检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2014年第12期44卷 1268-1272页

作者：蒋蔚陈永军刘迎春杨康王权中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室上海200241

为了研究抗猪流感病毒的单链抗体(scFv)在真核细胞内的表达情况及其生物学特性,通过PCR从前期试验获得的重组噬粒中扩增出scFv基因,将其克隆到真核表达载体p3×FLAG-CMV-7.1中,测序验证后转染A549细胞进行表达,对表达蛋白进行特性... 详细信息

为了研究抗猪流感病毒的单链抗体(scFv)在真核细胞内的表达情况及其生物学特性,通过PCR从前期试验获得的重组噬粒中扩增出scFv基因,将其克隆到真核表达载体p3×FLAG-CMV-7.1中,测序验证后转染A549细胞进行表达,对表达蛋白进行特性分析。结果显示,scFv基因的核苷酸序列的长度为732bp,序列排列方式为VH-Linker-VL,与数据库比对结果表明,符合小鼠抗体的重链和轻链可变区基因的结构特征。间接免疫荧光试验的结果表明,细胞内表达的绿色荧光蛋白主要分布在细胞质中。Westernblot分析显示,转染细胞的培养液上清和细胞裂解液上清中均可检测到一约32.8ku的融合蛋白,与预测结果一致。ELISA结果表明,表达的scFv具有结合猪流感病毒的活性。结果证实,抗猪流感病毒的scFv能够在细胞内正确表达,为进一步对抗猪流感的免疫治疗及免疫检测的研究提供了依据。

关键词：猪流感病毒单链抗体真核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫蛋白酶体α2亚基基因的克隆、表达及功能分析

引用

生物工程学报 2010年第4期26卷 509-516页

作者：洪炀韩宏晓彭金彪李晔石耀军傅志强刘金明李祥瑞林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 南京农业大学动物医学院南京210095

26S蛋白酶体是一种能够降解大多数内源性蛋白的多亚基复合物,它的蛋白降解作用能够影响细胞周期、转录控制和其他一些重要的细胞进程。本实验利用PCR技术从日本血吸虫18d童虫中首次扩增到蛋白酶体α2亚基基因(GenBank Accession ***8137... 详细信息

26S蛋白酶体是一种能够降解大多数内源性蛋白的多亚基复合物,它的蛋白降解作用能够影响细胞周期、转录控制和其他一些重要的细胞进程。本实验利用PCR技术从日本血吸虫18d童虫中首次扩增到蛋白酶体α2亚基基因(GenBank Accession ***813725),序列分析表明该基因的开放阅读框(ORF)含708bp,编码235个氨基酸,理论分子量25.84kDa。同源性分析结果显示,该基因为日本血吸虫蛋白酶体α2亚基,命名为SjPSMA2。实时定量PCR分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d和42d虫体中都有表达,7d和23d虫体表达量低于其他几个时期。构建了该基因的原核表达质粒pET28a(+)-SjPSMA2,在大肠杆菌系统中成功获得了表达,重组蛋白以包涵体形式存在,Western blotting显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别,并且能检测到天然状态下该蛋白的存在。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了较高的特异性抗体水平及12.33%的减虫率和35.23%的肝脏减卵率。SjPSMA2基因及其表达产物的获得,为探索蛋白酶体在血吸虫生长发育中的作用提供了重要基础。

关键词：日本血吸虫蛋白酶体α2亚基克隆表达免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫SjIrV1的基因特性及免疫保护效果

引用

生物工程学报 2013年第7期29卷 891-903页

作者：魏梅梅熊雅念洪炀黄莉妮孟培培艾德宙张旻傅志强刘升发林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241 厦门大学生命科学学院福建厦门361005

钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列,BLAST分析与菲律宾株日本... 详细信息

钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列,BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1 cDNA编码序列一致,荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达,其中在35 d和42 d成虫中表达量较高,在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒pET28a(+)-SjIrV1,在大肠杆菌中成功诱导表达,重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过高效液相色谱法(RP-HPLC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹(Western blotting)分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别,SjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果表明SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。

关键词：日本血吸虫钙结合蛋白表达免疫原性免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

包裹双链RNA的壳聚糖纳米粒子的制备和初步抗蜱作用

引用

中国动物传染病学报 2022年第6期30卷 59-67页

作者：罗莉张厚双王亚楠曹杰周勇志周金林中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为了开发简便、环境友好的新型抗蜱制剂,本研究在前期发现镰形扇头蜱ATG5基因的双链RNA具有显著干扰作用的基础上,构建了一种携载双链RNA(dsRNA)的壳聚糖纳米粒子,用于抗蜱作用研究。在壳聚糖分子中引入二硫键,制备得到了由聚乙二醇(PEG... 详细信息

