检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2014年第6期44卷 558-562页

作者：郭小勇洪炀韩宏晓曹晓丹韩艳辉张旻傅志强朱传刚陆珂李浩林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为观察BALB/c小鼠源日本血吸虫14d童虫的细胞凋亡现象,分别采用TUNEL检测法和透射电子显微镜从DNA分子水平和细胞层面上进行定性观察,并应用FITC-Annexin-V/PI双染色法通过流式细胞仪定量检测虫体凋亡细胞比例。结果表明,采用这3种方法... 详细信息

为观察BALB/c小鼠源日本血吸虫14d童虫的细胞凋亡现象,分别采用TUNEL检测法和透射电子显微镜从DNA分子水平和细胞层面上进行定性观察,并应用FITC-Annexin-V/PI双染色法通过流式细胞仪定量检测虫体凋亡细胞比例。结果表明,采用这3种方法均能在日本血吸虫14d童虫中观察到一定程度的细胞凋亡现象,但不会导致日本血吸虫该时期童虫的异常生长发育。

关键词：日本血吸虫细胞凋亡透射电子显微镜 TUNEL法 FITC-Annexin-V/PI双染色流式细胞术

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长角血蜱天冬氨酸蛋白水解酶8基因的鉴定及其抵抗田鼠巴贝虫感染作用的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第4期42卷 433-438页

作者：朱昊天周勇志曹杰王亚楠张厚双徐前明周金林安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

目的对长角血蜱天冬氨酸蛋白水解酶8(cas8)基因进行鉴定,探究其在长角血蜱抵抗田鼠巴贝虫感染中的作用,为田鼠巴贝虫传播阻断疫苗的研究奠定基础。方法提取长角血蜱RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增cas8,测序后在GenBank中进行BLAST比对。用MEG... 详细信息

目的对长角血蜱天冬氨酸蛋白水解酶8(cas8)基因进行鉴定,探究其在长角血蜱抵抗田鼠巴贝虫感染中的作用,为田鼠巴贝虫传播阻断疫苗的研究奠定基础。方法提取长角血蜱RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增cas8,测序后在GenBank中进行BLAST比对。用MEGA软件,采取邻接法构建基于cas基因的系统进化树。以叮咬田鼠巴贝虫感染小鼠的长角血蜱若蜱为感染组,以叮咬正常小鼠的同批次若蜱为对照组。感染组与对照组各取9只蜱,提取RNA并逆转录为cDNA,采用定量PCR(qPCR)分析感染组与对照组长角血蜱cas8基因相对转录水平差异;提取感染组和对照组长角血蜱若蜱总蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测CAS8的相对表达量。合成cas8基因和荧光素酶基因的双链RNA(dsRNA),分别显微注射至长角血蜱若蜱体内进行RNA干扰(RNAi)(RNAi组和对照组),12~24 h后取活性良好的蜱叮咬田鼠巴贝虫感染小鼠,饱血后立即收集蜱,qPCR检测cas8基因的相对转录水平,实时PCR(探针法)检测长角血蜱体内田鼠巴贝虫的18S rRNA基因。感染组和对照组cas8基因相对转录水平和蛋白相对表达水平、RNA干扰组和干扰对照组田鼠巴贝虫18S rRNA基因含量的比较采用t检验。结果长角血蜱cas8基因长1377 bp,序列提交GenBank获得的登录号为PP407944,其预测的氨基酸序列与GenBank中的长角血蜱CAS8(GenBank:ABG48761.1)、镰形扇头蜱CAS8(GenBank:ALQ43547.1)的氨基酸序列一致性分别为21.26%和61.24%。系统进化树分析结果显示,cas8基因与GenBank中的长角血蜱cas基因(ABG48665.1、ABG48761.1)均不在同一分支上,且亲缘关系较远;与镰形扇头蜱cas8基因(GenBank:ALQ43547.1)的亲缘关系较近,在同一分支上。qPCR分析结果显示,感染组cas8基因的相对转录水平为0.562±0.036,高于对照组的0.198±0.071(t=7.910,P<0.01)。Western blotting结果显示,感染组CAS8蛋白的相对表达水平为0.460±0.013,高于对照组的0.346±0.007(t=9.368,P<0.01)。沉默cas8后,RNAi组cas8基因的相对转录水平为0.036±0.003,低于对照组的0.081±0.006(t=10.680,P<0.01);RNAi组田鼠巴贝虫18S rRNA基因为3.35×10^(6)拷贝/µl,高于对照组的1.35×10^(6)拷贝/µl(t=4.570,P<0.05)。结论CAS8是长角血蜱凋亡相关分子,能够抵御田鼠巴贝虫感染长角血蜱,可以作为田鼠巴贝虫传播阻断疫苗的候选靶向分子。

