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中国兽医科学 2013年第1期43卷 84-90页

作者：费陈忠张萍林洋李涛薛飞群张可煜张丽芳王霄旸孟新宇王米郑文丽中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室农业部动物寄生虫病学重点开放实验室上海200241 安信农业保险股份有限公司上海松江支公司上海201600 郑州市兽药饲料监察所河南郑州450003

为评价新三嗪类抗球虫药物纳川珠利的安全性,选用100只昆明小鼠,连续30d分别灌服4.8、19.2、76.8mg/kg的药物,以纯水和空白溶剂为对照,通过临床观察、血液学分析、血液生化检测、脏器系数和病理学检查,系统地评估了该化合物对小鼠的亚... 详细信息

为评价新三嗪类抗球虫药物纳川珠利的安全性,选用100只昆明小鼠,连续30d分别灌服4.8、19.2、76.8mg/kg的药物,以纯水和空白溶剂为对照,通过临床观察、血液学分析、血液生化检测、脏器系数和病理学检查,系统地评估了该化合物对小鼠的亚急性毒性作用。结果显示,试验期间无小鼠死亡,在开始用药1周内,高剂量组小鼠有轻微临床毒性症状,2周后症状消失。试验过程中各组小鼠增重差异无统计学意义(P>0.05),长期高剂量给药后小鼠心和肝的脏器系数明显改变(P<0.05),血液红细胞、碱性磷酸酶、肌酐明显增高和葡萄糖、胆固醇、尿酸显著降低(P<0.05),高剂量组肝、肾小部分发生轻微水样变性、点状坏死等病理改变,停药15d后,碱性磷酸酶和尿酸水平与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。提示纳川珠利长期大剂量使用可能存在肝、肾等轻微损伤的风险,但损伤是可逆的,停药后短期可逐渐恢复,临床使用相对安全。

关键词：三嗪化合物亚急性毒性小鼠

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抗大肠杆菌性腹泻中药复方筛选研究

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黑龙江畜牧兽医 2013年第3期 123-125页

作者：李英王米孟新宇方炳虎薛飞群杨锐乐华南农业大学兽医学院广州510642 中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室/农业部动物寄生虫学病重点实验室上海200241

为了筛选抗大肠杆菌性腹泻的中药复方,试验采用小鼠腹腔注射大肠杆菌O101的方法建立腹泻模型,比较不同中药复方对腹泻小鼠的症状、体重、血细胞变化及脏器指数的影响。结果表明:与模型对照组比较,复方4组小鼠体重增重显著,脾脏指数差异... 详细信息

为了筛选抗大肠杆菌性腹泻的中药复方,试验采用小鼠腹腔注射大肠杆菌O101的方法建立腹泻模型,比较不同中药复方对腹泻小鼠的症状、体重、血细胞变化及脏器指数的影响。结果表明:与模型对照组比较,复方4组小鼠体重增重显著,脾脏指数差异显著,血细胞指标趋于正常。说明复方4能有效治疗大肠杆菌所致的腹泻。

关键词：中药复方腹泻模型大肠杆菌增重血细胞变化脏器指数

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喹烯酮细胞毒性与化学结构关系初步分析

喹烯酮细胞毒性与化学结构关系初步分析

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张可煜郑文丽王春梅张丽芳肖遂肖文龙薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241

[目的]喹烯酮属于1,4-二氮氧化喹噁啉类兽药。研究发现喹烯酮体外细胞毒性较大,而同类药物喹乙醇等细胞毒性较小,为分析喹烯酮细胞毒性与其化学结构的关系,[方法]本研究通过Beirut缩合反应等得到得到喹烯酮、喹烯酮支链苯环的改造化合... 详细信息

