检索结果-内蒙古大学图书馆

复旦学报（自然科学版） 2024年第3期63卷 405-414页

作者：谢馨锐赵其平朱顺海郭慧琳王丽慧于钰董辉韩红玉刘伟湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200234

鸡球虫病是一种由艾美耳属原生动物寄生虫引起的肠道疾病,是影响家禽业的最重要疾病之一。目前,球虫病的控制主要依赖于抗球虫药物的使用,但由于药物的长期广泛使用导致了球虫的严重耐药性。为研究其耐药性机制,本实验室前期对柔嫩艾美... 详细信息

鸡球虫病是一种由艾美耳属原生动物寄生虫引起的肠道疾病,是影响家禽业的最重要疾病之一。目前,球虫病的控制主要依赖于抗球虫药物的使用,但由于药物的长期广泛使用导致了球虫的严重耐药性。为研究其耐药性机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株、盐霉素耐药株进行了转录组测序分析,发现与敏感株相比,柔嫩艾美耳球虫微管蛋白β链(Et TBC)仅在地克珠利耐药株高表达。本研究在此基础上,克隆、表达了EtTBC,并初步分析了其功能及与地克珠利的关系;以柔嫩艾美耳球虫敏感株cDNA为模板成功克隆了EtTBC基因,构建了原核表达重组质粒pET28a-Et TBC,并成功诱导表达了重组蛋白r Et TBC;利用qPCR对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段以及不同虫株(耐药株、敏感株和田间耐药株)的mRNA转录水平进行了分析,结果显示,该基因的转录水平在敏感株未孢子化卵囊阶段最高,且其mRNA转录水平仅在地克珠利耐药株上调;间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子除折光体外的细胞质和表面,第二代裂殖子的细胞质和表面。

关键词：柔嫩艾美耳球虫微管蛋白β链耐药性

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猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及其E基因分析

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中国兽医科学 2009年第6期39卷 476-482页

作者：郑浩张建武袁世山中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室农业部动物寄生虫重点实验室上海200232

采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测猪流产胎儿病料中的乙型脑炎病毒(JEV),并对阳性病料做病毒分离与纯化。通过空斑减数试验测定了分离株和JEV P3株的中和指数。对分离株的pr M-E基因进行克隆并测序,将推导的E蛋白序列与GenBan... 详细信息

采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测猪流产胎儿病料中的乙型脑炎病毒(JEV),并对阳性病料做病毒分离与纯化。通过空斑减数试验测定了分离株和JEV P3株的中和指数。对分离株的pr M-E基因进行克隆并测序,将推导的E蛋白序列与GenBank中登录的JEV毒株的E蛋白序列做比较分析。以E基因序列为基础,绘制进化树。结果显示,在检测的9份病料中有3份呈JEV阳性,并分离出1株JEV,命名为HEN0701。经测定,P3株的中和指数为12,分离株的中和指数为2。pr M与E基因的序列分析表明,分离株与P3和Beijing-1株的同源性较低,最高仅为87.7%;而与JEV/sw/Mie/40/2004、KV1899、SH17 M-07和YN79-Bao83株的同源性较高,最低为96.6%。进化分析表明,分离株属基因Ⅰ型。E蛋白序列分析结果显示,分离株与基因Ⅰ型JEV的E蛋白序列高度同源,且与SH-53、JEV/sw/Mie/40/2004和VN22/Viet Nam/2002/swine blood株的E蛋白序列完全相同,而与基因Ⅲ型JEV的E蛋白序列存在4个共同的氨基酸变异位点。

关键词：乙型脑炎病毒 E基因基因Ⅰ型

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单核苷酸多态性在寄生虫上的应用

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中国动物传染病学报 2017年第6期25卷 74-82页

作者：陈婷韩红玉朱顺海董辉赵其平黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)作为第三代分子标记,由于其检测方法多样,具有数量多、二态性和遗传稳定性高等众多优势,在人类和动植物领域均有广泛的应用,有着很高的研究价值和应用前景。本文从SNP分子标记简介... 详细信息

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)作为第三代分子标记,由于其检测方法多样,具有数量多、二态性和遗传稳定性高等众多优势,在人类和动植物领域均有广泛的应用,有着很高的研究价值和应用前景。本文从SNP分子标记简介出发,简述了SNP在生命科学领域的应用概况,对SNP在寄生原虫、蠕虫、节肢动物上的研究进展进行综述,涉及寄生虫的遗传发育、种群进化、致病性及耐药性等方面,为了解SNP在寄生虫领域的应用现状和开展寄生虫的相关研究提供了基础资料。