关键词：长角血蜱人兽共患病田鼠巴贝虫天冬氨酸蛋白水解酶8 RNA干扰

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毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

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中国兽医科学 2008年第3期38卷 196-199页

作者：卞庆松韩红玉赵其平姜连连董辉闫晓菲张建哲黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库，用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA，采用SMART技术，在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA，经LD-PCR扩增合成双链cDNA（ds cDNA）。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切，过CHROM... 详细信息

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库，用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA，采用SMART技术，在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA，经LD-PCR扩增合成双链cDNA（ds cDNA）。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切，过CHROMA SPIN-400^TM柱去除小于400bp的片段，与λTriplEx2^TM噬菌体载体连接，用GigapackⅢGold^TM载体蛋白包装，构建了cDNA噬菌体表达文库。经测定，原始文库容量为4．72×10^6pfu／mL，扩增后的文库容量为2．62×10^10pfu／mL，重组率为97．5％，插入片段为500～1100bp。证实，该文库质量良好，为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础。

关键词：鸡球虫毒害艾美球虫孢子化卵囊 cDNA文库 SMART技术

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柔嫩艾美耳球虫Serpin基因在293T细胞中的表达

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复旦学报（自然科学版） 2015年第2期54卷 252-256页

作者：王晔韩红玉董辉赵其平朱顺海姜连连薛璞舒凡帆黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为了检测柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因(EtSerpin)在真核细胞293T中的表达情况,以Et孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增含完整Serpin开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtSerpin质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtSerpin.该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞,用间接免疫荧光法和Western blot鉴定EtSerpin基因的表达情况,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光,Western blot结果显示出大小约45.5kDa的目的蛋白条带,结果表明构建的EtSerpin可以在293T细胞中获得表达.

关键词：柔嫩艾美耳球虫 Serpin基因 293T细胞真核表达

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柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP559基因克隆与真核表达

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生物技术通报 2015年第7期31卷 161-168页

作者：翟颀黄兵董辉赵其平朱顺海梁思婷李莎杨斯涵韩红玉中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为构建柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP559基因的真核表达重组质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,并转染DF-1细胞进行表达。利用5'RACE技术克隆获得了柔嫩艾美耳球虫Et CHP559基因全长c DNA序列,该基因全长为1 746 bp,ORF为104-1 327 bp,... 详细信息

为构建柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP559基因的真核表达重组质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,并转染DF-1细胞进行表达。利用5'RACE技术克隆获得了柔嫩艾美耳球虫Et CHP559基因全长c DNA序列,该基因全长为1 746 bp,ORF为104-1 327 bp,编码407个氨基酸,编码蛋白的分子量约为46 k D,并利用生物信息学分析该基因编码蛋白的性质、结构等特征,发现该蛋白含有跨膜结构和信号肽。通过RT-PCR扩增得到含完整开放阅读框的基因片段,并将其与真核表达载体pc DNA3.1-flag连接,构建了真核重组表达质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,所构建的真核重组表达质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559经过PCR和双酶切鉴定,可见一条大小约为1 224 bp的目的条带;重组质粒转染DF-1细胞后,免疫印迹检测可见大小约为47 k D的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验显示在DF-1细胞中检测到绿色荧光。这些研究结果表明已成功获得了Et CHP559的全长序列,并成功构建了Et CHP559的真核重组表达质粒,在真核细胞DF-1中获得表达,为深入研究Et CHP559的功能奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 CHP559基因 DF-1细胞真核表达

