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中国动物传染病学报 2023年第6期31卷 177-183页

作者：钟昊然金亚美中国农业科学院上海兽医研究所国家动物血吸虫病参考实验室农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200240

血吸虫病是一种严重危害人畜健康和社会经济发展的人兽共患寄生虫病。宿主感染日本血吸虫后,沉积于肝脏的虫卵分泌可溶性虫卵抗原(SEA)主要刺激肝星状细胞(HSC)产生免疫应答反应,导致细胞外基质(ECM)过度沉积,最终引起肝纤维化,造成宿... 详细信息

血吸虫病是一种严重危害人畜健康和社会经济发展的人兽共患寄生虫病。宿主感染日本血吸虫后,沉积于肝脏的虫卵分泌可溶性虫卵抗原(SEA)主要刺激肝星状细胞(HSC)产生免疫应答反应,导致细胞外基质(ECM)过度沉积,最终引起肝纤维化,造成宿主严重的病理损害。对于血吸虫病晚期患者,即使进行了彻底的杀虫治疗,肝纤维化仍会发展、恶化,而目前尚无有效针对肝纤维化的治疗策略,因此进行肝纤维化的机制研究将对血吸虫病的防治起到积极作用。本文从日本血吸虫病肝纤维化的形成与调节、日本血吸虫病肝纤维化的诊断与治疗等方面进行综述。

关键词：日本血吸虫肝纤维化发病机制信号通路诊断与治疗

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利用RNAi和表达谱芯片分析日本血吸虫Sj34.9基因的功能

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第2期24卷 127-131,145页

作者：刘萍萍石艳丽杨云霞刘金明林矫矫金亚美中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的分析日本血吸虫新基因Sj34.9的功能,为进一步研究该基因提供依据。方法采用RNA干扰(RNAi)技术对Sj34.9基因在血吸虫体内的表达进行干扰,利用血吸虫寡聚核苷酸表达谱芯片分析Sj34.9基因表达沉默后血吸虫基因的表达情况。结果 Sj34.9... 详细信息

目的分析日本血吸虫新基因Sj34.9的功能,为进一步研究该基因提供依据。方法采用RNA干扰(RNAi)技术对Sj34.9基因在血吸虫体内的表达进行干扰,利用血吸虫寡聚核苷酸表达谱芯片分析Sj34.9基因表达沉默后血吸虫基因的表达情况。结果 Sj34.9基因RNAi组与对照组相比,显著差异表达的基因共378个,其中上调基因202个,下调基因176个;通路分析显示,表达差异基因主要与信号转导、信号分子间相互作用及各类物质代谢有关;基因本体论分类结果显示,多数基因与分子间结合、膜构成、细胞过程和机体生长发育及代谢相关。结论 Sj34.9基因可能对日本血吸虫的形成、生长、发育、调节、代谢等具有重要作用。

关键词：日本血吸虫 RNA干扰(RNAi) 表达谱芯片基因表达

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用日本血吸虫重组抗原诊断牛血吸虫病的研究

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中国兽医科学 2008年第6期38卷 489-493页

作者：周伟芳林矫矫朱传刚石耀军刘金明中国农业科学院上海兽医研究所国家防治血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

为寻找可替代虫卵抗原(SEA)用于家畜血吸虫病血清学诊断的重组抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较了日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水区多肽重组蛋白LHD-Sj23和日本血吸虫SEA检测牛血吸虫病的敏感性和特异性。结果显示,SEA和LHD-Sj23作为... 详细信息

为寻找可替代虫卵抗原(SEA)用于家畜血吸虫病血清学诊断的重组抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较了日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水区多肽重组蛋白LHD-Sj23和日本血吸虫SEA检测牛血吸虫病的敏感性和特异性。结果显示,SEA和LHD-Sj23作为诊断抗原对189例血吸虫病牛和92例健康牛的阳性检出率分别为87.8%和90.5%,阳性符合率分别为93.5%和92.4%。两种抗原之间敏感性和特异性均无显著性差异(P>0.05)。提示,LHD-Sj23重组抗原可替代SEA用于家畜血吸虫病的血清学诊断。

关键词：牛血吸虫病重组抗原血清学诊断

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阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

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中国动物传染病学报 2016年第2期24卷 62-67页

