检索结果-内蒙古大学图书馆

PRRSV全长感染性cDNA克隆的构建：非结构蛋白和结构蛋白之间编码区的分离

中国科学（C辑） 2008年第1期38卷 66-73页

作者：袁世山韦祖樟中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是近两年来流行于我国大部分省份的"猪高热综合征"的主要病原体.该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变.如何设计有效的... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是近两年来流行于我国大部分省份的"猪高热综合征"的主要病原体.该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变.如何设计有效的疫苗来防治持续多变的流行变异株是研究者所关注的焦点.本研究中我们构建了Ⅱ型PRRSV弱毒株的感染性cDNA克隆,并对编码结构蛋白的ORF1和编码结构蛋白的ORF2之间插入几个酶切位点.通过RT-PCR和DNA测序以及分子克隆方法,获得了细胞致弱株(APRRS)的全长cDNA克隆.APRRSV基因组RNA为15521个核苷酸(不包括poly(A)尾).与PRRSV Nsp株和疫苗株的相似性均为99.7%.根据测序结果,利用基因组上的酶切位点将全长PRRSV cDNA克隆到pBlueScript载体中,在病毒5′末端引入T7启动子序列.为了区分重组病毒和亲本病毒,在ORF5编码区引人MluⅠ酶切位点.将最初构建的全长cDNA和带有MluⅠ酶切位点的cDNA分别体外转录成RNA后转染MA-104,均能够观察到典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE).拯救的重组病毒与亲本病毒有着相同的病毒学特性.通过突变PCR的方法将编码非结构蛋白基因ORF1和编码结构蛋白基因ORF2-7之间的编码区分离,从而构建了克隆***体外转录产物具有感染性,而且拯救的病毒与亲本病毒具有相同的病毒学特性.本研究为构建嵌合病毒作为疫苗候选株以此对遗传多变的PRRSV毒株提供有效的交叉保护提供了宝贵的工具,同时也为建立PRRSV为基因表达载体来构建针对其他重要的猪源疾病重组疫苗搭建了一个很好的平台.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 反向遗传系统编码区非结构蛋白

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猪繁殖与呼吸综合症病毒分子生物学研究进展

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微生物学通报 2008年第3期35卷 408-413页

作者：韦祖樟孙志袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合症病毒是引起猪繁殖与呼吸综合症的病原体,本文对PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白的及其功能的分子生物学研究进展做了简要综述。

关键词：猪繁殖与呼吸病毒分子生物学动脉炎病毒

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中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究

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中国农业科学 2008年第6期41卷 1822-1831页

作者：张建武庄金山袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PH... 详细信息

【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)以及瘟病毒的检测,对PRRSV阳性的进行ORF5的序列测定并分析。【结果】检测到16份PRRSV北美型阳性样品,PCV2阳性样品2份,其它病毒均未检到。PRRSV ORF5序列分析表明笔者分离到的PRRSV株可分为2个群。【结论】(1)PRRSV与2006年肆虐中国养猪业的猪病流行有直接关系;(2)2006年PRRSV流行株主要是以JX0612株为代表,但不同遗传特征的PRRSV也在流行。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 分子流行病学调查遗传进化分析

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2007年中国部分地区猪圆环病毒2型分子流行病学分析

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中国农业科学 2009年第8期42卷 2949-2957页

作者：张建武庄金山刘长龙王小敏袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

【目的】对采集自上海、江西、山东、江苏、河南和湖南等省的257份进行了PCV2的检测,确定中国PCV2感染情况及分子特征。【目的】设计一对针对PCV2ORF2的引物,利用PCR对其进行PCV2基因组的检测,对PCV2阳性的样品,进行了ORF2的克隆、序列... 详细信息

【目的】对采集自上海、江西、山东、江苏、河南和湖南等省的257份进行了PCV2的检测,确定中国PCV2感染情况及分子特征。【目的】设计一对针对PCV2ORF2的引物,利用PCR对其进行PCV2基因组的检测,对PCV2阳性的样品,进行了ORF2的克隆、序列测定和分析。【结果】结果显示PCV2阳性率为24.51%(63/257),并能从健康猪群中检测的阳性;各PCV2分离株间ORF2核苷酸序列同源性为84.4%～100%,氨基酸同源性为82.5%～100%,与所属群的不同而不同。【结论】中国有2个群的PCV2毒株在流行,以PCV2b群为主(70.97%,22/31),但也有PCV2a群毒株(29.03%,9/31)的流行,同时PCV2流行的基因型没有明显的地域间差异。部分毒株符合高致病性PCV2的特征,暗示中国已存在高致病性PCV2的流行。