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巴贝斯虫病研究进展

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动物医学进展 2013年第12期34卷 173-178页

作者：吴家俊周金林中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

巴贝斯虫病是一种由寄生于红细胞内的巴贝斯虫引起的人兽共患病,主要通过硬蜱进行传播。致病机理主要是染虫红细胞裂解导致溶血性贫血,在特殊情况下会进一步导致器官衰竭甚至死亡。对该病的诊断方法主要有血涂片观察、动物接种、ELISA... 详细信息

巴贝斯虫病是一种由寄生于红细胞内的巴贝斯虫引起的人兽共患病,主要通过硬蜱进行传播。致病机理主要是染虫红细胞裂解导致溶血性贫血,在特殊情况下会进一步导致器官衰竭甚至死亡。对该病的诊断方法主要有血涂片观察、动物接种、ELISA检测及核酸诊断等。该病的主要治疗方法为克林霉素和奎宁联用,另外,阿托伐醌与阿奇霉素联用在一些病例中展现了良好的治疗效果。现阶段对该病的预防措施主要为消灭硬蜱,加强公众对蜱的防范意识,同时由于该病能通过输血途径在人群中传播,因此有必要对输血人群进行血液检测,以减少人群感染的概率。

关键词：巴贝斯虫病致病机理诊断治疗预防

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宠物蜱传疾病流行概况和防控技术研究进展

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中国媒介生物学及控制杂志 2021年第3期32卷 257-264页

作者：韦娜娜张厚双周金林中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

蜱是专性吸血的体外寄生虫,也是人和动物的致病性病毒、细菌、真菌和原虫的传播媒介,因此,相关研究具有重要的公共卫生意义。近年来,宠物数量急剧增加,导致宠物蜱传人兽共患病发病率不断增高。该文从宠物常见寄生蜱类及特征、宠物常见... 详细信息

蜱是专性吸血的体外寄生虫,也是人和动物的致病性病毒、细菌、真菌和原虫的传播媒介,因此,相关研究具有重要的公共卫生意义。近年来,宠物数量急剧增加,导致宠物蜱传人兽共患病发病率不断增高。该文从宠物常见寄生蜱类及特征、宠物常见蜱传病原体及常见蜱传疾病流行情况和防控技术研究进展等方面作一综述,以期为宠物蜱传人兽共患病的综合防控提供参考。

关键词：蜱宠物蜱传疾病防控

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柔嫩艾美耳球虫伴侣蛋白TCP-1亚基α的特性和功能初步分析

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中国动物传染病学报 2018年第2期26卷 40-48页

作者：陈婷黄兵赵其平董辉朱顺海赵宗平吕凌严茗韩红玉中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

柔嫩艾美耳球虫是一种重要的寄生于鸡盲肠细胞内的寄生原虫,可引起危害严重的鸡球虫病。目前,对鸡球虫病的预防和治疗主要依靠抗球虫药,而药物的广泛使用使球虫产生了严重的耐药性。为研究球虫耐药性产生的机制,本实验室前期对诱导的地... 详细信息

柔嫩艾美耳球虫是一种重要的寄生于鸡盲肠细胞内的寄生原虫,可引起危害严重的鸡球虫病。目前,对鸡球虫病的预防和治疗主要依靠抗球虫药,而药物的广泛使用使球虫产生了严重的耐药性。为研究球虫耐药性产生的机制,本实验室前期对诱导的地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株和亲本敏感株进行转录组测序,经分析发现TCP-1亚基α为耐药株和敏感株的差异表达基因且在耐药株上调表达。本文以柔嫩艾美耳球虫敏感株为模板,成功克隆出TCP-1亚基α基因,构建了原核表达重组质粒p ET-Et TCP-1α,并成功诱导表达了重组蛋白r Et TCP-1α,用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔和BALB/C小鼠获得多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株TCP-1亚基α基因的m RNA转录和翻译水平,同时检测了该基因在球虫不同发育阶段的转录水平和翻译水平。结果显示,Et TCP-1α在2个耐药株的m RNA转录和蛋白翻译水平明显高于敏感株,而且该蛋白在第二代裂殖子的表达最高;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要位于子孢子和第二代裂殖子表面,当虫体入侵DF-1细胞进行裂殖生殖后,该蛋白分布于整个虫体,且表达量明显升高。因此,推测Et TCP-1α在柔嫩艾美耳球虫细胞内的生长发育和耐药性的产生过程中发挥了一定的作用。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 TCP-1亚基α 耐药性