作者：冯金涛韩愉袁炜张欣许瑞李浩陆珂金亚美林矫矫程国锋刘金明中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG三轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生... 详细信息

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG三轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。获得了9个EST序列,其中7个EST序列与已知基因或表达序列标签同源,2个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(open reading frame,ORF)为依据,对上述7个与Gen Bank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果 7个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中3个EST具有较高的重复度,在51个有效克隆中,25个为HSP70 homolog基因,15个为Keratin9基因有重复,6个为Ornithine--oxo-acid transaminase基因。研究结果显示,HSP70 homolog基因、Keratin9基因和Ornithine--oxo-acid transaminase基因作为诊断家畜血吸虫病候选抗原基因,值得进一步开展克隆、表达和诊断效果评估方面的研究。

关键词：日本血吸虫水牛黄牛筛选噬菌体展示c DNA文库

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日本血吸虫童虫裂解物对东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的筛选及阳性克隆分析

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生物工程学报 2008年第5期24卷 733-739页

作者：贾人初孙毅刘金明傅志强苑纯秀石耀军陆珂孙焕李浩金亚美林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 上海师范大学生命与环境科学学院上海200234

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,... 详细信息

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,获得了19条有效EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中4号(GenBank Accession No.:EW968294)、13号(GenBank Accession No.:EW968303)、14号(GenBank Accession No.:EW968304)、15号(GenBank Accession No.:EW968305)、18号(GenBank Accession No.:EW968308)克隆均诱导了显著的杀虫效果。综合生物信息学分析结果及体外杀伤试验结果,编码CASP8和FADD类似性细胞程序性死亡调节蛋白、α-2-HS-糖蛋白、M4蛋白、具有R3H结构域的一种mRNA结合蛋白以及三种未知蛋白的编码基因(14、15、18号克隆)可能是东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因。为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机理奠定了基础。

关键词：日本血吸虫东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库抗性基因

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东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫噬菌体展示抗原的免疫预防效果

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中国血吸虫病防治杂志 2010年第5期22卷 431-436页

作者：王素娟刘金明邢荣鹤李晔郭凡吉王艳石耀军陆珂林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性靶基因。方法选取利用东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示文库获得的4个阳性噬菌体克隆免疫小鼠,评估观察其对小鼠日本血吸虫病的免疫预防效果。结果与噬菌体对照组、佐剂对照组和PBS对... 详细信息

目的寻找东方田鼠抗日本血吸虫抗性靶基因。方法选取利用东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示文库获得的4个阳性噬菌体克隆免疫小鼠,评估观察其对小鼠日本血吸虫病的免疫预防效果。结果与噬菌体对照组、佐剂对照组和PBS对照组相比,1号克隆免疫组分别获得了28.23%、31.12%、29.86%的减虫率和51.73%、48.02%、55.58%的肝脏减卵率;4号克隆免疫组分别获得了24.28%、27.32%、26.00%的减虫率和45.52%、41.13%、49.86%的肝脏减卵率。结论 1号克隆展示的SJCHGC06713蛋白以及4号克隆展示的SJCHGC068068蛋白作为抗血吸虫疫苗值得进一步研究。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示抗原免疫东方田鼠

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噬菌体展示技术筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白分子受体

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第3期23卷 279-284页

作者：何金桃石艳丽刘萍萍刘金明石耀军林矫矫金亚美中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 东北农业大学动物医学学院

目的筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子。方法利用噬菌体展示技术,以融合表达的抱雌沟蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法筛选日本血吸虫44d成虫噬菌体展示cDNA文库。结果得到70条有效表达序列标签,对其进行聚类分析、同源性搜索与功能预... 详细信息

目的筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子。方法利用噬菌体展示技术,以融合表达的抱雌沟蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法筛选日本血吸虫44d成虫噬菌体展示cDNA文库。结果得到70条有效表达序列标签,对其进行聚类分析、同源性搜索与功能预测等生物信息学分析,获得5个与血吸虫抱雌沟蛋白有相互作用的蛋白或多肽。结论采用筛选噬菌体展示文库的方法成功获得抱雌沟蛋白相互作用分子。

关键词：日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示文库

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日本血吸虫Sjzfp1基因的克隆表达及其表达产物的免疫效果

