Ⅰ型。通过S1... 详细信息

从2005~2006年中国部分地区鸡场疑似鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus)感染鸡分离到12株鸡传染性支气管炎病毒,并对其部分生物学特性及基因型进行了研究。发现其中11株病毒分属于LX4和CK/CH/LSC/99Ⅰ型。通过S1基因比较、进化树分析、BLAST搜寻和动物试验研究发现,CK/CH/LSD/05Ⅰ是一株新型变异毒株。动物感染试验表明,CK/CH/LSD/05Ⅰ感染鸡的肾脏病变不明显,仅有20%的感染鸡肾脏病毒分离呈阳性,但100%感染鸡呼吸道病毒分离阳性,表明该病毒不是中国普遍流行的肾型毒株,而其对呼吸道具有较强嗜性。同时,实验应用弱毒疫苗H120和本实验室致弱的3株异种毒株进行了动物保护试验,结果显示,用CK/CH/LSD/05Ⅰ攻毒后,这4株异种传染性支气管炎病毒的免疫对气管的保护率很低。初步揭示该毒株可能属新的血清型病毒。

关键词：传染性支气管炎病毒纤突蛋白变异株组织嗜性

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重组鸡抗菌肽Gallinacin-9的原核表达及其抗菌活性的鉴定

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畜牧兽医学报 2008年第10期39卷 1426-1431页

作者：韩宗玺马得莹刘胜旺李一经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院哈尔滨150030

采用RT-PCR方法,从鸡舌组织中扩增到Gallinacin-9(Gal-9)基因,测序表明Gal-9为201 bp,其成熟肽由67个氨基酸残基组成。进一步将克隆的Gal-9基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX... 详细信息

采用RT-PCR方法,从鸡舌组织中扩增到Gallinacin-9(Gal-9)基因,测序表明Gal-9为201 bp,其成熟肽由67个氨基酸残基组成。进一步将克隆的Gal-9基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-Gal-9,经序列分析鉴定确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳表明该基因在大肠杆菌中高水平表达,表达的重组鸡Gal-9融合蛋白相对分子质量约为32 ku。重组蛋白占菌体总蛋白的40%。表达的重组鸡Gal-9融合蛋白以包涵体的形式存在。重组蛋白经纯化后,分别以对数生长中期的大肠杆菌BL21(DE3-)株与致病性链球菌CAB株为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组Gal-9蛋白的抗菌活性,结果表明,重组Gal-9对这2种细菌都具有抗菌活性。

关键词： Gallinacins-9 鸡融合蛋白抗菌活性

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鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究

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中国预防兽医学报 2008年第7期30卷 495-499页

作者：林欢高宏雷王晓艳高玉龙宋修庆李术强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国科学院生物物理研究所北京100101 哈尔滨工业大学海洋学院山东威海264209

利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Westernblot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达出约54ku和24ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体。

关键词：鸡贫血病毒 vp1基因 vp2基因真核表达毕赤酵母

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鸡传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95I株病毒攻击的免疫保护

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中国兽医杂志 2008年第7期44卷 11-13页

作者：王云峰石星明王玫刘胜旺童光志何来贺笋崔红玉李一经东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管炎病毒异源毒株LTJ95I攻击。结果显示,疫苗接种后1周,免疫鸡血清抗体很快产生,外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百... 详细信息

rFPV-IFNγS1是一株共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒,将其接种SPF鸡3周后,用传染性支气管炎病毒异源毒株LTJ95I攻击。结果显示,疫苗接种后1周,免疫鸡血清抗体很快产生,外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分含量略高于非免疫对照组,但这种差异并不显著。攻毒后保护率结果显示,该疫苗不能对异源病毒提供坚强保护,攻毒后免疫组的发病率为60%(6/10),病死率为30%(3/10),非免疫对照组的发病率和病死率分别为73%(8/11)和27%(3/11);两组的病理损伤程度差异不明显,在排毒时间上也没有明显变化。

关键词：传染性支气管炎重组鸡痘病毒 γ干扰素 S1蛋白

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分子佐剂C3d增强猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的研究

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 814-820页

作者：李国新郑宝亮金媛媛田志军周艳君童光志东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

为了探讨分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒p-tmHA和融合表达3拷贝鼠C3d与HA的质粒p-sHA/mC3d3。3种质粒与空载体pCAGGS分... 详细信息

为了探讨分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒p-tmHA和融合表达3拷贝鼠C3d与HA的质粒p-sHA/mC3d3。3种质粒与空载体pCAGGS分别免疫BALB/c小鼠后,采用ELISA和HI试验检测抗体水平。结果显示,免疫后第8周,p-sHA组与p-tmHA组的抗体水平没有明显差别,而p-sHA/mC3d3免疫组的抗体水平显著高于这两组,说明分子佐剂C3d增强了抗体应答水平。淋巴细胞增殖试验及细胞因子检测实验结果显示,免疫后第8周,p-tmHA诱导了更强的淋巴细胞增殖反应和更高水平的IFN-,而p-sHA/mC3d3诱导了更高水平的IL-4,说明HA表达形式的变化影响了免疫反应的类型,C3d与HA融合后通过诱导IL-4的产生而使免疫反应倾向于Th2型。总之,本研究证实3拷贝分子佐剂C3d与分泌型HA融合后显著提高了DNA疫苗诱导的抗体水平。这提示质粒p-sHA/mC3d3免疫可能对接种动物提供高水平的保护,有希望成为抗猪流感病毒的候选疫苗。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗分子佐剂 C3d