[目的]喹烯酮属于1,4-二氮氧化喹噁啉类兽药。研究发现喹烯酮体外细胞毒性较大,而同类药物喹乙醇等细胞毒性较小,为分析喹烯酮细胞毒性与其化学结构的关系,[方法]本研究通过Beirut缩合反应等得到得到喹烯酮、喹烯酮支链苯环的改造化合物以及脱二氧喹烯酮和脱二氧喹烯酮支链苯环的改造化合物。将这些化合物进行体外抗菌活性和体外细胞生长抑制作用研究。另外,将喹烯酮、脱二氧喹烯酮、喹乙醇、以及喹烯酮结构类似化合物进行体外HepG2细胞代谢物LC/MS/MS方法鉴定。[结果]本研究成功合成出20余个与喹烯酮及其脱二氧喹烯酮结构相似化合物,其中13个属于新结构化合物;喹烯酮及其结构类似化合物都具有一定的抗菌活性,结构类似化合物的抗菌活力与喹烯酮接近,其支链羟基修饰化合物抗菌活性还略优于喹烯酮,但母核脱氧后的化合物抗菌活性迅速消失殆尽;研究还发现喹烯酮、喹胺醇及其结构类似化合物对HepG2、Chang Liver、Vero细胞的生长抑制作用明显,呈剂量和时间相关性,而且其抑制率远超喹乙醇等化合物。但是,所有母核脱氧后的化合物对细胞的生长抑制作用显著下降,且支链苯环上的改造对喹烯酮的细胞毒性影响较小;此外,本研究还发现在HepG2细胞孵育液中存在5种喹烯酮代谢产物、5种脱二氧喹烯酮代谢产物、6种喹胺醇代谢产物以及一种喹乙醇的代谢产物,其喹烯酮和喹胺醇的代谢方式接近,均为母核脱氧和支链羰基和双键还原。[结论]喹烯酮的细胞毒性不仅源于其母核N→O基团,其支链上的α,β-不饱和酮结构可能与母核N→O基团协同,从而增加了喹烯酮的细胞毒性。

关键词：喹烯酮细胞毒性构效关系

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消减杂交法鉴定喹烯酮诱导的差异基因

消减杂交法鉴定喹烯酮诱导的差异基因

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张可煜王霄旸王米张丽芳费陈忠李涛薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241

目的：喹烯酮具有较大的细胞毒性和体外遗传毒性,但其毒性机理目前仍知之甚少.为研究喹烯酮毒性作用的分子机理,方法：本研究以HepG2细胞为研究材料,利用抑制性消减杂交技术构建喹烯酮暴露后的双向消减杂交cDNA文库,挑选其中500个克隆... 详细信息

目的：喹烯酮具有较大的细胞毒性和体外遗传毒性,但其毒性机理目前仍知之甚少.为研究喹烯酮毒性作用的分子机理,方法：本研究以HepG2细胞为研究材料,利用抑制性消减杂交技术构建喹烯酮暴露后的双向消减杂交cDNA文库,挑选其中500个克隆进行基因序列分析,并通过荧光定量PCR对部分差异的相关基因进行验证.结果：在双向消减杂交cDNA文库中阳性克隆基因测序后获得喹烯酮暴露诱导的差异表达基因160余个,其中表达上调的基因有90多个,表达下调的基因60多个.荧光定量PCR验证结果与消减杂交结果一致.结论：本研究构建起喹烯酮诱导HepG2细胞差异表达的正反向基因文库,筛选出差异表达基因,为比较全面的揭示喹烯酮毒性分子机理奠定了基础.

关键词：兽药喹烯酮毒性作用分子机理差异表达基因消减杂交法

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3-甲基喹噁啉-2-羧酸的制备及其细胞毒性研究

3-甲基喹噁啉-2-羧酸的制备及其细胞毒性研究

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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会

作者：张可煜郑海红郑文丽李涛费陈忠薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

3-甲基喹噁啉-2-羧酸是喹烯酮和喹乙醇在机体内的主要代谢物之一,了解3-甲基喹噁啉-2-羧酸的安全性对喹烯酮和喹乙醇的安全性评价具有重要意义.本文通过贝鲁特反应和还原、脱羧反应在体外合成制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸,并进行理化鉴定和... 详细信息