关键词：单核苷酸多态性寄生虫基因组

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磺胺氯吡嗪钠复方对小鼠体内抗弓形虫疗效的观察

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中国动物传染病学报 2017年第3期25卷 54-60页

作者：程军霞蒋蔚陈永军薛俊欣韩阳瑞王权中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为进一步挖掘磺胺氯吡嗪钠的抗弓形虫疗效,本研究以磺胺嘧啶钠作为对照,观察磺胺氯吡嗪钠(sulfachloropyrazine sodium,SPZ)、黄芩苷、乳酸TMP、乙胺嘧啶和甘草单独使用时的体内外抗弓形虫效果,然后以SPZ-甘草-黄芩苷3种药物的复方制剂... 详细信息

为进一步挖掘磺胺氯吡嗪钠的抗弓形虫疗效,本研究以磺胺嘧啶钠作为对照,观察磺胺氯吡嗪钠(sulfachloropyrazine sodium,SPZ)、黄芩苷、乳酸TMP、乙胺嘧啶和甘草单独使用时的体内外抗弓形虫效果,然后以SPZ-甘草-黄芩苷3种药物的复方制剂作为复方对照组,用叶酸合成双抑制的SPZ-乳酸TMP/乙胺嘧啶复方制剂对人工感染弓形虫RH株的KM小鼠进行体内治疗试验。体外试验表明,这6种药物均可较好地抑制弓形虫增殖;小鼠体内试验表明,单独使用SPZ(250 mg/kg、200 mg/kg)可保护部分小鼠存活(存活率分别为50%和25%),其他5种药物可不同程度地延长小鼠存活时间,但均不能避免小鼠死亡。在复方给药组(SPZ浓度为200 mg/kg),使用SPZ-乳酸TMP/乙胺嘧啶无明显的协同作用,使用SPZ-甘草-黄芩苷时疗效得到明显提高(小鼠存活率达到40%)。结果启示SPZ特别的治疗效果除了与其具有的通过干扰虫体叶酸代谢来抑制虫体繁殖的作用有关外,可能还与其他机制(如药物作用影响弓形虫调节宿主的免疫功能)有关。

关键词：弓形虫病磺胺氯吡嗪钠体内试验体外试验协同作用

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四种钙信号蛋白及其在寄生虫学上的初步研究

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中国动物传染病学报 2015年第2期23卷 78-86页

作者：王自文韩红玉黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

不同种类的寄生虫入侵宿主和入侵后在宿主体内生存的机制非常复杂,但是影响这两个过程的主要因素目前已逐渐被揭示。Ca2+是寄生虫体内的一种重要的金属离子,它影响着寄生虫的许多生理生化活动,如运动、信号转导、渗透压的维持等。而Ca2... 详细信息

不同种类的寄生虫入侵宿主和入侵后在宿主体内生存的机制非常复杂,但是影响这两个过程的主要因素目前已逐渐被揭示。Ca2+是寄生虫体内的一种重要的金属离子,它影响着寄生虫的许多生理生化活动,如运动、信号转导、渗透压的维持等。而Ca2+信号蛋白则是Ca2+能够发挥重要作用的直接承担者,钙离子信号蛋白是直接可以与Ca2+结合的蛋白质,它被Ca2+激活以后又可以与下游和他具有相互作用的蛋白质结合,从而使寄生虫发挥相应的生理生化作用。对能够与Ca2+信号蛋白结合的蛋白进行研究,有助于研制抗寄生虫的新药物和生物制剂,因为它们可能是一种存在于寄生虫体内潜在的新药物受体和靶标,而只有Ca2+信号蛋白被Ca2+活化以后才可以对这一互作蛋白展开深入的研究。本文综述了在寄生虫体内存在的4种Ca2+信号蛋白的重要性质和作用机制,对开展寄生虫Ca2+信号蛋白及其下游的互作蛋白的研究提供了一个比较基础的材料。

关键词： Ca2+ 信号蛋白钙调素钙网蛋白钙依赖蛋白激酶膜联蛋白

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日本血吸虫小RNA let-7对虫体生殖发育影响的研究

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中国预防兽医学报 2017年第5期39卷 384-387页

