检索结果-内蒙古大学图书馆

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第2期32卷 11-15,35页

作者：彭金彪韩宏晓洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

以日本血吸虫18 d虫体的cDNA为模板,PCR获得Sjmago nashi编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为441 bp,将该序列提交至NCBI,登录号为GQ403668;应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况。结果表明:该基因在不... 详细信息

以日本血吸虫18 d虫体的cDNA为模板,PCR获得Sjmago nashi编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为441 bp,将该序列提交至NCBI,登录号为GQ403668;应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况。结果表明:该基因在不同发育阶段均有表达,在13日龄童虫表达量相对最高,32日龄次之;在不同性别成虫虫体中,该基因在雄虫的表达量远高于雌虫,说明该基因为日本血吸虫性别发育差异基因。以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,在大肠杆菌中表达,表达产物分子质量为19.5 ku,并以Ni-NTA HisBind Resin纯化重组蛋白。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得25.94%的减虫率和30.01%的肝脏减卵率。

关键词：日本血吸虫 mago nashi基因克隆表达免疫保护效果

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柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株与敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

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生物工程学报 2005年第3期21卷 435-439页

作者：姜连连黄兵韩红玉赵其平董辉陈兆国中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有5个蛋白质斑点,利用MALDI_TOF_TOF质谱技术对其中4个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得4个明... 详细信息

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有5个蛋白质斑点,利用MALDI_TOF_TOF质谱技术对其中4个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得4个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中2个蛋白质分别为球虫子孢子表面抗原TA4和热休克蛋白Hsp70 ,另外两种为真核细胞的功能蛋白。上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株的分子标志物提供了研究方向。

关键词：柔嫩艾美耳球虫,抗药性,地克株利,蛋白质组

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柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及应用

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 551-556页

作者：姜连连林矫矫韩红玉董辉赵其平朱顺海马卫娇程军曾艳波黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1... 详细信息

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1、MDBK、Vero、BHK、MDCK五种细胞的入侵活力。优化了在子孢子入侵活力检测时,DF-1细胞最佳培养条件。结果表明,柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞中可发育为第一代裂殖子。在不同培养温度下,子孢子对DF-1细胞的入侵活力均高于其他细胞。优化后的DF-1细胞培养体系的培养程序为:用含100mL/L胎牛血清的DMEM稀释DF-1细胞,以每孔1×105个细胞铺被24孔板,37℃、50mL/L CO2培养24h后,用含50mL/L胎牛血清的DMEM换液后,每孔接入3×105个子孢子,41℃、50mL/L CO2培养8～12h,收集细胞进行检测。

关键词：柔嫩艾美耳球虫鸡胚成纤维细胞入侵活力 CFDA-SE

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磺胺氯吡嗪钠中药复方对小鼠体内抗弓形虫疗效的观察

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畜牧兽医学报 2013年第12期44卷 2022-2028页

作者：蒋蔚陈永军张花景刘迎春荆振宇薛俊欣王权中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室上海200241

为探索治疗动物弓形虫病的有效药物组方,本研究以磺胺嘧啶钠作为对照首先通过药物体外试验观察磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩抑制弓形虫增殖的效果,然后分别用磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩以及3种药物的复方制剂,对人工感染弓形虫RH株的KM小鼠... 详细信息

为探索治疗动物弓形虫病的有效药物组方,本研究以磺胺嘧啶钠作为对照首先通过药物体外试验观察磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩抑制弓形虫增殖的效果,然后分别用磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩以及3种药物的复方制剂,对人工感染弓形虫RH株的KM小鼠进行体内治疗试验。体外试验表明磺胺氯吡嗪钠、磺胺嘧啶钠、黄芩和甘草对弓形虫速殖子均有一定的抑制效果,磺胺氯吡嗪钠抑制效果最好。小鼠体内试验表明单独使用磺胺嘧啶钠、甘草和黄芩均可不同程度地延长小鼠存活时间,但均不能避免小鼠死亡,而单独使用磺胺氯吡嗪钠可使小鼠的存活率达到40%,在同等剂量下,磺胺氯吡嗪钠与黄芩和甘草配伍后,疗效得到明显提高,可显著延长小鼠存活时间,并使小鼠存活率高达50%。本研究的结果提示磺胺氯吡嗪钠具有显著体内抗弓形虫的作用,与甘草和黄芩配伍后的中西药复方制剂,能在保持疗效的基础上显著减少磺胺氯吡嗪钠的用量,因此磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩复方制剂是未来治疗动物弓形虫病的优良方案之一。

