检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2010年第11期41卷 1428-1434页

作者：陆嘉琦高飞刘萍袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR将5′非翻译区(5′UTR)中部分一级序列进行系列突变,以改变5′UTR二级结构中的一保守茎部结构,从而解析PRRSV5′UTR中结构与功能的关系。通过DNA转... 详细信息

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR将5′非翻译区(5′UTR)中部分一级序列进行系列突变,以改变5′UTR二级结构中的一保守茎部结构,从而解析PRRSV5′UTR中结构与功能的关系。通过DNA转染MARC-145细胞观察突变体克隆的感染性,并通过免疫荧光及Northern blot来研究拯救后突变病毒的复制、转录特性,以及通过空斑形态学分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV5′UTR中保守茎部结构的二级结构与病毒的拯救无直接关系,但其一级核苷酸序列却是PRRSV病毒复制所必需的,作者还找到直接调控病毒复制的核心位点。由此证实了5′UTR中调控PRRSV复制过程的必需序列,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 5′UTR 高级结构与功能病毒复制基因表达调控

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欧洲型PRRSV弱毒株全长基因组cDNA克隆的构建与分析

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 658-664页

作者：庄金山袁世山张建武中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

为了获得欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,通过RT-PCR技术扩增了AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择合适的酶切位点将各个亚克隆产物逐段克... 详细信息

为了获得欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,通过RT-PCR技术扩增了AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择合适的酶切位点将各个亚克隆产物逐段克隆入改造过的pBluescriptⅡKS(+)载体中,从而获得了病毒的全长基因组cDNA克隆。测序结果表明,该弱毒株基因组序列全长为15 098 bp(不包括poly(A)尾)。同源性比较结果显示,Ningbo42株ORF7基因(EF473137)、FJ0603株Nsp2基因(EF592535)与该弱毒株的相应基因之间的同源性分别为100%和98%。这些数据暗示,国内欧洲型PRRSV Ningbo42株和FJ0603株的存在与欧洲型PRRSV弱毒疫苗株AMERVAC-PRRS/A3密切相关。测序及酶切鉴定结果表明,欧洲型PRRSV全长基因组cDNA克隆已构建成功。

关键词：欧洲型PRRSV 全长基因组cDNA克隆序列分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5/6和ORF6/7重叠区的分离(人工)改造病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 81-85页

作者：余丹丹孙志王金勇袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/动物传染病研究室/农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结... 详细信息

为了研究重叠序列在病毒繁殖周期中所起的作用以及更好地操作感染性克隆,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF5/6和ORF6/7)重叠区域分离并插入酶切位点,成功构建两个突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明:(1)两个全长质粒均能够进行病毒拯救,并产生明显细胞病变;(2)突变病毒具遗传稳定性;(3)病毒空斑形态及生长曲线与亲本毒株近似。表明PRRSVORF间重叠碱基的安排方式对病毒的感染性是非必需的,获得的两株突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗、研究PRRSV各编码蛋白功能奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重叠序列病毒感染性反向遗传操作

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

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中国兽医学报 2009年第2期29卷 139-142页

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中,建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12 704个核苷酸,与EAVBucyrus分离株的同源性为99.1%;全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。

关键词：马动脉炎病毒全长cDNA克隆感染性克隆

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猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区前导转录调控序列及其侧翼序列的结构与功能解析

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畜牧与兽医 2011年第11期43卷 1-6页

作者：陆嘉琦高飞刘萍蔺涛袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的... 详细信息

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平。将突变DNA克隆转染入BHK-21细胞后利用免疫荧光及RT-PCR试验来研究拯救后突变病毒的转录、翻译特性,及通过空斑形态学及病毒生长曲线分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV 5'UTR中该高级调控元件的顶端环结构为病毒复制所必需,其只可耐受2个核苷酸的突变;同时发现该调控元件中一保守的茎结构为病毒复制非必需。由此证实了PRRSV 5'UTR中调控病毒复制过程的必需高级结构,为进一步解析PRRSV复制调控元件奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 5’非编码区前导转录调控序列病毒复制基因表达调控

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单股正链RNA病毒基因组5′非翻译区的结构与功能研究进展

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畜牧与兽医 2010年第11期42卷 99-103页

单股正链RNA病毒是众多人畜共患病及动植物传染病的病原,其种类繁多,对人畜健康和农业经济生产影响重大。该类病毒基因组5′非翻译区(5′UTR)一级序列及各种高级结构在病毒的复制、转录、翻译过程中发挥重要调控作用,本文对一些代表种... 详细信息

单股正链RNA病毒是众多人畜共患病及动植物传染病的病原,其种类繁多,对人畜健康和农业经济生产影响重大。该类病毒基因组5′非翻译区(5′UTR)一级序列及各种高级结构在病毒的复制、转录、翻译过程中发挥重要调控作用,本文对一些代表种属单股正链RNA病毒的5′UTR进行介绍,且就其结构与功能的一般研究方法、主要进展和存在的问题进行了探讨。