为了开发简便、环境友好的新型抗蜱制剂,本研究在前期发现镰形扇头蜱ATG5基因的双链RNA具有显著干扰作用的基础上,构建了一种携载双链RNA(dsRNA)的壳聚糖纳米粒子,用于抗蜱作用研究。在壳聚糖分子中引入二硫键,制备得到了由聚乙二醇(PEG)修饰的具有还原刺激响应性的壳聚糖纳米粒子,即PEG-(CS-SS-CS)。该纳米具有表面积大、吸附能力强、能够在蜱体内还原性环境中快速释放药物等特点。通过静电相互作用,吸附带负电的dsRNA,形成载药复合纳米粒子,即:PEG/(CS-SS-CS)/dsRNA。其结合效率高达77.62%±5.77%,微观形貌为球形,平均粒径为200.80±2.04 nm。红外光谱图结果显示,壳聚糖纳米粒子中含有二硫键,具有还原刺激响应性,增强其体外稳定性,有效避免dsRNA的体外降解。初步抗蜱实验表明,当浸染蜱的双链RNA的壳聚糖纳米浓度为10 ng/μL时,严重影响蜱的正常吸血,显示了较好的抗蜱效果,这些结果为新型抗蜱制剂的开发提供了新思路。

关键词：蜱壳聚糖纳米粒子 RNA干扰二硫键

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2_(L2)特性与功能初步分析

引用

中国动物传染病学报 2024年第4期32卷 1-10页

作者：刘曼玉朱顺海赵其平贾刘数肖克赵焕之于钰黄兵韩红玉董辉中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241

利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—Et RON2_(L2)的特性和功能进行研究。结果发现Et RON2_(L2)氨基酸序列与常规的Et RON2仅有26.63%的同源性,mRNA水... 详细信息

利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—Et RON2_(L2)的特性和功能进行研究。结果发现Et RON2_(L2)氨基酸序列与常规的Et RON2仅有26.63%的同源性,mRNA水平在第二代裂殖子中最高,而蛋白水平在第二代裂殖子和子孢子阶段最高;Et RON2_(L2)在游离的第二代裂殖子和子孢子阶段主要分布于胞质,而在入侵后子孢子中主要分布于虫体表面;抗rEt RON2_(L2)多克隆血清处理组明显抑制子孢子入侵细胞;Et RON2_(L2)与EtAMA3之间存在互作关系。本研究为探究Et RON2_(L2)在球虫入侵过程中的作用机制奠定基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2 相互作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

马属(Equus)动物球虫种类与世界分布

引用

中国动物传染病学报 2023年第2期31卷 229-236页

作者：黄兵董辉赵其平韩红玉朱顺海赵焕之于珏中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241

为了解马属(Equus)动物球虫的种类及在世界各地的分布状况,本文收集整理了世界上有关马属动物球虫报道的相关文献,按虫种学名的字母为序,介绍了已报道的4种马属动物球虫,其中艾美耳属(Eimeria)3种、克氏孢子虫属(Klossiella)1种,每种球... 详细信息

为了解马属(Equus)动物球虫的种类及在世界各地的分布状况,本文收集整理了世界上有关马属动物球虫报道的相关文献,按虫种学名的字母为序,介绍了已报道的4种马属动物球虫,其中艾美耳属(Eimeria)3种、克氏孢子虫属(Klossiella)1种,每种球虫包括中文名称与学名、宿主名称、寄生部位、地理分布,地理分布按照国家和地区的英文或拼音字母为序。在收录的45个国家记录马属动物球虫中,土耳其记录4种,俄罗斯记录3种,澳大利亚等14个国家记录2种,阿尔巴尼亚等29个国家记录1种;有40个国家记录了鲁氏艾美耳球虫(***),16个国家记录了马克氏孢子虫(***),5个国家记录了单蹄兽艾美耳球虫(***),3个国家记录了奇蹄兽艾美耳球虫(***)。另外,在秘鲁、伊拉克、斯里兰卡、马其顿、莱索托的马粪便中均检出艾美耳球虫未定种,其感染率为1.63%~54.54%。本文基本能反映出马属动物球虫在世界范围的分布状况,为全面了解马属动物球虫的种类与地理分布提供了一份较为完整的基础资料。

关键词：马属球虫艾美耳球虫克氏孢子虫种类分布

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫保守蛋白EtCHP35特性和功能初步研究

引用

中国动物传染病学报 2024年第5期32卷 11-21页

作者：张思诗姚亚文朱顺海赵其平董辉于钰黄兵韩红玉中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241

鸡球虫病是由几种艾美耳属寄生虫寄生引起的一种家禽肠道疾病。目前,对于该病控制仍然主要依赖于抗球虫药物,但长期广泛地使用药物造成了球虫耐药性的产生。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株... 详细信息

鸡球虫病是由几种艾美耳属寄生虫寄生引起的一种家禽肠道疾病。目前,对于该病控制仍然主要依赖于抗球虫药物,但长期广泛地使用药物造成了球虫耐药性的产生。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫保守蛋白35(EtCHP35)在盐霉素耐药株和马杜拉霉素耐药株mRNA转录水平显著上调。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆了柔嫩艾美耳球虫保守蛋白35(EtCHP35)基因,并在原核表达系统中成功表达了重组蛋白(rEtCHP3)。利用实时荧光定量PCR分析了该基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段以及不同虫株(敏感株和耐药株)的mRNA转录水平,结果显示EtCHP35基因在敏感株孢子化卵囊的mRNA转录水平最高;与敏感株相比,EtCHP35的mRNA转录水平在马杜拉霉素耐药株和盐霉素耐药株上调,但在地克珠利耐药株mRNA转录水平无差异,且随着盐霉素耐药株浓度的升高,EtCHP35的mRNA转录水平也升高。间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子和第二代裂殖子的表面和顶部。因此,推测该蛋白可能参与了虫体在宿主体内的生长发育、对宿主细胞的识别附着、逃避宿主免疫应答以及球虫对离子载体类药耐药性产生的过程。