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PRRSV国内流行毒株的分离鉴定及结构基因的分析

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动物医学进展 2008年第6期29卷 43-50页

作者：马平石文达刘永刚蔡雪辉王洪峰王淑杰李成君张琪中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从国内发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病料中,分离到8株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。病毒分离培养表明,JS1-JS5第1代即可适应Marc-145细胞。GD1-GD3经Marc-145细胞3次-4次传代后出现明显的细胞病变。间接免疫荧光试验... 详细信息

从国内发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病料中,分离到8株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。病毒分离培养表明,JS1-JS5第1代即可适应Marc-145细胞。GD1-GD3经Marc-145细胞3次-4次传代后出现明显的细胞病变。间接免疫荧光试验表明,8个分离毒株与抗PRRSV抗体均可出现特异性的胞浆荧光。它们对氯仿、甲醛、酸和碱均敏感。5-溴-2′-脱氧尿核苷对其无抑制作用。参照GenBank中已发表的PRRSV的序列设计了两对特异性引物,分别对所分离毒株进行部分nsp2基因和结构基因的扩增。发现JS1-JS5nsp2基因发生了部分缺失。选择JS1、JS5、GD3进行nsp2基因和结构基因的扩增和测序。序列分析结果表明,JS1、JS5和2006年以后国内分离到的高致病性PRRSV高度同源。GD3的Nsp2基因虽然没有发生第534位-第562位氨基酸的缺失,但与2006年以后分离的毒株一样,发生了第482位氨基酸的缺失。通过对3个分离毒株与其他国内分离毒株的结构基因序列进行系统进化分析发现,我国的PRRSV流行毒株可大致划分为两个亚型,JS1、JS5、GD3、CH-1a、JXA1、HUN4、SHH等属于一个亚型,BJ-4、CC-1属于另一个亚型。亚型间核苷酸序列同源性为91.2%-91.8%。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株分离鉴定结构基因

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猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第3期30卷 190-193页

作者：冯力孙东波陈建飞时洪艳吴波平崔晓辰吕茂杰刘娣童光志黑龙江省农业科学院博士后工作站黑龙江哈尔滨150086 福建省动物疫病预防控制中心福建福州350003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

以纯化的重组PEDV N蛋白为抗原免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了7株稳定分泌抗重组N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为9C1、7H8、3C10、6C4、10G9、2C10和4B3。7株杂交瘤细胞诱导小鼠产生的腹水抗体... 详细信息

以纯化的重组PEDV N蛋白为抗原免疫7周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了7株稳定分泌抗重组N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为9C1、7H8、3C10、6C4、10G9、2C10和4B3。7株杂交瘤细胞诱导小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶3 200、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800、1∶25 600、1∶64 00和1∶12 800。9C1、7H8、3C10、6C4、10G9和2C10免疫球蛋白类型均为IgM,轻链均为κ链;4B3免疫球蛋白类型为IgG2a,轻链为κ链。Western blot试验结果显示,这7株单克隆抗体均能与天然的PEDV N蛋白发生反应。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白单克隆抗体

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Fowlicidins及其功能研究

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动物医学进展 2008年第3期29卷 54-59页

作者：史春林石星明王云峰王玫孙妍童光志东北农业大学研究生院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

Fowlicidins是鸡体内的一类新型的Cathelicidin抗菌肽,其前体分子的氨基端含有一个高度保守的cathelin前片段,而羧基端的氨基酸序列具有特异性。它们有广谱的抗菌活性,具有避免抗菌剂耐药性的潜能,是理想的候选抗菌药物。

关键词： Cathelicidin Fowlicidin 抗菌活性重组表达

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新城疫及其检测方法研究进展

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畜牧兽医科技信息 2008年第10期24卷 39-41页

作者：刘怀然孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，被国际动物卫生组织（OIE）列为危害禽类的两种A类传染病之一，因此也是SPF禽类病毒学检测的一个重要指标。自1926年首次发现新... 详细信息

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，被国际动物卫生组织（OIE）列为危害禽类的两种A类传染病之一，因此也是SPF禽类病毒学检测的一个重要指标。自1926年首次发现新城疫至今，NDV在其宿主范围、致病性、基因型、毒力等方面不断发生变化，给NDV的检测增加了难度，

关键词：新城疫病毒病毒学检测国际动物卫生组织宿主范围发生变化传染病 NDV 禽类

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