检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 311-317页

作者：金亚美林矫矫冯新港张亮吴祥甫周元聪蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室

根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白基因SmGcp序列和日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区的基因片段SjGcp1分别设计三对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 1949bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段含编码日本... 详细信息

根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白基因SmGcp序列和日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区的基因片段SjGcp1分别设计三对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 1949bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段含编码日本血吸虫抱雌沟蛋白基因的完整阅读框 ,与SmGcp碱基一致性为 85 % ,其理论推测氨基酸组成与曼氏血吸虫抱雌沟蛋白的一致性为 83.7%。将上述扩增的基因片段克隆到表达载体pET2 8c(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得表达 ,融合表达产物分子量约为 80kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,说明该编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因的表达产物具有抗原性

关键词：日本血吸虫抱雌沟蛋白基因克隆基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

柔嫩艾美耳球虫HSP基因的克隆、表达及鉴定

引用

生物工程学报 2009年第8期25卷 1121-1129页

作者：颜彦韩红玉黄兵赵其平董辉姜连连李玉剑樊玉娟姚倩中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为研究柔嫩艾美耳球虫热激蛋白(Heat shock proteins,HSPs)的生物学特性,应用RACE和RT-PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫子孢子中首次克隆获得了EtHSP的全长cDNA(GenBank Accession ***911605)。EtHSP包含一个1455 bp的开放阅读框,编码484个氨... 详细信息

为研究柔嫩艾美耳球虫热激蛋白(Heat shock proteins,HSPs)的生物学特性,应用RACE和RT-PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫子孢子中首次克隆获得了EtHSP的全长cDNA(GenBank Accession ***911605)。EtHSP包含一个1455 bp的开放阅读框,编码484个氨基酸,预测表达蛋白的分子量大小为53.5 kD。应用Real-time PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析,发现该基因在子孢子阶段的表达明显高于其他阶段。同时,构建了原核表达重组质粒pET28a(+)-EtHSP,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。结果显示,重组质粒pET28a(+)-EtHSP在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经1 mmol/L IPTG诱导6 h后的表达量最高,该蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美球虫热激蛋白发育阶段免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析

引用

生物工程学报 2010年第3期26卷 317-323页

作者：彭金彪韩宏晓洪炀王艳郭凡吉石耀军傅志强刘金明程国锋林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cD... 详细信息

本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cDNA,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665。荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白。利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为672bp。经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18d童虫期表达量最高,32d次之。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5kDa。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率。本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。

关键词：日本血吸虫 Cyclophilin B(CyPB) 克隆和表达免疫保护效果

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫重组抗原SjPGAM-SjEnol的保护性免疫效果评价

引用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第4期28卷 246-251页

作者：郭凡吉王艳李晔彭金彪洪炀邱春辉陈实傅志强石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（*** BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表... 详细信息

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（*** BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a（＋）-SjPGAM-SjEnol,并在*** BL21中表达。用蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol（A组）、pET28a-SjPGAM（B组）、pET28a-SjEnol（C组）（各27μg）与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组（D组）和空白对照组（E组）。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数（EPG）,计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量（Mr）为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组（18.5%）、C组（14.7%）比较,差异有统计学意义（均P〈0.05）;肝减卵率与B组（47.5%）、C组（30.5%）比较,差异也有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平（2.372±0.268）,与D组（0.490±0.138）、E组（0.220±0.088）间的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论成功构建了重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol,多表位重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol在小鼠抗血吸虫感染中比单一重组抗原pET28a-SjPGAM和pET28a-SjEnol诱导了更高的免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶烯醇酶多表位疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫凋亡基因Sjcaspase3的克隆、真核表达及其功能分析

引用

生物工程学报 2016年第7期32卷 889-900页

作者：王涛洪炀韩宏晓吕超贾秉光曹晓丹韩倩陆珂李浩傅志强林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为深入研究日本血吸虫细胞凋亡机制。利用PCR技术扩增得到Sjcaspase3的全长序列,其ORF含900 bp,编码299个氨基酸,理论分子量为33 509.7 Da,理论等电点为6.39。Real-time PCR分析表明该基因在日本血吸虫生长发育的各个时期均有表达,其中2... 详细信息

为深入研究日本血吸虫细胞凋亡机制。利用PCR技术扩增得到Sjcaspase3的全长序列,其ORF含900 bp,编码299个氨基酸,理论分子量为33 509.7 Da,理论等电点为6.39。Real-time PCR分析表明该基因在日本血吸虫生长发育的各个时期均有表达,其中21 d表达量最高,42 d雌虫表达量高于42 d雄虫。成功构建了p XJ40-FLAG-Sjcaspase3重组质粒并转染到Hela细胞内,荧光定量PCR和Western blotting分析表明Sjcaspase3成功在Hela细胞中表达。酶活分析提示重组Sjcaspase3具有切割特异性底物天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(DEVD)的活性。流式细胞术检测了Sjcaspase3可诱导Hela细胞发生早期细胞凋亡。研究结果为深入探讨Sjcaspase3的生物学功能及日本血吸虫细胞凋亡机制奠定了基础。

