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猪繁殖与呼吸综合症病毒分子生物学研究进展

微生物学通报 2008年第3期35卷 408-413页

作者：韦祖樟孙志袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合症病毒是引起猪繁殖与呼吸综合症的病原体,本文对PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白的及其功能的分子生物学研究进展做了简要综述。

关键词：猪繁殖与呼吸病毒分子生物学动脉炎病毒

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中国兽医学报 2009年第2期29卷 139-142页

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中,建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12 704个核苷酸,与EAVBucyrus分离株的同源性为99.1%;全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。

关键词：马动脉炎病毒全长cDNA克隆感染性克隆

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建

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猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：吕健袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传操作,本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增,将得到的片段克隆到... 详细信息

近年来,在全国范围广泛流行并且引起巨大经济损失的"猪无名高热"的主要病源之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。为了便于对PRRSV进行反向遗传操作,本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增,将得到的片段克隆到pBlueScript II SK(+)载体中,并且利用相关的重叠区酶切位点将其构建成为全长克隆。在扩增5'端时,运用5'RACE获得了基因组5'最末端序列,在亚克隆入pBlueScript IISK(+)并且在5'端上游引入T7启动子序列。选取一个克隆在3'端ORF6下游引入Mlu I位点,以期作为感染性分子克隆的筛选标志。最终获得了含有PRRSV JX0612株基因组全长cDNA的重组质粒pJX0612和含有分子标志Mlu I的基因组全长cDNA克隆pJX0612-M。转染MARC-145细胞后得到拯救病毒,而且分子标志稳定存在。本研究中构建的基因组全长感染性cDNA克隆为探寻病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：感染性克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒 PRRSV JX0612 细胞转染全长克隆基因组序列反向遗传操作无名高热

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列,设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片断PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntII-TOPO中,建立了初级cDNA克隆。在扩增5'末端时,引入NotI酶切位点和T3启动子序列;在3'末段PolyA尾引入XhoI酶切位点,后者用于cDNA模板线性化。将扩增片断在PCR BluntII-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescript II KS(+)中,获得了EAV全长cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12704个核苷酸,与EAV Bucyrus分离株的同源性为99.1%,全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应的导致编码区内34个氨基酸改变。本试验构建的基因组全长cDNA克隆为进一步获取具有感染性的EAV分子克隆并研究动脉炎病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：基因组 RNA 马动脉炎病毒动脉炎病毒属

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室

本研究旨在建立马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)的反向遗传操作系统。根据 GeneBank 相关 EAV 基因序列,设计合成特异引物,应用 RT-PCR 技术, 扩增了 EAV Bucyrus 株6段首尾重叠的全基因组 cDNA 片断。将扩增的各个 cDNA 重

关键词：马动脉炎病毒酶切位点基因组

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

根据马动脉炎病毒(EAV)Bueyrus株全基因组序列，设计并合成EAV特异引物，进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片断PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中，... 详细信息

根据马动脉炎病毒(EAV)Bueyrus株全基因组序列，设计并合成EAV特异引物，进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片断PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中，建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5’末端时，引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3’末段：PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点，后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片断在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接，最后亚克隆到质粒pBluescript Ⅱ KS(+)中，获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明：该毒株基因组全长为12704个核苷酸，与EAV Bucyrus分离株的同源性为99.1％;全长基因组中有104个核苷酸发生突变，相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。本试验构建的基因组全长cDNA克隆为进一步获取具有感染性的EAV分子克隆并研究动脉炎病毒基因组结构和功能奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒感染性克隆基因组序列

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒3’末端非翻译区病毒复制过程调控作用的研究

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒3’末端非翻译区病毒复制过程调控作...

第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：孙志王金勇张建武秦爱健袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室扬州大学兽医学院

以北美株 PRRSV 感染性克隆 pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3’UTR 中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长 PRRSV 突变体克隆,解析3’UTR 突变对病毒感染性的影响,旨在

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 PRRSV 非翻译区病毒复制

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3’末端非翻译区中调控序列的研究

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3’末端非翻译区中调控序列的...

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：孙志王金勇张建武秦爱健袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室扬州大学兽医学院

以北美株PRRSV感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3'UTR中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长PRRSV突变体克隆,解析3'UTR突变对病毒感染性的影响,旨在界定调控PRRSV3... 详细信息

以北美株PRRSV感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,将3'UTR中的一级结构进行了系列缺失或插入突变,并改变二级结构中的一个保守的茎环结构,构建全长PRRSV突变体克隆,解析3'UTR突变对病毒感染性的影响,旨在界定调控PRRSV3'UTR的启动子序列及二级结构,即复制过程中的最小调控元件。以空斑和Northern Blot来研究拯救后重组病毒的复制、转录和生长特性,发现重组病毒感染动力学与亲本病毒无可见差别。结果表明PRRSV3'UTR的5'端可耐受一定数目的核苷酸的缺失(41nt)与插入(23nt)突变,但进一步9nt缺失造成保守的环结构突变后就使病毒失去了感染性。证明了这是3'UTR中控制PRRSV复制过程的的必需序列及二级结构,为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。

关键词： PRRSV)3 感染性克隆 UTR 顺式调控元件猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒非翻译区

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒nsp2缺失突变体的构建与功能解析

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒nsp2缺失突变体的构建与功能解析

第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：吕健刘维全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室中国农业大学生物学院动物生化与分子生物系

对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒北美株进行序列比较后发现,其基因组的 nsp2是序列中的高变区,且伴随有编码序列的区段缺失。为了了解 nsp2结构与功

关键词：