3-甲基喹噁啉-2-羧酸是喹烯酮和喹乙醇在机体内的主要代谢物之一,了解3-甲基喹噁啉-2-羧酸的安全性对喹烯酮和喹乙醇的安全性评价具有重要意义.本文通过贝鲁特反应和还原、脱羧反应在体外合成制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸,并进行理化鉴定和抗菌活性测试;通过MTT方法研究3-甲基喹噁啉-2-羧酸对多种细胞的生长抑制作用,利用单细胞电泳研究其对细胞DNA的损伤作用,利用流式细胞术研究其对细胞周期的改变.结果显示,体外成功合成制备出3-甲基喹噁啉-2-羧酸,而3-甲基喹噁啉-2-羧酸几乎没有抗菌效果,对多种细胞的生长抑制作用较弱,在剂量检测范围内细胞抑制率不到30％,但在一定剂量下能导致细胞DNA损伤,主要表现为尾长和尾部DNA含量显著升高;并且3-甲基喹噁啉-2-羧酸也能改变Chang细胞的细胞周期,表现为S期阻滞.结果提示3-甲基喹噁啉-2-羧酸具有一定的细胞毒性。

关键词： 3-甲基喹噁啉-2-羧酸制备工艺细胞毒性

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鸡组织中妥曲珠利及其代谢物残留测定

鸡组织中妥曲珠利及其代谢物残留测定

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：江兆玲张丽芳张崇薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/农业部寄生虫病学重点实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241

[目的]建立一种同时检测鸡的肌肉、肝脏和肾脏中妥曲珠利及其代谢物妥曲珠利砜和妥曲珠利亚砜残留量的超高效液相色谱方法.[方法]用乙腈作提取溶剂,固相萃取小柱净化,超高效液相色谱仪检测.[结果]三种药物在三种组织的线性、精密度、准... 详细信息

[目的]建立一种同时检测鸡的肌肉、肝脏和肾脏中妥曲珠利及其代谢物妥曲珠利砜和妥曲珠利亚砜残留量的超高效液相色谱方法.[方法]用乙腈作提取溶剂,固相萃取小柱净化,超高效液相色谱仪检测.[结果]三种药物在三种组织的线性、精密度、准确性、特异性和稳定性良好;其中,妥曲珠利、妥曲珠利砜在25～1000μg/kg浓度水平范围,妥曲珠利亚砜在37.5 ～ 1500μg/kg浓度水平范围内线性良好,相关系数均＞0.99.妥曲珠利、妥曲珠利砜和妥曲珠利亚砜在各组织中各添加水平,回收率均在80.1％-110.0％范围,日内相对标准偏差均小于15.4％,日间相对标准偏差均小于15.8％.妥曲珠利、妥曲珠利砜在肌肉、肝脏和肾脏中的检测限分别为10μ g/kg、 10μg/kg、25μg/kg,在三种组织中定量限均为50μg/kg,妥曲珠利亚砜在肌肉、肝脏和肾脏组织检测限分别为15μg/kg、15μg/kg、37.5μg/kg,在三种组织定量限均为75μg/kg.长期稳定性、短期稳定性和反复冻融稳定性试验结果表明样品稳定、方法可靠.[结论]建立了同时检测鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中检测妥曲珠利及其代谢物的超高效液相色谱检测方法,本方法准确可靠,重现性好,完全能满足残留检测的要求.