关键词：日本血吸虫 caspase3 细胞凋亡酶活细胞流式

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白编码基因的克隆和表达

引用

生物化学与生物物理学报 2000年第5期32卷 545-549页

作者：朱建国林矫矫冯新港吴祥甫周元聪蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室!上海200232 中国科学院上海生物化学研究所上海200031中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室!上海200232中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫

根据曼氏血吸虫肌动蛋白基因SmAct2设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出一大小为 1131bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框基因 ,与SmAct2碱基同源性为 92 %。将... 详细信息

根据曼氏血吸虫肌动蛋白基因SmAct2设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出一大小为 1131bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框基因 ,与SmAct2碱基同源性为 92 %。将其克隆到表达载体 pET2 8a(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得了较高量的表达 ,融合表达产物分子量约为 47kD。利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,说明所克隆的基因为编码日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白基因。

关键词：日本血吸虫肌动蛋白基因克隆基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究

引用

中国农业科学 2010年第7期43卷 1531-1538页

作者：彭金彪韩宏晓洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一ES... 详细信息

【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一EST序列的基因全长cDNA,提交到NCBI,登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了Sj CyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为519bp。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在13d童虫表达量最高,为童虫期高表达基因。构建了重组表达质粒pET28a(+)-Sj CyPA,并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活性。Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPA基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPA原核重组表达质粒,在大肠杆菌中成功表达,纯化复性得到有PPIase活性的Sj CyPA重组蛋白,并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。

关键词：日本血吸虫 Cyclophilin A(CyPA) 克隆和表达 PPIase活性免疫保护效果

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶SjPGAM基因的克隆、表达及功能分析

引用

生物工程学报 2008年第9期24卷 1550-1555页

作者：周岩林矫矫姚利晓王欣之石耀军陆珂刘金明傅志强陶丽红中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室

磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyceratemutas)是糖酵解过程中的一种重要酶,主要催化3-磷酸甘油酸转化为2-磷酸甘油酸。利用PCR技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个PGAM家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含753bp,编码250个氨基... 详细信息

磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyceratemutas)是糖酵解过程中的一种重要酶,主要催化3-磷酸甘油酸转化为2-磷酸甘油酸。利用PCR技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个PGAM家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含753bp,编码250个氨基酸,理论分子量28.26kD,理论等电点7.01。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型PGAM家族特征,推测为血吸虫的PGAM基因,命名为SjPGAM(GenBank Accession ***374631)。实时定量PCR分析显示该基因在14d和19d童虫中的表达量明显高于其他发育阶段,42d雄虫中的表达量高于雌虫。构建了该基因的原核重组表达质粒pET-28a(+)-PGAM,在大肠杆菌系统中成功获得了表达,重组蛋白以包涵体形式存在,Western blotting显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。SjPGAM基因及其表达产物的获得,为探索PGAM基因家族在血吸虫能量代谢过程中碳水化合物转运、新陈代谢调节和生长发育提供了重要基础。

关键词：日本血吸虫糖酵解磷酸甘油酸变位酶克隆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt-4基因的克隆、表达及功能分析

引用

生物工程学报 2007年第3期23卷 392-397页

作者：陶丽红姚利晓傅志强冯新港刘金明石耀军苑纯秀蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。... 详细信息

由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp,编码436个氨基酸,理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征,与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43%、37%,推测为血吸虫的Wnt4基因,命名为Sjwnt4(GenBank登陆号DQ643829)。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达,其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段,44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX-4T-2-Sjwnt4,应用大肠杆菌系统进行了表达,表达蛋白以包涵体形式存在,Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得,为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。

关键词：日本血吸虫信号转导 Wnt4 发育差异表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡艾美耳球虫单卵囊分离与种类鉴定

引用

复旦学报（自然科学版） 2007年第6期46卷 930-936页

作者：王鑫黄兵赵其平韩静芳韩红玉董辉姜连连中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

为了建立鸡球虫纯株,选用1-5日龄雏鸡,采用琼脂块单卵囊分离法对实验室保存的6种11株鸡球虫进行纯化,并选用2周龄雏鸡,对每个虫种/株选取1个单卵囊分离物进行增殖和种类鉴定.结果单卵囊接种179只,获得单卵囊分离物42个,单卵囊分离成功率... 详细信息

为了建立鸡球虫纯株,选用1-5日龄雏鸡,采用琼脂块单卵囊分离法对实验室保存的6种11株鸡球虫进行纯化,并选用2周龄雏鸡,对每个虫种/株选取1个单卵囊分离物进行增殖和种类鉴定.结果单卵囊接种179只,获得单卵囊分离物42个,单卵囊分离成功率23.46%;对11个单卵囊分离物,通过测定寄生部位、潜在期、孢子化卵囊大小、形状指数（长/宽）、孢子囊大小、最短孢子化时间等指标,鉴定出1个分离物为堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）、2个分离物为柔嫩艾美耳球虫（***）、6个分离物为巨型艾美耳球虫（***）、1个分离物为变位艾美耳球虫（***）、1个分离物为毒害艾美耳球虫（***）.本研究表明琼脂块单卵囊分离法简便易行、成功率较高,同时提示实验室保存的布氏艾美耳球虫（***）被柔嫩艾美耳球虫污染.

关键词：鸡球虫艾美耳球虫单卵囊

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：