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2007年中国部分地区猪圆环病毒2型分子流行病学分析

中国农业科学 2009年第8期42卷 2949-2957页

作者：张建武庄金山刘长龙王小敏袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

【目的】对采集自上海、江西、山东、江苏、河南和湖南等省的257份进行了PCV2的检测,确定中国PCV2感染情况及分子特征。【目的】设计一对针对PCV2ORF2的引物,利用PCR对其进行PCV2基因组的检测,对PCV2阳性的样品,进行了ORF2的克隆、序列... 详细信息

【目的】对采集自上海、江西、山东、江苏、河南和湖南等省的257份进行了PCV2的检测,确定中国PCV2感染情况及分子特征。【目的】设计一对针对PCV2ORF2的引物,利用PCR对其进行PCV2基因组的检测,对PCV2阳性的样品,进行了ORF2的克隆、序列测定和分析。【结果】结果显示PCV2阳性率为24.51%(63/257),并能从健康猪群中检测的阳性;各PCV2分离株间ORF2核苷酸序列同源性为84.4%～100%,氨基酸同源性为82.5%～100%,与所属群的不同而不同。【结论】中国有2个群的PCV2毒株在流行,以PCV2b群为主(70.97%,22/31),但也有PCV2a群毒株(29.03%,9/31)的流行,同时PCV2流行的基因型没有明显的地域间差异。部分毒株符合高致病性PCV2的特征,暗示中国已存在高致病性PCV2的流行。

关键词：猪圆环病毒2型开放阅读框架2 基因型

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

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中国兽医学报 2009年第2期29卷 139-142页

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中,建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12 704个核苷酸,与EAVBucyrus分离株的同源性为99.1%;全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。

关键词：马动脉炎病毒全长cDNA克隆感染性克隆

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我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：翟少伦龙进学韦祖樟张建武岳城禤雄标袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/猪传染病防治研究室新疆农业大学动物医学学院广西兽医研究所

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战.本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况.我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进... 详细信息

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战.本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况.我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进行检测,对差异PCR方法扩增出来的部分PCV2a和PCV2b目的序列进行克隆、测序及分析.通过对70份临床病料的检测,并配合PCR产物测序的验证,结果发现该方法易操作,特异性高,可重复性好,可以鉴别出PCV2a与PCV2b,其中PCV2a株25份(25/70),PCV2b株23份(23/70),PCV2a与PCV2b共感染株22份(22/70),参照PCV2a或PCV2b的标准毒株,序列比对显示,我国的PCV2型毒株大多发生了很大的变异,包括碱基的变化及同源重组.本研究确定了我国猪场存在PCV2a与PCV2b的共感染情况,共感染率为31.4%.共感染机制及共感染是否会促进病毒的重组,是否会加重猪体的病情还需要进一步的研究.

关键词： PCV2a PCV2b 差异PCR 共感染同源重组

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我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

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中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：翟少伦龙进学韦祖樟张建武岳城禤雄标袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室新疆农业大学动物医学学院广西兽医研究所

引言/目的:猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症的主要病原,猪皮炎和肾病综合征,新生仔猪先天性颤抖病也与其有关。PCV2按照基因组大小被分为两个基因亚型,即PCV2a(1768bp)和PCV2b(1767bp)。近年来我国猪场中猪圆环病毒2型... 详细信息

引言/目的:猪圆环病毒2型(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症的主要病原,猪皮炎和肾病综合征,新生仔猪先天性颤抖病也与其有关。PCV2按照基因组大小被分为两个基因亚型,即PCV2a(1768bp)和PCV2b(1767bp)。近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战。本研究主要是为了调查我国猪2型圆环病毒两个基因亚型间(PCV2a和PCV2b)的共感染情况和分析共感染是否发生同源重组现象,为以后更好地了解PCV2的分子流行及进化奠定坚实的基础。材料方法:根据PCV2a和PCV2b的ORF2中的特征性标记基序设计两对引物,建立一种能鉴别PCV2a和PCV2b的差异PCR方法,对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的70份病料进行检测,对扩增出来的部分PCV2a和PCV2b目的片段进行克隆、测序,并利用DNASTAR软件比对得到的序列和使用重组检测软件(RDP3)检测PCV2a和PCV2b重组的发生。结果、讨论:通过对70份PCV2阳性的临床病料检测并配合PCR产物测序的验证,结果发现该方法易操作,敏感性高(达fg/μL),特异性高,可重复性好,可以鉴别出PCV2a与PCV2b,其中PCV2a单纯感染25份(25/70),PCV2b单纯感染23份(23/70),PCV2a与PCV2b共感染22份(22/70),参照PCV2a或PCV2b的标准毒株,序列比对显示,我国PCV2型毒株大多发生了很大的变异,包括碱基的变化及同源重组。同源重组没有检测到在同一份样品中发生,但检测到JX0917-2A株、JX0917-2A株及SD0805-2A株是GX0841-2A株与ZJ0882-2B株重组的结果。本研究首次确定了我国猪场猪只存在PCV2a与PCV2b的共感染情况,共感染率为31.4%。共感染机制及共感染是否会促进病毒的重组,是否会加重猪体的病情还需要进一步的研究。

关键词： PCV2a PCV2b 差异PCR 共感染同源重组

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我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：翟少伦龙进学韦祖樟张建武岳城禤雄标袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/猪传染病防治研究室上海 200241 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐 830052 中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/猪传染病防治研究室上海 200241 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐 830052 广西兽医研究所广西南宁 530001