关键词：妥曲珠利妥曲珠利砜妥曲珠利亚砜残留测定超高效液相色谱

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上下法与传统急性毒性法对AC4急性毒性研究

上下法与传统急性毒性法对AC4急性毒性研究

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：肖文龙张可煜费陈忠王霄旸吴昊薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与残留研究重点开放实验室动物药学研究室中国上海200241

[目的]为了评价三嗪类抗球虫新药AC4的安全性，本实验运用了上下法和传统法进行了SD大鼠的急性毒性试验，同时比较两种方法的优缺点.[方法]采用AC4对大鼠灌胃给药，分别进行了上下法急性毒性试验与传统急性毒性试验，观察中毒现象.将上... 详细信息

[目的]为了评价三嗪类抗球虫新药AC4的安全性，本实验运用了上下法和传统法进行了SD大鼠的急性毒性试验，同时比较两种方法的优缺点.[方法]采用AC4对大鼠灌胃给药，分别进行了上下法急性毒性试验与传统急性毒性试验，观察中毒现象.将上下法的动物结局输入AOT425StatPgm软件计算LD50及其95％可信区间，运用改良寇式法计算传统急性毒性试验的LD50及其95％可信区间.[结果]通过观察，两种方法大鼠的中毒症状基本相同，表现为给药24h后会出现四肢、耳朵、尾巴发红，体重逐日下降，耐过大鼠体重恢复增长.临死前大鼠呼吸困难，气息微弱，行动缓慢，精神萎靡，被毛竖立.另外，传统急性毒性法大鼠出现脱毛现象，而且随着剂量增加脱毛现象越严重.对死亡大鼠剖检，肉眼可见大鼠的肺脏鲜红，表面有不同程度的淤血斑，部分大鼠的肝脏、脾脏边缘淤血、肾上腺肿大淤血.通过计算，上下法AC4急性毒性LD50为5 000 mg/kg(95％可信区间2 199 ～20 000 mg/kg)，传统法LD50为4 742.97 mg/kg(95％可信区间3 753.76 ～5 992.86 mg/kg).[结论]AC4属于低毒药物，其安全性高.两种方法所得AC4对大鼠的LD50值接近，毒性分级相同，表明上下法作为急性毒性替代法对于药物安全性评价领域有较好的应用价值和发展前景.

关键词：上下法传统急性毒性法半数致死量(LD50) AC4

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新型三嗪类化合物纳川珠利的靶动物亚慢性毒性试验

新型三嗪类化合物纳川珠利的靶动物亚慢性毒性试验

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：范超郑文丽冯丽珍薛飞群费陈忠林洋张可煜张丽芳王霄旸孟新宇王米中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室农业部动物寄生虫病学重点开放实验室上海200241 郑州华信学院 451150 郑州市兽药饲料监察所郑州 450003

[目的]纳川珠利是一种新型三嗪类抗鸡球虫化合物,临床前药理、毒理学研究表明,该化合物具有良好的成药性基础.为进一步评估其在靶动物临床应用中的安全性和纳川珠利的临床和生产中的合理应用提供依据,保障人类食品安全.[方法]试验采用8... 详细信息

[目的]纳川珠利是一种新型三嗪类抗鸡球虫化合物,临床前药理、毒理学研究表明,该化合物具有良好的成药性基础.为进一步评估其在靶动物临床应用中的安全性和纳川珠利的临床和生产中的合理应用提供依据,保障人类食品安全.[方法]试验采用80只浦东黄羽肉鸡,随机分为4组,通过在标准饲料中全程添加本品0、3、15、30 mg/kg,观察化合物对鸡的临床表现和血液学等指标影响,评估其对靶动物的亚慢性毒性作用.[结果]结果显示,药物对鸡无不良临床反应,对靶动物鸡的血液生化指标无显著影响,试验期间各组间体重增重变化差异无统计学意义(P＞0.05),剖检肉眼未见明显异常,但肝脏系数、脾脏系数和肺脏系数出现明显减小(P＜0.05),4周时,见有红细胞数量(RBC)和红细胞压积(HCT)的明显增加(P＜0.05).[结论]推测药物对育成期雏鸡的红细胞成熟分化可能有一定促进作用,纳川珠利对靶动物鸡的整体毒性较低,临床应用是安全的.