关键词：柔嫩艾美耳球虫保守蛋白免疫逃逸耐药性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫4个基因启动子相关序列的克隆和初步研究

引用

中国血吸虫病防治杂志 2013年第3期25卷 246-249页

作者：罗荣郭素霞石耀军程国锋中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的比较4个日本血吸虫基因启动子相关序列对荧光素报告基因的表达情况。方法利用PCR技术扩增4个日本血吸虫基因启动子的相关序列,并利用常规分子生物学技术将PCR产物克隆到荧光素酶报告基因的上游。利用脂质体转染和电穿孔技术将纯化... 详细信息

目的比较4个日本血吸虫基因启动子相关序列对荧光素报告基因的表达情况。方法利用PCR技术扩增4个日本血吸虫基因启动子的相关序列,并利用常规分子生物学技术将PCR产物克隆到荧光素酶报告基因的上游。利用脂质体转染和电穿孔技术将纯化的重组质粒分别转染到HEK293细胞和日本血吸虫体内,并以荧光素酶检测系统测定了报告基因表达情况。结果PCR扩增获得了日本血吸虫卵壳蛋白(Eggshell protein,ESG-2A)、延伸因子1(Elongation factor 1 alpha 1,EF)、烯醇酶(Enolase,EN)和抱雌沟蛋白(Gynecophornal canal protein,GCP)基因的启动子相关序列,并将它们成功地克隆到pGlu-Basic载体。重组质粒转染表明4个日本血吸虫启动子相关序列均可驱动荧光素酶报告基因在HEK293细胞和日本血吸虫虫体表达。其中含有GCP和EN启动子相关序列的重组质粒可在HEK293细胞及其培养基中检测到较高的荧光素酶活性,含有GCP和ESG的重组质粒可在日本血吸虫虫体培养基中检测到较高的荧光素酶活性。结论获得的4个日本血吸虫启动子相关序列均可驱动荧光素酶报告基因在HEK293细胞和日本血吸虫虫体表达,为进一步利用这些启动子相关序列开展血吸虫基因操作研究奠定了初步基础。

关键词：日本血吸虫启动子基因操作报告基因克隆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

弓形虫新的表面抗原SRS20A的鉴定及特征化

引用

中国动物传染病学报 2023年第5期31卷 93-100页

作者：林晓幸李威曹杰周勇志王亚楠周金林张厚双中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室上海200241

克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因,构建原核表达体系,通过诱导表达和蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对蛋白进行特征化鉴定。采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠埃希菌(***),IPTG诱导目的... 详细信息

克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因,构建原核表达体系,通过诱导表达和蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对蛋白进行特征化鉴定。采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠埃希菌(***),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,使用弓形虫阳性血清检测SRS20A蛋白的反应原性,应用纯化的rSRS20A蛋白通过ELISA方法对猪临床样品进行检测,利用Western blot技术检测多克隆抗体与弓形虫天然蛋白的反应性,通过间接免疫荧光观察SRS20A蛋白在虫体内的定位情况。成功从弓形虫基因组中扩增出SRS20A目的基因,构建了pET-30a-SRS20A重组质粒,利用小鼠感染弓形虫的阳性血清可以特异性识别重组蛋白rSRS20A,ELISA试验表明rSRS20A可以与猪临床血清特异性反应,证明SRS20A具有良好的反应原性。制备并获得了抗SRS20A重组蛋白的多克隆抗体,通过Western blot可检测出弓形虫天然蛋白SRS20A的特异性条带。通过间接免疫荧光方法鉴定SRS20A蛋白定位在弓形虫速殖子表面。通过分子生物学方法鉴定及特征化了一个新的弓形虫速殖子表面抗原SRS20A,为进一步深入研究弓形虫SRS20A功能奠定基础。

关键词：弓形虫 SRS20A 鉴定特征化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达

引用

生物技术通报 2011年第5期27卷 108-113页

作者：姜连连林矫矫韩红玉董辉赵其平朱顺海马卫娇程军曾艳波黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583。该基因全长为... 详细信息

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583。该基因全长为862 bp,开放阅读框(ORF)为486 bp,编码161个氨基酸,编码蛋白的分子量约为16.9 kD,利用生物信息学分析软件,分析新基因所编码蛋白的性质、定位、结构等特征。利用荧光定量PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段该基因的表达量进行分析显示,子孢子阶段的表达高于其他发育阶段。将ZL583克隆于pET-28a中构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,获得重组蛋白分子量约23 kD。免疫印迹分析显示该重组蛋白可与兔抗子孢子血清发生特异性反应,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫子孢子裂殖子克隆表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：