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战,本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况。我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进... 详细信息

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战,本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况。我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进行检测,对差异PCR方法扩增出来的部分PCV2a和PCV2b目的序列进行克隆、测序及分析。通过对70份临床病料的检测,并配合PCR产物测序的验证,结果发现该方法易操作,特异性高,可重复性好,可以鉴别出PCV2a与PCV2b,其中PCV2a株25份(25/70),PCV2b株23份(23/70),PCV2a与PCV2b共感染株22份(22/70),参照PCV2a或PCV2b的标准毒株,序列比对显示,我国的PCV2型毒株大多发生了很大的变异,包括碱基的变化及同源重组。本研究确定了我国猪场存在PCV2a与PCV2b的共感染情况,共感染率为31.4％,共感染机制及共感染是否会促进病毒的重组,是否会加重猪体的病情还需要进一步的研究。

关键词：猪2型圆环病毒差异PCR法共感染机制同源重组病料检测

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PRRSV全长感染性cDNA克隆的构建：非结构蛋白和结构蛋白之间编码区的分离

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中国科学（C辑） 2008年第1期38卷 66-73页

作者：袁世山韦祖樟中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是近两年来流行于我国大部分省份的"猪高热综合征"的主要病原体.该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变.如何设计有效的... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是近两年来流行于我国大部分省份的"猪高热综合征"的主要病原体.该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变.如何设计有效的疫苗来防治持续多变的流行变异株是研究者所关注的焦点.本研究中我们构建了Ⅱ型PRRSV弱毒株的感染性cDNA克隆,并对编码结构蛋白的ORF1和编码结构蛋白的ORF2之间插入几个酶切位点.通过RT-PCR和DNA测序以及分子克隆方法,获得了细胞致弱株(APRRS)的全长cDNA克隆.APRRSV基因组RNA为15521个核苷酸(不包括poly(A)尾).与PRRSV Nsp株和疫苗株的相似性均为99.7%.根据测序结果,利用基因组上的酶切位点将全长PRRSV cDNA克隆到pBlueScript载体中,在病毒5′末端引入T7启动子序列.为了区分重组病毒和亲本病毒,在ORF5编码区引人MluⅠ酶切位点.将最初构建的全长cDNA和带有MluⅠ酶切位点的cDNA分别体外转录成RNA后转染MA-104,均能够观察到典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE).拯救的重组病毒与亲本病毒有着相同的病毒学特性.通过突变PCR的方法将编码非结构蛋白基因ORF1和编码结构蛋白基因ORF2-7之间的编码区分离,从而构建了克隆***体外转录产物具有感染性,而且拯救的病毒与亲本病毒具有相同的病毒学特性.本研究为构建嵌合病毒作为疫苗候选株以此对遗传多变的PRRSV毒株提供有效的交叉保护提供了宝贵的工具,同时也为建立PRRSV为基因表达载体来构建针对其他重要的猪源疾病重组疫苗搭建了一个很好的平台.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 反向遗传系统编码区非结构蛋白

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猪繁殖与呼吸综合症病毒分子生物学研究进展

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微生物学通报 2008年第3期35卷 408-413页

作者：韦祖樟孙志袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合症病毒是引起猪繁殖与呼吸综合症的病原体,本文对PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白的及其功能的分子生物学研究进展做了简要综述。

关键词：猪繁殖与呼吸病毒分子生物学动脉炎病毒

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中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究

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中国农业科学 2008年第6期41卷 1822-1831页

作者：张建武庄金山袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PH... 详细信息

【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)以及瘟病毒的检测,对PRRSV阳性的进行ORF5的序列测定并分析。【结果】检测到16份PRRSV北美型阳性样品,PCV2阳性样品2份,其它病毒均未检到。PRRSV ORF5序列分析表明笔者分离到的PRRSV株可分为2个群。【结论】(1)PRRSV与2006年肆虐中国养猪业的猪病流行有直接关系;(2)2006年PRRSV流行株主要是以JX0612株为代表,但不同遗传特征的PRRSV也在流行。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 分子流行病学调查遗传进化分析

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猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析

猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：郑浩余丹丹孙志高飞袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫重点实验室

将猪源JEV SH0601株基因组RNA分五段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中,测定了全长cDNA序列,并根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。cDNA序列分析结果表明:SH0601株基因组全长10977nt,与GenBank中的Beijing-1、P3、SA14和SA14-14-2株基因组全长相比,在3'NTR的10701nt处多一碱基"G",与上述四株病毒的全长核苷酸的同源率都达97.2%以上,而与国外猪源分离株KV1899和JEV/sw/Mie/41/2002全长核苷酸的同源率仅达88.7%,但SH0601株与六株病毒的全长氨基酸同源率均达97.O%以上。以E蛋白基因序列对SH0601作进化分析,该分离株属基因型Ⅲ型。

关键词：猪乙型脑炎病毒病毒基因组基因型

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中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究

中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：张建武庄金山袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

目的对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。方法利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、日... 详细信息

目的对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。方法利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)以及瘟病毒的检测,对PRRSV阳性的进行ORF5的序列测定并分析。结果检测到16份PRRSV北美型阳性样品,PcV2阳性样品2份,其它病毒均未检到。PRRSV ORF5序列分析表明笔者分离到的PRRSV株可分为2个群。结论(1)PRRSV与2006年肆虐中国养猪业的猪病流行有直接关系;(2)2006年PRRSV流行株主要是以JX0612株为代表,但不同遗传特征的PRRSV也在流行。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 分子流行病学调查遗传进化分析

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