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3种保虫宿主日本血吸虫特征性差异表达基因的筛选与验证

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第3期24卷 279-283页

作者：杨健美石耀军冯新港傅志强苑纯秀刘金明洪炀李浩陆珂林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

目的筛选日本血吸虫3种重要保虫宿主来源虫体的特征性差异表达基因,寻找可以用于鉴别这3种宿主来源虫体的遗传标记。方法日本血吸虫尾蚴人工感染黄牛、水牛和山羊,收集感染后49 d成虫,分别抽提RNA,逆转录成cD NA,体外转录为cRNA并进行... 详细信息

目的筛选日本血吸虫3种重要保虫宿主来源虫体的特征性差异表达基因,寻找可以用于鉴别这3种宿主来源虫体的遗传标记。方法日本血吸虫尾蚴人工感染黄牛、水牛和山羊,收集感染后49 d成虫,分别抽提RNA,逆转录成cD NA,体外转录为cRNA并进行片段化;采用定制的血吸虫芯片分别进行杂交,筛选每种宿主来源虫体的特征性差异表达基因。采用实时定量PCR法对所筛选差异表达基因的表达水平做进一步测定,验证芯片数据的结果,并对这些特征性差异表达基因进行验证。结果通过芯片杂交,分析筛选获得实验黄牛组来源虫体特征性差异表达基因3个,水牛组来源虫体4个,山羊组来源虫体7个。其中黄牛组2个、水牛组3个、山羊组5个特征性差异表达基因在另一批次3种宿主来源虫体的重复试验中得到验证。结论芯片杂交筛选出10个3种宿主来源虫体的特征性差异表达基因,这些基因可能可以作为这3种不同宿主来源虫体的遗传标记。

关键词：日本血吸虫保虫宿主芯片特征性差异表达基因

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几种动物来源的蜱携带的细菌和原虫的检测

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中国动物传染病学报 2021年第3期29卷 107-113页

作者：姚佳玲陈兆国龚海燕中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

蜱是一类呈全球分布,种类繁多,宿主广泛的嗜血性体外寄生虫,且携带和传播病毒、细菌、立克次体、螺旋体、寄生虫等170多种病原,给人类健康、畜牧业生产及野生动物生存带来极大威胁。我国地形复杂,气候多变,蜱种及其携带的微生物也繁杂... 详细信息

蜱是一类呈全球分布,种类繁多,宿主广泛的嗜血性体外寄生虫,且携带和传播病毒、细菌、立克次体、螺旋体、寄生虫等170多种病原,给人类健康、畜牧业生产及野生动物生存带来极大威胁。我国地形复杂,气候多变,蜱种及其携带的微生物也繁杂而难以防控。为了充分了解我国不同地区的动物体表蜱的种类及其携带的微生物和原虫,本研究对河北、河南、湖北及上海采集的蜱样本进行了分子生物学鉴定,并对蜱体内携带的微生物和原虫进行扩增子测序和分析。结果显示:动物体表获得的蜱共有4种,长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)、图兰扇头蜱(Rhipicephalus turanicus)、血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)和微小牛蜱(Rhipicephalus microplus);经16S rDNA测序分析,在所有蜱中共鉴定得到16个门的微生物类群,其中丰度最高的是变形菌门,其次为厚壁菌门和芽单胞菌门;所检测的蜱样本均携带葡萄球菌属等人兽共患病原菌和柯克斯体属共生菌;18S rDNA测序表明,河北犬羊及湖北牛体表的蜱均携带巴贝斯虫,而河北羊体表的蜱携带泰勒虫。此结果揭示了蜱种存在地域性差异,蜱携带微生物和原虫有感染当地动物和人的危险,为蜱及蜱传病的防控提供了警示信息。

关键词：蜱扩增子测序微生物原虫

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