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中国兽医科学 2010年第8期40卷 835-841页

作者：邢荣鹤宋震宇刘金明王素娟石耀军李浩林矫矫岳城新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241

以PCR技术从日本血吸虫成虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆日本血吸虫锌指蛋白编码基因Sjzfp1以及181～786bp的DNA片段,分别以pGEX-4T和pET-28a(+)为表达载体制备重组抗原rSjzfp1/GST和rSjzfp1-1/His。将重组抗原与206佐剂混合后免疫小鼠,... 详细信息

以PCR技术从日本血吸虫成虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆日本血吸虫锌指蛋白编码基因Sjzfp1以及181～786bp的DNA片段,分别以pGEX-4T和pET-28a(+)为表达载体制备重组抗原rSjzfp1/GST和rSjzfp1-1/His。将重组抗原与206佐剂混合后免疫小鼠,观察免疫预防效果。利用实时荧光定量PCR法检测Sjzfp1在不同发育期虫体中的表达情况。结果显示,获得了日本血吸虫Sjzfp1基因全长序列,其ORF为1017bp,编码338个氨基酸,推导的理论分子质量为38.5ku。生物信息学分析显示Sjzfp1为日本血吸虫环形锌指蛋白或PHD型锌指蛋白。以rSjzfp1/GST和rSjzfp1-1/His免疫小鼠,诱导的减虫率分别为50.43%和17.85%,肝虫卵减少率分别为72.64%和15.96%。实时荧光定量PCR分析表明Sjzfp1基因在各发育期虫体中均有表达,其中在尾蚴和毛蚴中表达量较高,在终末宿主体内各发育期虫体中,以42d成虫表达量最高。结果表明,Sjzfp1基因在抗血吸虫疫苗研究中具有进一步研究的潜力。

关键词：日本血吸虫 Sjzfp1基因克隆表达免疫保护

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东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 963-968页

作者：宋震宇刘金明何金桃孙帅石耀军李浩陆珂林矫矫岳城新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

本研究利用前期研究中东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库获得的10个阳性克隆中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。研究发现与... 详细信息

本研究利用前期研究中东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库获得的10个阳性克隆中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。研究发现与空白对照组相比,展示血吸虫锌指蛋白的1号噬菌体克隆免疫组在两次实验中分别获得了32.10%和31.25%的减虫率、61.14%和47.31%的肝脏减卵率,虫体合抱率分别由92.59%、57.39%下降到69.09%、41.03%;其它噬菌体克隆单独免疫组或联合免疫组在第一次实验中均获得了8.02%～32.72%的减虫率和40.19%～69.53%的减卵率,但在第二次实验中未能得到验证。研究结果提示,日本血吸虫环状锌指蛋白(1号克隆)编码基因在疫苗方面具有重要研究价值。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示抗原免疫环状锌指蛋白

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日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶编码基因表达及诊断应用

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中国血吸虫病防治杂志 2009年第6期21卷 464-467页

作者：孙帅刘金明宋震宇王素娟邢荣鹤石耀军李浩陆珂林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、国家防治动物血吸虫病专业实验室、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32),探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28(a)为表达载体,用大肠埃希菌表达,制备重组抗原(rSj32);应用E... 详细信息

目的克隆和表达日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶(Sj32),探索该重组抗原在动物血吸虫病诊断方面的应用潜能。方法用PCR法从Sj32前体编码基因中克隆编码成熟体的基因片段,以pET-28(a)为表达载体,用大肠埃希菌表达,制备重组抗原(rSj32);应用ELISA方法检测待检血清,并比较rSj32、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)以及重组诊断抗原rSj23对人工感染兔、小鼠及水牛血吸虫病的检测效果。结果成功表达了Sj32成熟体,表达产物rSj32的分子量为41 kDa,可用H is柱纯化,得率约为68.8 mg/L培养物。用rSj32检测人工感染兔、小鼠和水牛血清以及对照兔、小鼠和水牛血清,特异性分别为100.0%、96.7%和96.9%,敏感性分别为88.9%、85.0%和71.8%,该抗原对牛血清的敏感性略低于SEA和rSj23,其余检测结果三者相比无显著差异。结论rSj32在诊断动物血吸虫病方面具有研究和应用价值。

关键词：日本血吸虫天冬酰胺酰基内肽酶重组抗原酶联免疫吸附试验诊断

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