作者：冯金涛韩愉乔洪宾张欣李浩陆珂林矫矫刘金明金亚美中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为检测日本血吸虫小RNA let-7(Sja-let-7)对虫体生殖发育的影响,本研究在日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠后的11 d^42 d,将Sja-let-7的同系物(Sja-let-7 mimics)注射入宿主体内对血吸虫Sja-let-7的表达进行干扰,结果显示Sja-let-7 mimics... 详细信息

为检测日本血吸虫小RNA let-7(Sja-let-7)对虫体生殖发育的影响,本研究在日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠后的11 d^42 d,将Sja-let-7的同系物(Sja-let-7 mimics)注射入宿主体内对血吸虫Sja-let-7的表达进行干扰,结果显示Sja-let-7 mimics干扰组小鼠肝脏虫卵孵化率显著升高;小鼠肝脏肉芽肿病变减轻十分明显,病灶周围炎性细胞浸润半径变小,空泡变性较对照组轻微,周围正常组织完整性也优于对照组。扫描电镜和透射电镜未观察到虫体的明显变化。利用荧光定量PCR检测Sja-let-7的候选靶基因干扰虫体的表达情况,结果表明Sja-let-7 mimics对大部分候选基因存在不同程度的抑制作用。本研究为后续深入研究小RNA Sja-let-7的功能奠定了基础。

关键词：日本血吸虫 Sja-let-7 虫卵孵化率 real time-PCR 候选靶基因

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日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析

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中国兽医科学 2007年第1期37卷 1-6页

作者：赵晓宇姚利晓孙安国傅志强刘金明蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心上海200232

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童... 详细信息

应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。

关键词：日本血吸虫童虫蛋白质组质谱

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日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估

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中国人兽共患病学报 2010年第7期26卷 631-637页

作者：王艳郭凡吉彭金彪李晔洪炀陈实傅志强石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241

目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表... 详细信息

目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(***)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况。结果同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp,编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2。荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫。成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8%的肝脏减卵率。结论获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫 nanos基因抗原性免疫保护

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微小隐孢子虫感染HCT-8细胞模型的建立及不同阶段虫体形态的观察

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中国兽医科学 2012年第2期42卷 111-118页

作者：张国恩米荣升周鹏黄燕秦培兰呼高伟曹薇陈兆国中国农业科学院、上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室、中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

利用人回盲肠癌(HCT-8)细胞作为感染细胞,采用不同的接种细胞浓度和培养血清浓度进行培养,观察细胞的生长状况;在培养细胞中加入1×105个经活力检测的微小隐孢子虫卵囊,培养72h后用荧光标记的隐孢子虫卵囊、子孢子染色试剂盒Crypt-a... 详细信息

利用人回盲肠癌(HCT-8)细胞作为感染细胞,采用不同的接种细胞浓度和培养血清浓度进行培养,观察细胞的生长状况;在培养细胞中加入1×105个经活力检测的微小隐孢子虫卵囊,培养72h后用荧光标记的隐孢子虫卵囊、子孢子染色试剂盒Crypt-a-Glo和Sporo-Glo进行染色,观察不同发育阶段的隐孢子虫形态。结果显示,在六孔培养板中接种10×105个细胞后,24h后长成80%～100%单细胞层,可以用来接种微小隐孢子虫。培养72h后观察到了隐孢子虫各个阶段虫体的形态。结果表明,成功建立了微小隐孢子虫感染HCT-8细胞模型。

关键词：微小隐孢子虫体外感染 HCT-8细胞培养形态

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东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 592-596,617页

作者：孙焕刘金明孙帅宋震宇石耀军陆珂李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44d)噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选后,随机挑取92个噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了19个有效EST序列,其中15条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,4个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。对19个有效EST编码蛋白的功能预测结果显示,其中6个为卵壳蛋白(Eggshell protein)相关基因,10个EST及其编码蛋白的功能与血吸虫基因表达调控及蛋白质加工修饰相关。研究结果提示,东方田鼠直接或间接地影响血吸虫基因表达,进而影响血吸虫的发育,可能是东方田鼠具有抗血吸虫特性的一个重要分子机理。

关键词：日本血吸虫东方田鼠筛选噬菌体展示cDNA文库

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