关键词：弓形虫病磺胺氯吡嗪钠甘草黄芩治疗效果小鼠

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镰形扇头蜱组胺结合蛋白全长基因的克隆与分析

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中国兽医学报 2008年第3期28卷 257-260页

作者：向飞宇周勇志龚海燕周金林中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

从本实验室构建的镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)抑制消减杂交cDNA文库中选择了1条可能编码组胺结合蛋白(HBP)的EST序列(RhHBP),以5′末端快速扩增的方法(5′RACE)扩增获得5′末端序列,拼接获得全长基因。DNAMAN(v4.0)、DN... 详细信息

从本实验室构建的镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)抑制消减杂交cDNA文库中选择了1条可能编码组胺结合蛋白(HBP)的EST序列(RhHBP),以5′末端快速扩增的方法(5′RACE)扩增获得5′末端序列,拼接获得全长基因。DNAMAN(v4.0)、DNAstar(v4.0)和Genetyx(v4.0)软件分析阅读框、编码产物、序列同源性和系统进化,同时也分析了该基因在吸血前后雌雄蜱体内的表达情况。5′RACE法获得1条约400 bp的DNA片段,克隆测序,拼接获得1条长803 bp的全长基因,编码219个氨基酸残基。该基因在吸血雌蜱唾液腺内特异表达,初步分析该基因是组胺结合蛋白基因。

关键词：镰形扇头蜱组胺结合蛋白 5′末端快速扩增

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日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库的构建

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第5期25卷 406-410页

作者：孙毅贾人初刘金明苑纯秀石耀军陆珂傅志强孙焕蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

目的构建日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。方法用Trizol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,分离纯化mRNA,经随机引物反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,再用EcoRⅠ和HindⅢ消化,使其成为两端分别带有EcoRⅠ... 详细信息

目的构建日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。方法用Trizol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,分离纯化mRNA,经随机引物反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,再用EcoRⅠ和HindⅢ消化,使其成为两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端的双链cDNA。收集300bp以上的双链cDNA片段,与T7Select 10-3b载体连接,经体外包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。通过滴度测定及PCR技术鉴定文库质量,用7种特异性引物以PCR法从文库中钓取目的基因以检测文库的代表性。结果原始文库的库容量为4.98×106pfu,扩增后文库滴度为3.85×1011pfu/ml。对随机挑取的96个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为93.8%,其中95.6%的插入片段大于300bp。7种特异性引物均能从文库中钓取到日本血吸虫成虫相关基因。结论构建了日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库成虫

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国内部分地区贝类隐孢子虫感染情况调查

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中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1124-1125页

作者：黄燕徐梅倩朱顺海曹杰何国声中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

近年来,隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)作为一种新的严重危害人畜健康的重大寄生虫病得到广泛关注,它的流行和传播有可能会给人类带来大规模的灾难,WHO于1986年将之列为艾滋病的怀疑指标之一~([1]).