关键词：猪圆环病毒2型开放阅读框架2 基因型

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

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中国兽医学报 2009年第2期29卷 139-142页

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中,建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12 704个核苷酸,与EAVBucyrus分离株的同源性为99.1%;全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。

关键词：马动脉炎病毒全长cDNA克隆感染性克隆

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒5′非翻译区末端序列调控病毒复制作用的解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒5′非翻译区末端序列调控病毒复制作...

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：高飞袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室

单股正链 RNA 病毒的基因组5′非翻译区(UTR)一级序列和高级结构调控病毒的感染性、复制、转录以及翻译。本研究利用 PRRSV 感染性克隆 pCBC2,通过突变 PCR,构建了一系列5′UTR 序列缺失的全长突变体克隆:pCBCM1,2,4,6,8,

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒末端序列非翻译区病毒复制

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乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析及全长cDNA克隆的构建

乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析及全长cDNA克隆的构建

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：郑浩孙志袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室

乙型脑炎是一种重要的自然疫源性人畜共患病,其病原乙型脑炎病毒 (Japanese encephalitis virus,JEV)是黄病毒科黄病毒属成员。本文旨在通过对一株猪源 JEV 进行全基因组序列分析及 cDNA 克隆,进而建立 JEV 反向遗传操作系

关键词：乙型脑炎病毒基因组序列分析 SH0601

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒反向遗传操作系统的建立及应用

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒反向遗传操作系统的建立及应用

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：袁世山孙志余丹丹高飞吕键袁海峰郑海红谭菲菲张建武中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)是套式(或巢状)病毒目(Nidovirales) 动脉炎病毒科(Arteriviridae)的成员,目前对该类病毒复制的调控机制知之甚少。我们建立了 PRRSV 感染性 cDNA 克隆,并对其基因组非编码区(UTR)以及结构

关键词：反向遗传操作系统猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 PRRSV

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Ⅰ型PRRSV全基因组cDNA克隆的构建及序列分析

Ⅰ型PRRSV全基因组cDNA克隆的构建及序列分析

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：庄金山张建武袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起国内近年暴发的"猪高致病性蓝耳病"(又名"猪高热综合征")的主要病原,直接导致了国内猪肉价格的大幅上涨。 PRRSV 分为Ⅰ型(欧洲型)和Ⅱ型(北美型),国内流行的是Ⅱ型 PRRSV,未曾

关键词： PRRSV 欧洲型全基因组序列分析

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猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析及全长cDNA的构建

猪乙型脑炎病毒SH0601株基因组序列分析及全长cDNA的构建

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：郑浩余丹丹孙志高飞袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室上海 200232

将猪源JEV SH0601株基因组RNA分5段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中，测定了全长cDNA序列，并根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。cDNA序列分析结果表明：SH0601株基因组全长10977nt，与GenBank中的Bei... 详细信息

将猪源JEV SH0601株基因组RNA分5段进行RT-PCR并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO和pBluescript载体中，测定了全长cDNA序列，并根据E蛋白基因序列对SH0601株进行了遗传分型。cDNA序列分析结果表明：SH0601株基因组全长10977nt，与GenBank中的Beijing-1、P3、SA14和SA14-14-2株基因组全长相比，在3’NTR的10701 nt处多一碱基“G”，与上述四株病毒的全长核苷酸的同源率都达97.2％以上，而与国外猪源分离株—KV1899和JEV/sw/Mie/41/2002全长核苷酸的同源率仅达88.7％，但SH0601株与6株病毒的全长氨基酸同源率均达97.0％以上。以E蛋白基因序列对SH0601作进化分析，该分离株属基因型Ⅲ型。

关键词：病毒基因组猪乙型脑炎病毒序列分析

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