关键词：三嗪化合物亚慢性毒性靶动物鸡

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高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中癸氧喹酯的残留

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中国农学通报 2013年第8期29卷 21-25页

作者：王中艳罗浩师张丽芳江善祥费陈忠张可煜郑文丽王霄旸薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫病学重点实验室/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院/兽医药理与毒理实验室南京210095

为建立一种快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),以应用于癸氧喹酯(DEC)在鸡蛋中的残留检测,并将该方法用于残留消除规律的研究。将8只健康蛋鸡连续饲喂添加癸氧喹酯(浓度为27.2mg/kg)的饲料10天后,分别在停药后第1、2、3、5... 详细信息

为建立一种快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),以应用于癸氧喹酯(DEC)在鸡蛋中的残留检测,并将该方法用于残留消除规律的研究。将8只健康蛋鸡连续饲喂添加癸氧喹酯(浓度为27.2mg/kg)的饲料10天后,分别在停药后第1、2、3、5、8、11天收集鸡蛋匀浆,用乙腈:乙酸乙酯(1:1)提取,OasisTMHLB固相萃取柱净化,以0.1%甲酸水:乙腈(30/70,v/v)作为流动相,XTerraC18色谱柱洗脱,质谱多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明:该方法的灵敏度高,检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.2、0.8μg/kg,DEC在0.8～240μg/kg浓度范围内线性良好,相关系数R2>0.993,回收率在90.7%～101.8%之间,RSD<11.4%;消除试验结果表明:鸡蛋中DEC最高残留浓度出现在停药后第3天,随着时间的推移,鸡蛋中癸氧喹酯的残留浓度逐渐降低,到第8天时该药的残留浓度达到欧洲委员会规定的允许浓度水平(20μg/kg)。本方法简便可靠,可满足检验实际需求。

关键词：癸氧喹酯高效液相色谱-串联质谱鸡蛋残留消除

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羊肌肉组织中安乃近代谢产物残留量的测定

羊肌肉组织中安乃近代谢产物残留量的测定

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张崇张丽芳江善祥费陈忠王霄旸郑文丽肖遂薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫病学重点实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫病学重点实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理实验室南京210095

[目的]建立一种可同时测定羊肌肉组织中安乃近代谢产物：4-甲氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine,MAA)、氨基安替比林(aminoantipyrine,AA)、甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine,FAA)和乙酰氨基安替比林(4-aeetylaminoantipyrine,AAA)残留量的高效液相色谱串联质谱检测方法.[方法]羊肌肉组织用碱性乙腈提取,过OASIS MAX固相萃取小柱净化,用高效液相色谱串联质谱测定.色谱柱为Waters Atlantis HILIC Silica,通过流动相0.1％甲酸铵水溶液+乙腈梯度分离,用电喷雾-串联质谱正离子模式和多反应监测模式进行定性定量分析,用外标法定量.[结果]MAA、FAA、AAA在羊肌肉组织中4-200 μg/kg的添加范围内线性良好,AA在40-2000μg/kg的添加范围内线性良好;在5、50、100的添加水平,MAA、FAA、AAA在羊的肌肉组织中回收率在79.5％～ 119.0％的范围内;在50、500、1000的添加水平,AA的回收率在75％～ 109.7％的范围内,MAA、FAA、AAA在肌肉组织各个浓度的日内相对标准偏差(RSD)均小于12.1％,日间标准偏差均小于16.7％;AA在肌肉组织各个浓度的日内相对标准偏差(RSD)均小于7.1％,日间相对标准偏差小于10.2％.MAA,FAA,AAA在肌肉组织中的检测限均为2μg/kg,定量限为5μg/kg;AA在肌肉组织中的检测限为20μg/kg,定量限为50μg/kg.[结论]建立了在羊肌肉组织中安乃近四个代谢物的高效液相色谱串联质谱分析方法,本方法灵敏度高,重现性良好,且经济、高效,各项方法学考察均符合残留检测的要求.

关键词：安乃近残留 HPLC-MS/MS

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