关键词：单股正链RNA病毒 5′UTR 高级结构与功能病毒复制基因表达调控

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PRRSV感染性克隆5′非翻译区序列缺失突变分析

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中国兽医学报 2009年第1期29卷 25-29页

作者：高飞姚火春王金勇余丹丹袁世山中国农业科学院上海兽医研究所／中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

在PRRSV感染性克隆pCBC2的基础上,通过突变PCR获得了病毒基因组5′UTR系列缺失的全长突变体克隆:pCBCM1、pCBCM3、pCBCM5、pCBCM7、pCBCM9、pCBCM45、pCBCM69、pCBCM100,随后将上述突变体体外转录成RNA之后转染MARC-145细胞,进行病毒感染性、复制和转录分析,以鉴定特定的缺失区的调控功能。结果显示,病毒5′UTR起始的第1个碱基是保持病毒感染性非必需的核苷酸;前45个碱基对病毒基因组的复制是非必需的。Northern-Blot结果显示pCBCM1亚基因组mRNA可以进行高效率的转录,而其余突变体的亚基因组转录受到严重抑制。由此证明,PRRSV 5′UTR的完整性对病毒意义重大,碱基的少量以及大部分缺失会对病毒产生极大的影响。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征感染性克隆体外转录缺失突变反向遗传系统

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单股正链RNA病毒3'非编码区的结构与功能研究进展

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畜牧与兽医 2011年第10期43卷 98-102页

作者：刘萍刘长龙陆嘉琦高飞尹杨姚火春袁世山南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病研究室/农业部动物寄生虫病重点实验室上海200241

单股正链RNA病毒基因组中的3'非编码区(3'UTR)可以形成二级或者高级结构,这些结构对维持病毒RNA的稳定性以及病毒的复制调控具有至关重要的作用。它不仅可以单独发挥作用,也可以与RNA或者蛋白相互作用调控病毒的复制、转录、翻... 详细信息

单股正链RNA病毒基因组中的3'非编码区(3'UTR)可以形成二级或者高级结构,这些结构对维持病毒RNA的稳定性以及病毒的复制调控具有至关重要的作用。它不仅可以单独发挥作用,也可以与RNA或者蛋白相互作用调控病毒的复制、转录、翻译和包装等各个过程。本文对RNA结构和功能研究的一般方法,以及一些单股正链RNA病毒代表种属的3'UTR的结构和功能进行了综述,并且就研究前景和一些存在的问题进行了探讨。

关键词：单股正链RNA病毒 3′UTR 结构与功能病毒复制

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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性cDNA克隆的构建

欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性cDNA克隆的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：庄金山张建武袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

为了获得欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)弱毒疫苗AMERVAC-PRRS/A3株的病毒基因组感染性cDNA克隆,为研究深入欧洲型PRRSV提供工具,通过RT-PCR技术扩增了欧洲型PRRSV活疫苗AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,并测序。根据测序结果,选择合适的酶切位点将各个亚克隆产物逐段克隆入改造过的pBluescriptⅡKS(+)载体中,从而获得了病毒基因组全长cDNA克隆,并使其置于T7启动子的控制之下,同时在病毒基因组cDNA的ORF7和3'UTR之间引入了标记位点。通过体外转录合成病毒基因组RNA转染Marc-145细胞,该病毒基因组全长cDNA克隆能够从Marc-145细胞中成功拯救出病毒,拯救病毒的生物学特征与其亲本病毒基本一致。结果表明,本试验成功构建了欧洲型PRRSV感染性cDNA克隆。

关键词：欧洲型PRRSV 全长基因组cDNA克隆感染性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白编码基因重叠区的分离

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白编码基因重叠区的分离

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：余丹丹孙志王金勇袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

通过将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF1/2、ORF4/5、ORF5/6、ORF6/7和ORF7/3'UTR)重叠区域拉开并插入酶切位点等反向遗传操作,构建了一系列突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明:1)各突变全... 详细信息

通过将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆ORF间(ORF1/2、ORF4/5、ORF5/6、ORF6/7和ORF7/3'UTR)重叠区域拉开并插入酶切位点等反向遗传操作,构建了一系列突变的全长质粒,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明:1)各突变全长质粒均能够进行病毒拯救,并产生明显细胞病变;2)突变病毒具遗传稳定性;3)病毒空斑形态及生长曲线与亲本毒株近似。表明PRRSV ORF间重叠碱基的安排方式对病毒的感染性是非必需的,获得的诸多突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗、研究PRRSV各编码蛋白功能奠定了基础。

关键词： ORF 基因组感染性克隆病毒结构蛋白酶切位点反向遗传操作 PRRSV 猪繁殖与呼吸综合征编码基因

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