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将猪源JEV SH0601株基因组RNA分5段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中，测定了全长cDNA序列，并根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。cDNA序列分析结果表明：SH0601株基因组全长10977nt，与GenBank中的Bei... 详细信息

将猪源JEV SH0601株基因组RNA分5段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中，测定了全长cDNA序列，并根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。cDNA序列分析结果表明：SH0601株基因组全长10977nt，与GenBank中的Beijing-1、P3、SA14和SA14-14-2株基因组全长相比，在3’NTR的10701 nt处多一碱基“G”，与上述四株病毒的全长核苷酸的同源率都达97.2％以上，而与国外猪源分离株—KV1899和JEV/sw/Mie/41/2002全长核苷酸的同源率仅达88.7％，但SH0601株与6株病毒的全长氨基酸同源率均达97.0％以上。以E蛋白基因序列对SH0601作进化分析，该分离株属基因型Ⅲ型。

关键词：病毒基因组猪乙型脑炎病毒序列分析

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猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列测定与分析

猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列测定与分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：郑浩余丹丹孙志高飞袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫重点实验室

将猪源JEV SH0601株基因组RNA分五段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中,测定了全长cDNA序列,并根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。cDNA序列分析结果表明:SH0601株基因组全长10977nt,与GenBank中的Beijing-1、P3、SA14和SA14-14-2株基因组全长相比,在3′NTR的10701nt处多一碱基"G",与上述四株病毒的全长核苷酸的同源率都达97.2%以上,而与国外猪源分离株KV1899和JEV/sw/Mie/41/2002全长核苷酸的同源率仅达88.7%,但SH0601株与六株病毒的全长氨基酸同源率均达97.0%以上。以E蛋白基因序列对SH0601作进化分析,该分离株属基因型Ⅲ型。

关键词：乙型脑炎病毒 JEV SH0601 基因组猪源分离株序列测定与分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：吕健袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传操作,本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增,将得到的片段克隆到... 详细信息

近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传操作,本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增,将得到的片段克隆到pBlueScript II SK(+)载体中,并且利用相关的重叠区酶切位点将其构建成为全长克隆。在扩增5'端时,运用5'RACE获得了基因组5'最末端序列,在亚克隆入pBlueScript IISK(+)并且在5'端上游引入T7启动子序列。选取一个克隆在3'端ORF6下游引入Mlu I位点,以期作为感染性分子克隆的筛选标志。最终获得了含有PRRSV JX0612株基因组全长cDNA的重组质粒pJX0612和含有分子标志Mlu I的基因组全长cDNA克隆pJX0612-M。转染MARC-145细胞后得到拯救病毒,而且分子标志稳定存在。本研究中构建的基因组全长感染性cDNA克隆为探寻病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：感染性克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒 PRRSV JX0612 细胞转染全长克隆基因组序列反向遗传操作无名高热

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列,设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片断PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntII-TOPO中,建立了初级cDNA克隆。在扩增5'末端时,引入NotI酶切位点和T3启动子序列;在3'末段PolyA尾引入XhoI酶切位点,后者用于cDNA模板线性化。将扩增片断在PCR BluntII-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescript II KS(+)中,获得了EAV全长cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12704个核苷酸,与EAV Bucyrus分离株的同源性为99.1%,全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应的导致编码区内34个氨基酸改变。本试验构建的基因组全长cDNA克隆为进一步获取具有感染性的EAV分子克隆并研究动脉炎病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：基因组 RNA 马动脉炎病毒动脉炎病毒属

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

本研究旨在建立马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)的反向遗传操作系统。根据 GeneBank 相关 EAV 基因序列,设计合成特异引物,应用 RT-PCR 技术, 扩增了 EAV Bucyrus 株6段首尾重叠的全基因组 cDNA 片断。将扩增的各个 cDNA 重

关键词：马动脉炎病毒酶切位点基因组

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海 200232

根据马动脉炎病毒(EAV)Bueyrus株全基因组序列，设计并合成EAV特异引物，进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片断PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中，... 详细信息

根据马动脉炎病毒(EAV)Bueyrus株全基因组序列，设计并合成EAV特异引物，进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片断PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中，建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5’末端时，引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3’末段：PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点，后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片断在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接，最后亚克隆到质粒pBluescript Ⅱ KS(+)中，获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明：该毒株基因组全长为12704个核苷酸，与EAV Bucyrus分离株的同源性为99.1％;全长基因组中有104个核苷酸发生突变，相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。本试验构建的基因组全长cDNA克隆为进一步获取具有感染性的EAV分子克隆并研究动脉炎病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒感染性克隆基因组序列

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