关键词：隐孢子虫病感染情况调查贝类国内寄生虫病人畜健康艾滋病 WHO

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抗急性弓形虫病药物疗效的研究

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中国人兽共患病学报 2011年第4期27卷 316-319,324页

作者：曾艳波朱顺海韩红玉董辉姜连连赵其平马卫娇程军黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的为了筛选能有效用于治疗动物弓形虫病的药物,本研究选择了9种药物进行抗急性弓形虫疗效初步评价实验。在此基础上,更深入评价了已选的最佳药物磺胺氯吡嗪抗弓形虫的疗效,比较了不同剂量磺胺氯吡嗪和各剂量组分别与乙胺嘧啶复配后的... 详细信息

目的为了筛选能有效用于治疗动物弓形虫病的药物,本研究选择了9种药物进行抗急性弓形虫疗效初步评价实验。在此基础上,更深入评价了已选的最佳药物磺胺氯吡嗪抗弓形虫的疗效,比较了不同剂量磺胺氯吡嗪和各剂量组分别与乙胺嘧啶复配后的抗弓形虫疗效。方法用弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子,按5 000个/只腹腔接种小鼠,接种24h后,通过灌服方式给药,连续治疗5d,接种后观察到40d后结束实验,评价平均存活时间、半数死亡时间和存活率等各项指标得出疗效。结果多种药物比较实验中,三字球虫粉(SPZ 250mg/kg)组的平均存活时间、半数死亡时间、存活率明显高于感染不用药组和其他药物治疗组(P<0.05),表现出良好抗虫效果。另外,不同剂量及复配结果显示:磺胺氯吡嗪(250mg/kg)组和磺胺氯吡嗪(350mg/kg)+乙胺嘧啶(15mg/kg)组,分别保护了58.33%和54.55%的小鼠免于发病死亡,并大大推迟了半数死亡时间,与其他各剂量组、复配组及感染不用药对照组呈现显著性差异(P<0.05),表明灌服磺胺氯吡嗪有显著的抗弓形虫作用,尤其250mg/kg治疗剂量效果最佳。结论本研究筛选出了对小白鼠感染弓形虫有明显治疗效果的抗动物弓形虫药物磺胺氯吡嗪以及最佳治疗剂量,为后续研究此药进一步治疗动物弓形虫病及推广应用奠定了基础。

关键词：弓形虫病弓形虫磺胺氯吡嗪

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柔嫩艾美耳球虫子孢子高表达新基因的克隆、表达及分析

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中国预防兽医学报 2010年第5期32卷 370-374页

作者：李洋韩红玉董辉赵其平姜连连朱顺海郭涛平宪卿马卫娇曾艳波程军黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(***)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439bp,ORF为525bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白... 详细信息

为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(***)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439bp,ORF为525bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku。Real-timePCR对***不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段。另外,将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7ku大部分以可溶性存在。Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗***的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子克隆表达

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干扰日本血吸虫凋亡抑制因子最佳siRNA分子的筛选

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中国人兽共患病学报 2013年第9期29卷 846-849页

作者：罗荣赵江平胡超程国锋中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的筛选干扰日本血吸虫凋亡抑制因子(Inhibitor of apoptosis protein of Schistosoma japonicum,SjIAP)较好的siRNA分子。方法应用生物信息学设计了针对SjIAP的3对siRNA分子。利用脂质体将每对siRNA分子和表达IAP的重组质粒传染到HEK2... 详细信息

目的筛选干扰日本血吸虫凋亡抑制因子(Inhibitor of apoptosis protein of Schistosoma japonicum,SjIAP)较好的siRNA分子。方法应用生物信息学设计了针对SjIAP的3对siRNA分子。利用脂质体将每对siRNA分子和表达IAP的重组质粒传染到HEK293T细胞中,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹检测IAP的表达。将siRNA分子与日本血吸虫童虫(12d)进行体外共培养,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹检测虫体内的IAP表达。结果细胞转染实验的实时定量RTPCR和免疫印迹分析表明本研究获得了2个干扰SjIAP较好的siRNA分子,且其中1对siRNA分子可显著抑制日本血吸虫虫体内IAP蛋白的表达,同时虫体Caspase活性有所上升。结论本研究获得了2个干扰日本血吸虫IAP较好的siRNA分子,为进一步利用RNA干扰研究血吸虫IAP的功能奠定了前期基础。

关键词：日本血吸虫凋亡抑制因子 RNA干扰基因功能

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